Geri Dön

Bacillus sp. kaynaklı pullulanaz enzimini kodlayan genin klonlanması ve ekspresyonu üzerine çalışmalar

Studies on cloning and expression of the gene encoding pullulanase from Bacillus sp.

PDF İndir

  1. Tez No: 334967
  2. Yazar: FİDAN ERDEN
  3. Danışmanlar: YRD. DOÇ. DR. BARÇIN KARAKAŞ
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Gıda Mühendisliği, Food Engineering
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2012
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Akdeniz Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 103

Özet

Bu çalışmada Bacillus sp. kaynaklı pullulanaz geninin izole edilmesi ve Pichia pastoris'te pullulanaz enziminin rekombinant üretimi üzerine çalışılmıştır. Gen kaynağı olarak, daha önce tamamlanmış bir çalışma ile sünmüş ekmekten izole edilmiş olan Bacillus suşları taranmıştır. Pullulanaz geni, moleküler biyoloji yöntemleri kullanılarak B. subtilis BK07 izolatında bulunmuştur ve izole edilmiştir. Elde edilen genin C-ucuna PZR yolu ile çoklu histidin etiketi eklenmiştir. Histidin etiketli gen, pPICZ?A vektörüne bağlanmış ve P. pastoris KM71H suşuna aktarılmıştır. Ardından metanol indüksiyonlu protein üretimi gerçekleştirilmiştir. Çalışmada B. subtilis PY22 suşu pozitif kontrol olarak kullanılmış ve analizler bu suş için de eş zamanlı olarak gerçekleştirilmiştir.P. pastoris'te üretilen BK07 ve PY22 pullulanaz enzimlerinin optimum çalıştığı koşullar, sırası ile pH8-40°C ve pH6-40° olarak saptanmıştır. BK07 pullulanaz aktivitesi 8,46 U/ml, PY22 pullulanaz aktivitesi 2,95 U/ml olarak tespit edilmiştir. Spesifik enzim aktiviteleri ise sırası ile 144 U/mg ve 51 U/mg olarak saptanmıştır. SDS-PAGE ve Western blot analizleri BK07 pullulanazının moleküler ağırlığının yaklaşık 81 kDa, PY22 pullulanazının ise yaklaşık 90 kDa olduğunu göstermiştir.ANAHTAR KELİMELER: Pullulanaz, Pichia pastoris, Bacillus sp., Rekombinant protein üretimi

Özet (Çeviri)

This study focuses on isolation of the pullulanase gene from Bacillus sp. and recombinant production of the enzyme in Pichia pastoris. Bacillus strains isolated from ropey bread in a previous study were screened as sources of the gene and B. subtilis BK07 was used as the gene source. Pullulanase gene which was amplified with PCR to include a polyhistidine tag was transformed into P. pastoris KM71H yeast using the pPICZ?A vector and the enzyme production was achieved by methanol induced expression. In all steps, B. subtilis PY22 was used as positive control of the analysis.Optimum pH and temperature conditions for BK07 and PY22 pullulanase were investigated. Optimum pH and temperature was found as pH8-40°C and pH6-40°C, respectively. BK07 pullulanase activity was determined as 8.46 U/ml in supernatant and specific activity of the enzyme was calculated as 144 U/mg. PY22 pullulanase activity was determined as 2.95 U/ml in supernatant and specific activity of the enzyme was calculated as 51 U/mg. SDS-PAGE and Western blot analysis showed that the molecular weight of the recombinant enzyme BK07 pullulanase and PY22 pullulanase were determined to be about 81 kDa and 90 kDa, respectively.KEYWORDS: Pullulanase, Pichia pastoris, Bacillus sp., Recombinant protein production

Benzer Tezler

  1. Tez No

    255024

    İnek sütünden izole edilen Bacillus sp.'den pullulanaz ve alfa-amilaz enzimlerinin üretimi, bu enzimlerin bazı optimizasyon koşullarının belirlenmesi

    Production of pullulanase and alfa-amylase enzymes from Bacillus sp. isolated from cow milk, determination of some optimization conditions of these enzymes

    ERCAN ÇINAR

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2007

    KimyaDicle Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. ZÜBEYDE BAYSAL

  2. Tez No

    510650

    Production of recombinant amylopullulanase enzyme from Thermoanaerobium brockii brockii

    Thermoanaerobium brockii brockii kaynaklı amilopullulanaz enziminin rekombinant üretimi

    HANDE MUMCU

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2018

    Biyoteknolojiİstanbul Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. NEVİN GÜL-KARAGÜLER

  3. Tez No

    334981

    Farklı kaynaklardan Bacıllus sp. izolasyonu ve biyokimyasal karakterlerinin belirlenmesi

    Isolation of Bacillus sp. from different sources and determination of biochemical characteristic

    ŞAKİRE HANOĞLU

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2013

    BiyolojiAfyon Kocatepe Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. SAFİYE ELİF KORCAN

  4. Tez No

    224171

    Çeşitli kaynaklardan izole edilen bacillus sp. izolatlarının kitosanaz aktivitesinin ve antifungal etkisinin belirlenmesi

    Investigation of chitosanase activity and antifungal effect of bacillus strains isolated from different sources

    ÖZLEM İMAMOĞLU

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2008

    BiyomühendislikEge Üniversitesi

    Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. RENGİN ELTEM

  5. Tez No

    360657

    Toprak bakterilerinden selülaz-free ksilanaz enziminin üretimi, izolasyonu, kısmi karakterizasyonu ve enzimin endüstriyel uygulamalarda kullanılabilirliğinin araştırılması

    Production, isolation, and partial characterization of the cellulase free xylanase enzyme from soil bacteria and determination of usage possibilities in industrial applications

    SEDAT KÖSTEKCİ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2014

    BiyolojiKahramanmaraş Sütçü İmam Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. ASHABİL AYGAN

Geri Dön