Rekombinant insülin hormonunun Pichia pastoris'te üretimi
Recombinant insulin hormone production in Pichia pastoris
- Tez No: 438032
- Danışmanlar: PROF. DR. MUHARREM CERTEL
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2016
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Akdeniz Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 61
Özet
İnsülin pankreasın beta hücrelerinden üretilen ve vücutta glukoz dengesini sağlayan önemli bir peptit hormondur. Pankreasın yeterli miktarda insülin üretememesi ya da hücrelerin üretilen insüline cevap verememesi sonucu kan glukoz düzeyinin yükselmesiyle diyabet adı verilen metabolik bir hastalık meydana gelir. Günümüzde bu hastalığın tedavisinde insülin hormonu kullanılmaktadır. İnsülin hormonu genetik mühendisliği teknikleri kullanılarak rekombinant olarak üretilen ilk proteindir. İlk olarak Escherichia coli (E.coli) ve Saccharomyces cerevisia (S. cerevisiae)'da üretilmeye başlanmış, ancak son zamanlarda Pichia pastoris adı verilen mayanın kullanıldığı çalışmaların sayısı artmıştır. Bu çalışmada metilotrofik bir maya olan P. pastoris 'te insan insülin hormonu öncülerini(IP) kodlayan genin indüklenebilir AOX1 promotoru altında üretilmesi hedeflenmiştir. Oluşturulan klonlarla küçük ölçekte protein üretimi çalışmaları engelli erlenlerde 120 saat boyunca yapılmıştır. Engelli erlenlerde üretim çalışması esnasında belirli zaman aralıklarında alınan örneklerden elde edilen süpernatanlarda SDS-PAGE ve Western blot analizleri yapılarak protein üretimi doğrulanmaya çalışılmıştır. SDS-PAGE ve Western blot analizlerinden elde edilen sonuçlar proteinin engelli erlenlerde üretildiğini ancak üretilen proteinin hücre dışına salgılanmadığını göstermiştir. Fermentörde üretim yapıldığında ise üretilen proteinin hücre dışına salgılandığı yapılan analizlerle gösterilmiştir.
Özet (Çeviri)
Insulin is a peptide hormone, produced by beta cells of the pancreas and regulates the glucose homeostasis in the body Diabetes mellitus is a metabolic disease in which a person has high blood sugar, either because the pancreas does not produce enough insulin, or because cells do not respond to produced insulin. At the present time, insulin is used to treatment of this disease. İnsulin hormone is first protein produced recombinantly by using genetic engineering techniques. Firstly, it was produced in E. coli and Saccharomyces cerevisia, but recently the number of studies that used Pichia pastoris in the production of recombinant insulin increase. This study was aimed that the production of human insulin hormone precursor (IP) under the inducible AOX1 promotor of metilotrophic yeast P. pastoris. The small scale protein production studies have been done with the clones in shake flasks for 120 hours. During the shake flask production study, the samples was taken at specific time intervals and obtained supernatants for SDS-PAGE and Western blot analysis to confirm protein production. The results of SDS-PAGE and Western blot analysis showed that the protein was produced in shake flask but was not secreted out of the cell. When the protein production was done in fermentor, the analysis showed that produced protein was secreted out of the cell.
Benzer Tezler
- İnsülin benzeri bağlayıcı proteinlerin (IGFBP) rekombinant üretimi ve karakterizasyonu
Recombinant production and characterization of insulin-like growth factor binding proteins (IGFBP)
ZEYNEP ERİM
- Empirical and computational inquest into biosimilar and next-generation insulin analogs manufacturing: Unveiling structural, analytical, and dynamic attributes through recombinant technological approaches
Biyobenzer ve yeni nesil insülin analoglarının üretimine dair deneysel ve hesaplamalı araştırma: Rekombinant teknolojik yaklaşımlarla yapısal, analitik ve dinamik özelliklerin ortaya çıkarılması
ESRA AYAN
Doktora
İngilizce
2024
BiyokimyaKoç ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ HASAN DEMİRCİ
- Oral uygulama amacıyla insülin taşıyıcı sistemlerin hazırlanması, karakterizasyonu ve salım çalışmaları
Preparation of insulin carrier systems for oral delivery, characterization and release study
GÜLŞAH EREL
Yüksek Lisans
Türkçe
2015
BiyoteknolojiEge ÜniversitesiFarmasötik Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. AYŞE GÜLTEN KANTARCI
- Rekombinant insan insulin peptidinin bakteriyal ekspresyon sistemi kullanarak üretimi
Expression of recombinant human insulin in bacterial expression systems expression systems
CEREN CAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2015
BiyoteknolojiAnkara ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. EVREN DORUK ENGİN
- Rekombinant insan insülininin oral multipl emülsiyon formülasyonunun geliştirilmesi üzerinde çalışmalar
Studies on the development of oral multiple emulsion formulations of recombinant human insulin
HOCAMURAT HUDAYBERDİYEV