Geri Dön

Rekombinant insülin hormonunun Pichia pastoris'te üretimi

Recombinant insulin hormone production in Pichia pastoris

PDF İndir

  1. Tez No: 438032
  2. Yazar: AYŞE TORUN
  3. Danışmanlar: PROF. DR. MUHARREM CERTEL
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2016
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Akdeniz Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.

Özet

İnsülin pankreasın beta hücrelerinden üretilen ve vücutta glukoz dengesini sağlayan önemli bir peptit hormondur. Pankreasın yeterli miktarda insülin üretememesi ya da hücrelerin üretilen insüline cevap verememesi sonucu kan glukoz düzeyinin yükselmesiyle diyabet adı verilen metabolik bir hastalık meydana gelir. Günümüzde bu hastalığın tedavisinde insülin hormonu kullanılmaktadır. İnsülin hormonu genetik mühendisliği teknikleri kullanılarak rekombinant olarak üretilen ilk proteindir. İlk olarak Escherichia coli (E.coli) ve Saccharomyces cerevisia (S. cerevisiae)'da üretilmeye başlanmış, ancak son zamanlarda Pichia pastoris adı verilen mayanın kullanıldığı çalışmaların sayısı artmıştır. Bu çalışmada metilotrofik bir maya olan P. pastoris 'te insan insülin hormonu öncülerini(IP) kodlayan genin indüklenebilir AOX1 promotoru altında üretilmesi hedeflenmiştir. Oluşturulan klonlarla küçük ölçekte protein üretimi çalışmaları engelli erlenlerde 120 saat boyunca yapılmıştır. Engelli erlenlerde üretim çalışması esnasında belirli zaman aralıklarında alınan örneklerden elde edilen süpernatanlarda SDS-PAGE ve Western blot analizleri yapılarak protein üretimi doğrulanmaya çalışılmıştır. SDS-PAGE ve Western blot analizlerinden elde edilen sonuçlar proteinin engelli erlenlerde üretildiğini ancak üretilen proteinin hücre dışına salgılanmadığını göstermiştir. Fermentörde üretim yapıldığında ise üretilen proteinin hücre dışına salgılandığı yapılan analizlerle gösterilmiştir.

Özet (Çeviri)

Insulin is a peptide hormone, produced by beta cells of the pancreas and regulates the glucose homeostasis in the body Diabetes mellitus is a metabolic disease in which a person has high blood sugar, either because the pancreas does not produce enough insulin, or because cells do not respond to produced insulin. At the present time, insulin is used to treatment of this disease. İnsulin hormone is first protein produced recombinantly by using genetic engineering techniques. Firstly, it was produced in E. coli and Saccharomyces cerevisia, but recently the number of studies that used Pichia pastoris in the production of recombinant insulin increase. This study was aimed that the production of human insulin hormone precursor (IP) under the inducible AOX1 promotor of metilotrophic yeast P. pastoris. The small scale protein production studies have been done with the clones in shake flasks for 120 hours. During the shake flask production study, the samples was taken at specific time intervals and obtained supernatants for SDS-PAGE and Western blot analysis to confirm protein production. The results of SDS-PAGE and Western blot analysis showed that the protein was produced in shake flask but was not secreted out of the cell. When the protein production was done in fermentor, the analysis showed that produced protein was secreted out of the cell.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    542765

    İnsülin benzeri bağlayıcı proteinlerin (IGFBP) rekombinant üretimi ve karakterizasyonu

    Recombinant production and characterization of insulin-like growth factor binding proteins (IGFBP)

    ZEYNEP ERİM

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2018

    BiyokimyaEge Üniversitesi

    Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. BURCU OKUTUCU

  2. Tez No

    881901

    Empirical and computational inquest into biosimilar and next-generation insulin analogs manufacturing: Unveiling structural, analytical, and dynamic attributes through recombinant technological approaches

    Biyobenzer ve yeni nesil insülin analoglarının üretimine dair deneysel ve hesaplamalı araştırma: Rekombinant teknolojik yaklaşımlarla yapısal, analitik ve dinamik özelliklerin ortaya çıkarılması

    ESRA AYAN

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2024

    BiyolojiKoç Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ HASAN DEMİRCİ

  3. Tez No

    414074

    Rekombinant insan insulin peptidinin bakteriyal ekspresyon sistemi kullanarak üretimi

    Expression of recombinant human insulin in bacterial expression systems expression systems

    CEREN CAN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2015

    MikrobiyolojiAnkara Üniversitesi

    Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. EVREN DORUK ENGİN

  4. Tez No

    658617

    Tetrahymena thermophila insülin benzeri proteinlerininimmüno-afinitik tabanlı belirlenmesi, rekombinant üretimive hormonal karakterizasyonu

    Immuno-affinity based determination, recombinantproduction and hormonal characterization of tetrahymenathermophila insulin-like protein(s)

    AYÇA FULYA ÜSTÜNTANIR DEDE

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2021

    Endokrinoloji ve Metabolizma HastalıklarıEskişehir Teknik Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. MUHİTTİN ARSLANYOLU

  5. Tez No

    389745

    Mezenkimal kök hücrelerden pankreas adacık beta hücrelerine benzer insülin salgılayan hücrelerin rekombinant DNA teknolojisi ile eldesi

    The production of pancreatic islet beta like insulin producing cells from mesenchymal stem cells by recombinant DNA technology

    AYŞEGÜL BAĞLAR

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2014

    BiyolojiKocaeli Üniversitesi

    Kök Hücre Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. GÖKHAN DURUKSU

Geri Dön