The potential role of growth hormone signaling in rotenone-induced neurotoxicity in SK-N-AS cells
Büyüme hormon sinyal yolağının rotenon tarafından SK-N-AS neuroblastoma hücre hattında indüklenen nörotoksisite üzerındeki potansiyel rolü
- Tez No: 446618
- Danışmanlar: PROF. DR. MEHVEŞ ECE GENÇ
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2016
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Yeditepe Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 90
Özet
Rotenon, nörotoksik etkilerinden ötürü tarımda sıkça kullanılan bir pestizitdir. Bu pestizitle çalışan kişilerde uzun vaadede nörolojik problemler gelişebilir. Büyüme hormonunun (Growth hormone, GH) nöronal hücreleri koruyucu ve onarıcı rolü olduğu tespit edilmiştir. Bu tezin amacı GH'nun rotenon uygulanan SK-N-AS neuroblastoma hücreleri üzerinde göstereceği koruyucu ve onarıcı etkisini incelemektir. Bu amaç doğrultusunda, birinci basamak GH geni PC3.1 plazmidi lipozom türevli bir ajan ile aktarılmış ve neomisin uygulanarak GH salgılayan SK-N-AS hücreleri üretilmiştir. GH'nin Rotenon tarafından tetiklenen nörotoksik etkisini koruyucu aktivitesini GH aktarilmiş SK-N-AS hücrelerinde görebilmek ve araştirmak için MTT hücre canlılık testi, büyüme testi, yumuşak agar ve koloni oluşturması deneyleri kullanılmıştır. Bu testlerle, rotenonun SK-N-AS hücreleri üzerindeki doza ve zamana bağlı olan ilişkisi de incelenmiştir. GH'nin ve rotenonun biyolojik etkileri ise protein seviyesinde immunoblotting tekniğiyle kaspaz 3, 7, 9 ve Bcl-2 ailesi üzerinde gözlendi. Sonuç olarak, GH salgılanması SK-N-AS hücrelerinin büyümesini ve çoğalmasını sağlamasına ve bazı testlerde rotenona karşı belli bir koruyucu etki oluşturmasına rağmen, rotenonun negatif etkilerine tamamıyla nötralize etmeye ve apoptozdan korumaya yeterli olmadığı gözlenmistir. Ayrıca rotenona ilaveten antioksidatif ajan N-asetilsistein (NAC) kullanıldığında NAC'in sadece GH aktarılmamış SK-N-AS hücrelerinde apoptozu engelleyebildigi tespit edilmiştir. JAK/STAT sinyal yolağı proteinlerin immunoblotla incelenmeside sadece STAT1 proteininde dikkate değer bir artış gözlenmiştir. Buna ilaveten yine immunoblot analizinde SK-N-AS hücrelerinin apoptozda kaspaz 9 üzerinden mitokondriyal içsel apoptoz yolağını tercih ettikleri onaylanmıştır.
Özet (Çeviri)
Rotenone is a widely used pesticide, leading to neurotoxic effects and may also affect humans. Growth hormone (GH) has been reported to have neuro-protective and/or neuro-repairing effects on neuronal cells. The aim of this thesis is to demonstrate the potential neuro-protective effect of induced GH expression in rotenone treated neuroblastoma SK-N-AS cells. In order to accomplish this purpose, we generated GH expressed SK-N-AS neuroblastoma (NB) cells by using GH gene inserted PC3.1 plasmid by lipofectamine transfection and neomycin selection. The protective role of transfected GH expression on rotenone-induced neurotoxicity in SK-N-AS cells was investigated by cell viability assay, growth assay, soft agar and colony forming assay, the latter for determination of dose- and time-dependent rotenone effects. On protein level, rotenone effects on caspase 3, 7, 9 and Bcl-2 family members were investigated by immunoblotting in SK-N-AS wild type (wt) and SK-N-AS GH transfected cells for the evaluation of biological protective and repairing effect of GH signaling. In cell viability assay, the amounts of vital cells were significantly higher in GH transfected SK-N-AS cells than wt SK-N-AS cells, but GH was not effective to completely protect NB cells from apoptosis. In addition, the antioxidative agent N-acetyl-L-cysteine (NAC) was effective in prevention of rotenone-induced apoptosis only in SK-N-AS wt cells. Immunoblotting of JAK/STAT signaling pathway proteins demonstrated a STAT1 increase in rotenone treated SK-N-AS GH+ transfected cells. The preference of SK-N-AS cells for the caspase-dependent (caspase 9 activation) intrinsic apoptosis pathway and the mitochondrial involvement including ROS generation could be confirmed.
Benzer Tezler
- Otokrin büyüme hormonu (BH) sinyalinin curcumin'e karşı direnç mekanizmasındaki rolünün endoplazmik retikulum stres ve otofajik yolaklara bağlı olarak MDA-MB-231 ve T47D meme kanseri hücrelerinde irdelenmesi
The investigation of the role of autocrine growth hormone (GH) signal in the resistance mechanism against curcumin due to endoplasmic reticulum stress and autophagic pathways in MDA-MB-231 and T47D breast cancer cells
DERYA BULUT
Yüksek Lisans
Türkçe
2019
Biyolojiİstanbul Kültür ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. AJDA ÇOKER GÜRKAN
- Poliamin metabolizması ve büyüme hormonu sinyal yolağının curcumin uygulanan MCF-7 ve MDA-MB-231 meme kanseri hücrelerinde terapotik rolünün incelenmesi
Investigation of the therapeutic effect of curcumin due to polyamine metabolism and growth hormone signaling in MCF-7 and MDA-MB-231 breast cancer cells
MERVE ÇELİK
Yüksek Lisans
Türkçe
2016
Biyolojiİstanbul Kültür ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. AJDA ÇOKER GÜRKAN
- Bag-1 silencing enhanced cisplatin or paclitaxel-induced apoptotsis in MCF-7 breast cancer cells
Bag-1'ın susturulması MCF-7 meme kanseri hücrelerinde sisplatin ya da paklitaxel ile tetiklenen apoptozu arttırmaktadır
PELİN ÖZFİLİZ
Yüksek Lisans
İngilizce
2013
Biyolojiİstanbul Teknik Üniversitesiİleri Teknolojiler Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. GİZEM DİNLER DOĞANAY
DOÇ. DR. ELİF DAMLA ARISAN
- LONG RNA CCAT2'nin östrojen hormon duyarlılığı açısından etkisinin meme ve over kanser hücrelerinde incelenmesi
Investigation of the effect of LONG RNA CCAT2 in terms of estrogen hormone sensitivity in breast and ovarian cancer cells
İBRAHİM UĞUR ÇALIŞ
Doktora
Türkçe
2021
Tıbbi BiyolojiEskişehir Osmangazi ÜniversitesiTemel Tıp Bilimleri Ana Bilim Dalı
PROF. DR. DİDEM TURGUT COŞAN
- SIK2 functions as a novel tumor suppressor in the breast tumorigenesis
SIK2 meme tümörogenezinde bir tümor baskılayıcı gen olarak fonksiyon göstermektedir
NESLİHAN ZOHRAP
Doktora
İngilizce
2015
GenetikBoğaziçi ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. KOYAŞ BİLGE