Geri Dön

Ratlarda deneysel subaraknoid kanama ile oluşturulan serebral vazospazm etyopatogenezinde rol oynayan apopitozis ve lipid peroksidasyonunun önlenmesinde sildenafil'in rolü

The effect of the sildenafil citrate on cerebral vasospasm and apoptosis following experimental subarachnoid hemorrhage in rats

PDF İndir

  1. Tez No: 419693
  2. Yazar: EMRE CEMAL GÖKCE
  3. Danışmanlar: PROF. DR. HAKAN HULUSİ CANER
  4. Tez Türü: Tıpta Uzmanlık
  5. Konular: Nöroşirürji, Neurosurgery
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2007
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Başkent Üniversitesi
  10. Enstitü: Tıp Fakültesi
  11. Ana Bilim Dalı: Nöroşirürji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 86

Özet

Subaraknoid kanama sonrası gelişen vazospazmın meydana gelişi ve oluşum mekanizmaları ile ilgili yapılan klinik ve labaratuar çalışmalar neticesinde, bu patolojik durumun multifaktöriyel ve içiçe girmiş bir çok biyokimyasal reaksiyonlar sonucunda oluştuğu düşünülmektedir. Ancak anevrizma rüptürü neticesinde subaraknoid alana olan kanamada eritrositlerin hemolizi sonucunda ortaya çıkan oksihemoglobinin, vasküler ve nöronal yapılarda patolojik süreci başlatan bir çok reaksiyonda rol alması nedeniyle vazospazmın oluşumuna neden olan en önemli faktörlerden biri olduğu kabul edilmektedir. Bununla beraber hemoglobine olan affinitesi oksijenden 1000 kat daha fazla olduğu tespit edilen Nitrik oksid adlı moleküler yapının keşfiyle beraber, SAK sonrası miktarının azalmasının, vazospazm gelişiminde çok önemli bir faktör olduğu ileri sürülmektedir(1). Oksihemoglobinin ve diğer kan hücrelerinin kanama sahasında başlattığı inflamasyon, serbest radikal üretimi, lipid peroksidasyonu ve apopitoz, vasküler yapılarda vazospazma neden olarak damarsal yapıların konstrikte olmasına ve nöronal ve vasküler yapıların iskemiye girmesine neden olmaktadır. Vasküler endotelyal hücrelerde olan bu hasar ve serbest radikal üretimi nedeniyle NO'in hem yapımı azalmakta hemde varolan NO tüketilerek damarlar konstrikte olmaktadır. Bu amaçla vazodilatatör, antienflamatuar, antioksidan ve serebral kan akımı regülasyon özellikleri olan NO'in miktarının arttırılmasının vazospazmda iyi bir tedavi seçeneği olacağını düşündük. Bu amaçla fosfodiesteraz V inhibitör etkisi ile NO-cGMP yolağının artımına neden olan, klinikte erektil disfonksiyon ve pulmoner hipertansiyon tedavisinde kullanılan sildenafil sitratın vazospazm tedavisindeki etkilerini araştırmak amacıyla deneysel çalışmamızı gerçekleştirdik. Bu çalışmada 7 adet Sprague-Dawley cinsi ağırlıkları 245-550 gr arası olan erkek ratlardan oluşan 4 grup oluşturuldu. Grup 1'de yer alan ratlara hiç bir işlem uygulanmadan sakrifikasyon uygulandı. Grup 2'de yer alan ratların sisterna magnalarına 0.4 cc/kg'a otolog arteryal kan verilerek deneysel subaraknoid kanama oluşturuldu. Grup 3'te yer alan ratlara aynı şekilde subaraknoid kanama oluşturularak kanamadan hemen sonra 5 mg/kg/gün sildenafil oral olarak verildi. Grup 4'te yer alan ratlarada aynı usulde deneysel v subaraknoid kanama oluşturularak kanamadan hemen sonra 15 mg/kg/gün sildenafil oral verildi. Deneyde, östrojenin iskemide eksitoksisiteyi, glutamat reseptör etkinliğini ve immun enflamasyonu azaltarak akson myelinizasyonunu sinaptogenezisi ve dendritik dallanmayı arttırarak nöroprotektif etki göstermesi nedeniyle erkek rat kullanıldı(2). Subaraknoid kanama yapılan tüm ratlar 48.saatte sakrifiye edildi. Tüm ratların baziller arterlerinden 3'er kesit alınarak baziller arterin çapı freeware imaj analiz sistemleri (ImageJ, version 1.341; National Institutes of Health, Bethesda, MD) bilgisayar programı ile ölçüldü. Lipid peroksidasyon değerleri için baziller arterin beslediği serebellumdan örnekler alındı ve tiyo barbitürik asit yöntemi ile nmolTBA/g yaş doku olarak hesaplandı. Gruplardaki baziller arter kesitlerindeki apopitozu göstermek amacıyla In Situ Cell Detection Kit, POD (Roche, Germany) kullanıldı. Apopitotik indeks immünreaktif nukleusların total endotel hücre sayısına oranı ile hesaplandı. Sonuçlar yüzde olarak ifade edildi. Buna göre boyanma saptanmayan kesitler Grade 0, %0-24 oranında apopitoz Grade 1, %25-49 arasındakiler Grade 2, %50-74 arasındakiler Grade 3 ve %75-100 oranında arteriyal apopitotik hücre boyanması gösterenler Grade 4 olarak ifade edildi. In Situ Cell Detection Kit ile yapılan çalışmalarda apopitotik hücrelerle beraber nekrotik hücrelerde de TUNEL reaksiyonunun yanlış pozitif reaksiyona neden olmasından dolayı kaspaz 3, kaspaz 8, p53 ve sitokrom c adlı apopitotik markerlarda çalışılmıştır(3). Çalışmamızda sitokrom c'yi apopitotik mitokondriyal yolağı, kaspaz 8'i kaspaz bağımlı yolağı, kaspaz 3'ü kaspaz bağımlı ve bağımsız yolun ortak ürünü, p53'ü ise tüm apopitotik sürecin en önemli markerı olduğu için kullandık(100,101). Buna göre SAK grubundaki ratların baziller arterler kesit alanlarının kontrol grubuna göre %57 oranında daraldığı, sildenafil 5mg/kg/gün verilen grupta ise daralmanın kontrol grubu olan grup 1'e göre %16.8 olduğu tespit edildi. Sildenafil 15 mg/kg/gün verilen grupta ise bu daralmanın %7.1 olduğu görüldü. Elde edilen kesit alanları istatiksel açıdan Post Hoc Tukey testi ile karşılaştırıldığında sildenafilin vazospazma karşı koruyucu etkisinin olduğu saptandı (p

Özet (Çeviri)

After fulfilling many clinical and experimental studies about the mechanism of cerebral vasospasm following subarachnoidal hemorrhage, it is thought that this pathologic disease to become after many connecting reactions and it is multifactorial. It is widely accepted that oxyhemoglobine, appearing following hemolysis of erythrocytes in the subarachnoidal space as a result of bleeding after rupture of an aneurysm, is the most important factor in the pathogenesis of vasospasm because of acting in many reactions causing the pathological process against the vascular and neuronal tissues. However since the discovery that nitric oxide, an endothelial derived relaxing factor has 1000 times higher affinity for hemoglobin than oxygen, it is put forward that decreased NO availibility following SAH is one of the most important factor in vasospasm(1). Vasoconstriction, vasospasm of the vessels and ischemia in the neurons and vascular tissue cells is the cause of inflammation, free radical production, lipid peroxidation and apoptosis developing after oxyhemoglobin and other blood products. Because of the damage in the vascular endothelial cells and production of free radicals, either decreasing NO availibility or running out of the present NO, cause of conctriction of the vessels. As we take into consideration of decreased levels of NO and antiinflamatuar, vasodilatation, antioxidan and cerebral blood flow regulation effect of NO; we thought that increasing the amount of NO availibility would be a good option in the treatment of vasospasm. We carried out our experimental study aiming at searching out the effect of sildenafil citrate PDE V inhibitor on cerebral vasospasm, which are currently approved for the treatment of erectil dysfunction and pulmonary hypertension by increasing NO-cGMP pathway. In this study 7 male Sprague-Dawley rats weighting between 245-550 grams were grouped into 4 groups. In group 2 ,3 and 4 the cisterna magna was aseptically punctured with a needle and 0.5 ml/kg of autologous arterial blood obtained by directly puncturing the femoral artery was slowly injected intracisternally. Group 1 (Control) rats were sacrificed and submitted to biochemical study without surgical manipulation. Group 3 and group 4 after administering the blood intracisternally, received 5 mg/kg and 15 mg/kg sildenafil respectively for 2 days, respectively. Estrogen has a neuroprotective effect by decreasing excitotoxicity, glutamate receptor activity and immun inflamation and by viii increasing axonal myelinization, synaptogenesis and dendtritic branch so that we used male rats in the experiment. All rats were decapitated following sacrification using high dose anesthetic agent on the second day. The rats basillary artery were sectioned from three seperate zones and three sections were obtained from each rat. Basillary artery luminal sectional areas were measured using freeware computerized image-analyse systems (ImageJ, version 1.341; National Institutes of Health, Bethesda, MD). For lipid peroxidation study cerebellum section samples from the rats fed by basillary artery were taken. The concentration of lipid preoxides was measured by thiobarbituric acid test. Immunohistology using the ApopTag Peroxidase In Situ Apoptosis Cell Detection Kit, POD (Roche, Germany) was used to demonstrate apoptosis in a cross section of basillary artery. Apoptotic index was calculated as the number of the immunoreactive nuclei per total number of endothelial cells, expressed as a percentage. No positive staining of endothelial cells with the ApopTag have been expressed as Grade 0, 0-24% immunostaining of endothelial cells as Grade 1, 25-49% as Grade 2, 50-74% as Grade 3, 75-100% immunostaining of endothelial cells have been expressed by Grade 4. Considering possible false positive results in TUNEL reaction in necrotic cells, each section was immunostained using for p53 (Clone Pab 240, mouse monoclonal antibody, NeoMarkers), caspase 3 (CPP32, NeoMarkers), caspase 8 (FLICE, NeoMarkers) and cytochrome c (Clone 7H8.2C12, mouse monoclonal antibody, NeoMarkers). Under light microscope examination, the positivity for all of these antibodies was calculated as positive and negative in the endothelial cells of basillary artery. In our atudy we used cytochrome c, representing the apoptotic mithocondrial pathway; caspase 8 respresenting the caspase dependent pathway, caspase 3 representing the both caspase dependent and independent pathway and p53 playing the essential role in the whole apoptotic cascade. In the SAH group(Group 2) the basillary artery circumferences constriction rate was 61.7% compared with the control group (Group 1). In the SC (5mg/kg)-treated SAH group, the basillary artery circumference contriction rate was 16.8% and in the SC-treated 15mg/kg SAH group this rate was 7.1% compared with the control group (Group 1). For the comparison of the effect of SC treatment after SAH, a Post Hoc Tukey test was performed between the groups. P value was less than 0.05 was considered significant. The results of group 1 between group 2, group 1 between group 3 and group 1 between group 4 ix was regarded as statistically significant (p

Benzer Tezler

  1. Tez No

    142129

    Ratlarda deneysel subaraknoid kanama ile oluşturulan serebral vazospazma raloksifenin etkisi

    Başlık çevirisi yok

    SALİH GÜLŞEN

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2004

    NöroşirürjiHacettepe Üniversitesi

    Nöroşirürji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. SERVET İNCİ

  2. Tez No

    627211

    Deneysel subaraknoid kanama modelinde asiatik asit'in serebral vazospazm üzerine etkisinin değerlendirilmesi

    Evaluation of asiatic acid's effect on cerebral vasospazm after experimental subarachnoid hemorrhage model

    MEHMET EMİN AKYÜZ

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2020

    NöroşirürjiAtatürk Üniversitesi

    Nöroşirürji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. HAKAN HADİ KADIOĞLU

  3. Tez No

    414831

    Deneysel subaraknoid kanama modelinde intraperitoneal timokinon uygulamasının serebral vazospazma etkisinin histopatolojik ve stereolojik değerlendirilmesi

    Başlık çevirisi yok

    CENGİZ ATIŞ

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2015

    NöroşirürjiOndokuz Mayıs Üniversitesi

    Beyin ve Sinir Cerrahisi Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. ABDULLAH HİLMİ MARANGOZ

  4. Tez No

    912356

    Sıçanlarda oluşturulan deneysel subaraknoid kanama sonrası gelişen gecikmiş serebral vazospazmda 2APB'nin doz bağımlı etkisi

    Dose-dependent effect of 2APB on delayed cerebral vasospasm after experimental subarachnoid hemorrhage in rats

    TURAN ÇAYIR

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2024

    NöroşirürjiAfyonkarahisar Sağlık Bilimleri Üniversitesi

    Beyin ve Sinir Cerrahisi Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ İHSAN CANBEK

  5. Tez No

    839085

    Deneysel subaraknoid kanama modelinde Cilnidipine'nin serebral vazospazm üzerine etkisinin değerlendirilmesi

    Evaluation of the effect of Cilnidipine on cerebral vasospasm in an experimental subarachnoid hemorrhage model

    KAMİL ANIL KILINÇ

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    NöroşirürjiAfyonkarahisar Sağlık Bilimleri Üniversitesi

    Beyin ve Sinir Cerrahisi Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ADEM ASLAN

    DOÇ. DR. SERHAT YILDIZHAN

Geri Dön