Geri Dön

Pichia pastoris pıb4a sekresyon plazmid vektörünün moleküler olarak modifikasyonu

Molecular modification of pichia pastoris pib4a secretion plazmid vector

  1. Tez No: 410075
  2. Yazar: AHMET BULDAĞ
  3. Danışmanlar: PROF. DR. İSA GÖKÇE
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyokimya, Biochemistry
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2015
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Gaziosmanpaşa Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 83

Özet

Biyoteknoloji ürünlerinin geneli“rekombinant proteinlerdir”. Proteinler yaşam için gerekli olan önemli yapısal ve düzenleyici moleküllerdir. Amaca uygun yani istediğimiz proteine uygun bir expresyon sistemi ve vektör temini ve konstrüksiyonu rekombinant protein üretiminin temelini teşkil etmektedir. İşte bu amaca yönelik olarak hem ticari hemde ticari olmayan bir takım vektör ve ekspresyon sistemleri kullanılmaktadır. Genelde E. coli ve Saccharomyces cereviciae sistemleri bu amaca en çok hizmet veren vektörlerdir ancak bu sistemler bazen expresyon için gerekli olan mekanizmaları gerçekleştiremediklerinden farklı bir sistemin denenmesi gerekmektedir. Daha önceden üniversitemizde konstrükt etmiş olduğumuz Pichia pastoris sekresyon vektörü üretilmesi istenilen bir takım endüstriyel proteinleri üretebilecek kapasitede bir vektör sistemidir. Bu sistem istenilen proteinleri Pichia pastoris organizmasının dışarısına salgılayabilmekte ve bu sayede organizmaları toplayıp parçalama gereği duymadan bu organizmanın yetiştirildiği basit içerikli minimal medyumdan (besiyeri) toplanacak olan proteinler yine vektörün bize sağlamış olduğu afinite kromatografisinden (Ni-NTA agaroz veya aynı içerikli) saflaştırılabilme özelliği sayesinde (karboksil ucunda içerdiği 6 adet histidin amino asitinden dolayı) ortamdan kolaylıkla sadece tek bir basamakta saflaştırılabilmektedir. Yukardaki avantajların yanı sıra vektörümüzün özellikle kısıtlı çoklu klonlama bölgesine sahip olmasından dolayı klonlama işlemlerinde şu anda sadece bir iki restriksiyon enzimi kullanabilmektedir. Bu çalışma ile plazmid üzerinde birden fazla olan restriksiyon enzimlerinin kesim bölgelerini teke indirerek çoklu klonlama bölgesinde kullanılabilecek olan enzim miktarı artırılmıştır. Bu sayede varolan vektör üzerinde birtakım genetik manipilasyon çalışmalarıyla daha kısa zamanda ve daha ucuz enzimlerle klonlama işlemleri gerçekleştirilebilecek sonrasında ise daha yüksek verimlerde proteinlerin üretilmesine imkan sağlayacak bir rekombinant vektör sistemini elde etmeyi planlamaktayız.

Özet (Çeviri)

Biotechnology products in general are“recombinant protein”. Proteins are important structural and regulatory molecules and they are essential for life. A suitable protein expression system and a desired plasmid vector is the fundamentals of production of recombinant proteins. There are several commercial and non-commercial vectors and expression systems for this purpose and they are used. E. coli and Saccharomyces cerevicia systems are that most serve this purpose, but different systems must be tested because sometimes previous used systems can not perform the necessary mechanisms for the protein expression. We have already designed a Pichia pastoris secretion vector previously in our university that has a capacity to produce desired industrial proteins in Pichia pastoris organism. Pichia can secrete out these proteins and we do not need to break the yeast. Secreted proteins can be harvested from the simple-minimal medium where the organism is grown. Proteins can be easily purified using the affinity chromatography that is provided by vector (Ni-NTA agarose or similar contents) Vector includes 6 histidine amino acids at the carboxyl terminus therefore proteins can be purified easily from the growth medium at one step. Although our expression system has above advantages but it has a multiple cloning site with limited restriction enzymes for cloning the desired gene fragments. In this study, we would like to reduce the recognition sites of enzymes that is in the multiple cloning site (our vector has two or three sites for these enzymes) for increasing the single cut enzymes in the multiple cloning site.. In this way, we intend to obtain a recombinant vector system that allows us a shorter time and use of cheaper and suitable enzymes for cloning process for the production of high yield of recombinant.

Benzer Tezler

  1. Rekombinant lizozim enziminin Pichia pastoris organizmasından sekresyonla üretilmesi

    Expression of recombinant lysozyme as a secretion in Pichia pastoris

    SEVGİ ULUSOY

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2013

    BiyokimyaGaziosmanpaşa Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. İSA GÖKÇE

  2. Pichia pastoris'te rekombinant kimozin üretiminin araştırılması

    Investigation of recombinant chymosin production in Pichia pastoris

    FATMA ERSÖZ

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    BiyoteknolojiAkdeniz Üniversitesi

    Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MEHMET İNAN

  3. Effects of metabolic engineering of ethanol utilization pathway in Pichia pastoris on recombinant protein production and transcription levels in central metabolism

    Pichia pastoris'in etanol tüketim yolunda yapılan metabolik mühendisliğinin rekombinant protein üretimi ve merkezi metabolizmadaki transkripsiyon düzeylerine etkisi

    İDİL DAYANKAÇ

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2021

    BiyoteknolojiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Kimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. PINAR ÇALIK

    PROF. DR. HASAN TUNÇER ÖZDAMAR

  4. Pichia pastoris mayasına sığır laktat dehidrogenaz geninin aktarımı ve laktik asit üretimi

    Expression of bovine lactate dehydrogenase gene in yeast Pichia pastoris and lactic acid production

    FIRAT AYAS

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2018

    BiyoteknolojiAkdeniz Üniversitesi

    Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MEHMET İNAN

  5. Determination of optimal bioreactor operational strategy and unstructured macrokinetic model for recombinant human growth hormone production on ethanol by a novel Pichia pastoris pADH2-cAT8-L2 based system

    Pichia pastoris ile pADH2-cAT8-L2 promotor altında rekombinant insan büyüme hormonu üretimi için etanol-temelli biyoreaktör işletim stratejisi geliştirilmesi ve modellenmesi

    OMAR WEHBE AL MASRI WEHBE AL MASRI

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2019

    BiyomühendislikOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Kimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. PINAR ÇALIK