Geri Dön

In-vitro generated memory-like CD8+ T cells elicited pronounced cytotoxic effect upon antigen specific tcr gene transduction

İn-vitro ortamda oluşturulan CD8+ T hücrelerine antijene özgü tcr geni transfer edildiğinde gözlemlenen belirgin sitotoksik etkiler

PDF İndir

  1. Tez No: 436329
  2. Yazar: HAKAN KÖKSAL
  3. Danışmanlar: PROF. İHSAN GÜRSEL
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoloji, Genetik, Biology, Genetics
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2016
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: İhsan Doğramacı Bilkent Üniversitesi
  10. Enstitü: Mühendislik ve Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 104

Özet

Sitotoksik T hücreleri immün sistemin özellikle virüs enfekte olmuş ve malignan hücrelere karşı en önemli elemanlarındandır. Antijen sunucu hücrelerin aktive ettiği sitotoksik T hücreleri vücudu tehditlere karşı tarar ve TCR reseptörü yardımı ile tanıyıp hedef hücreyi hücrede apoptoz indükleyerek ortadan kaldırır. Tanınan tehditler ortadan kalktığında, antijene özgü olan T hücreleri kontraksiyon adı verilen bir faza girerler. Bu faz esnasında antijene özgü olan CD8+ T hücrelerinde yaklaşık 90-95% oranında ölüm gözlenir. Hayatta kalan hücreler hafıza hücreleri olarak tanımlanır ve uzun vadeli immün sistemin en önemli uzantılarındandır. Hafıza hücrelerinin muhafazaları için homeostatik sitokinlerden olan IL-7 ve IL-15 en önemli unsurlardandır. Hafıza CD8+ T hücreleri daha hızlı ve etkili yanıt verebildikleri için tekrarlayabilecek rahatsızlıklara karşı önemli bir savunma potansiyeli sunmaktadır. Sitotoksik T hücreleri lenfosit miktarı düşük olan ortamlarda homeostazi sağlayabilmek amacı ile homeostatik proliferasyon adı verilen bir proliferatif tepki gösterirler. Bu tepki sonucu hafıza hücreleri fonksiyonu ve karakteristiği (CD44+CD62L+) gösterebilen hücrelere donüşebilirler. Geçtiğimiz yıllarda yapılan çalışmalar sonucu bu ortamın in vitro ortamda da taklit edilebileceği ve hafıza benzeri T hücrelerinin oluşturulabileceği gösterilmiştir. Doğal olarak üretilen hafıza hücrelerinde olduğu gibi hafiza benzeri hücrelerin üretiminde de en önemli unsur IL-15 olduğu gözlemlenmiş ve bu sayede üretilen hücrelerin kanser tedavisinde daha etkili olabileceği gösterilmiştir. Bu bulgular doğrultusunda yaptığımız araştırmalarda bu fenotipi oluşturma yöntemini daha pratik ve/veya daha etkili yapmayı hedefledik. Bulunacak potansiyel gelişmeler kanser tedavisinde test edilecek. İlk denenen yöntem, dendritik hücreleri çeşitli ligandlar ile stimüle ederek en efektif IL-15 salgılanmasına yol açan ligand tanımlanarak bunun in vivo ortamında verilen CD8+ T hücrelerinin hafıza fenotipine dönüşmesine etkisi olup olamayacağını incelemekti. Fakat gözlemlerimiz IL-15 miktarı ile bağlantısız bir şekilde aktif edilmiş dendritik hücrelerinin gerek total salgıları ile gerek ise kendisi ile inkübe edilmiş T hücrelerinin hafıza benzeri fenotiplerinde düşüş gözlemlenmiştir. İkinci yöntemimizde ise IL-15 ifade geni retroviral olarak T hücrelerine transfer edilmiştir. Bu hücreler anti-CD3/28 ile aktive edildiğinde IL-15 takviyesi yapılan hücrelere yakın anti tümör sitotoksik etki gözlemlenmiştir. Bizim yöntemimiz ile üretilecek hafıza hücreleri herhangi bir ekstra takviyeye ihtiyaç olmadan istenilen antijene karşı dizayn edilebilir. Bunun yanı sıra burada belirtilerek üretilen hücreler transfer edilen canlıda çok daha uzun süreler dayanabilir ve uzun vadede daha etkili anti tümör fonksiyonu sergileyebilirler.

Özet (Çeviri)

Cytotoxic T cells are the important arm of immune system against malignant and virus infected cells. APC activated cytotoxic T cells survey body for threats, recognize peptide-MHC class I molecules by TCR and eliminate targets by inducing apoptosis. Following a successful clearance of danger, these cells undergo a contraction phase which eliminates 90-95% of antigen specific CD8+ T cells. At this stage, surviving cells are named as memory T cells. Maintenance of these cells are primarily depends on homeostatic cytokines, IL-7 and IL-15. Surviving memory CD8+ T cells are especially important against recurrence of malignancies and reinfections due to their quick and potent immune response. Similar memory functions and characteristic can be achieved under lymphopenic environment where abnormally low levels of lymphocytes present. This phenomenon is called homeostatic proliferation and has been shown to promote tumor clearance, reverse anergy and improve immune response against pathogens. Similar to natural generation of memory T cells, homeostatic proliferation fundamentally depends on homeostatic cytokines. Recent studies demonstrated memory-like phenotype (CD44hiCD62Lhi) can be acquired in vitro by culturing naive CD8+ T cell in the presence of anti-CD3/28 and recombinant IL-15. These in vitro generated phenotype when transferred to a mice proved to have an augmented antitumor response in vivo. In the light of these findings, we aimed to improve in vitro generation of memory-like phenotype and make it more practical and use identified improvements in tumor therapy. Our first approach is the utilization of DCs, known to be one of the most potent IL-15 secreting cells, in a co-culture setup with naive T cells. Identification of correct PRRs to trigger innate immunity and hence providing an environment suitable for transferred CD8+ T cells, should improve overall immune response and antitumor potential of CD8+ T cell. To test this idea, we made an in vitro co-culture setup. Stimulating DCs with potent IL-15 inducing ligands, c-GAMP and LPS, we achieved to improve expression of IL-15 but failed to induce memory-like phenotype in co-culture. Still we observed CD8+ T cells acquire a memory-like phenotype with an increased cytotoxic potential in the presence of recombinant IL-15. As an alternative, CD8+ T cells retrovirally transduced with an IL-15 vector to enable them to produce their own IL-15. Transduction managed to induce a memory-like progression without any additional supplementation. Similar to supplementation, IL-15 transduction improved cytotoxic potential of CD8+ T cell. Our approach can be used against any antigen with an improved immune response, eliminate the necessity of cytokine supplementation and enhance in vivo persistence of the transferred cells.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    713827

    The role of heterogeneous nuclear ribonucleoprotein l-like (hnrnpll) in t cell homeostasis

    Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein l-like (hnrnpll)'ın t hücre homeostazındaki rolü

    MEHMET YABAŞ

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2010

    Allerji ve İmmünolojiThe Australian National University

    İmmünoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. GERARD F. HOYNE

  2. Tez No

    869134

    Anti-CD3&anti-CD28 tabanlı iki farklı CD19 spesifik CAR(CD28)-t ve CAR(4-1BB)-t hücre üretiminin in vitro ve in vivo etkinliklerinin araştırılması

    Investigation of the in vitro and in vivo activities of two different CD19 specific CAR(CD28)-t and CAR(4-1BB)-t cells based on Anti-CD3 & Anti-CD28

    GAMZE GÜLDEN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2024

    BiyolojiÜsküdar Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ CİHAN TAŞTAN

  3. Tez No

    562496

    CHARACTERIZATION OF THE REGULATORY MECHANISMS OF NOD LIKE RECEPTORS IN THE GENERATION OF IMMUNE RESPONSES: REVISITING NLRC4 IN EOSINOPHILIC FUNCTIONS IN VITRO

    BİR EDİNSEL BAĞIŞIKLIK OLAN T2 HÜCRE CEVABININ NOD BENZERİ RESEPTÖRLERİ (NLR) İLE REGÜLASYON MEKANİZMALARININ KARAKTERİZASYONU

    ILGIN AKKAYA

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2019

    Allerji ve İmmünolojiİstanbul Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. CEREN ÇIRACI

  4. Tez No

    331296

    PC12 nöronal hücre hattında amiloid beta ile oluşturulan Alzheimer modelinde saponinlerin oksidatif makromolekül hasarı üzerine etkisinin incelenmesi

    The effects of saponins on oxidative macromolecule damage in Alzheimer model generated by amyloid beta-induced PC12 neuronal cell line

    NİDA DEMİRÇAK

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2012

    BiyokimyaDokuz Eylül Üniversitesi

    Moleküler Tıp Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. PINAR AKAN

  5. Tez No

    842912

    Functional validation of candidate genes associated with inherited neurodevelopmental diseases

    Nörogelişimsel hastalıklarla ilişkilendirilen aday genlerin işlevsel validasyonu

    SEVAL KILIÇ

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2023

    GenetikDokuz Eylül Üniversitesi

    Genom Bilimleri ve Moleküler Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. MUHAMMED KASIM DİRİL

Geri Dön