Bruselloz tanısında iki farklı polimeraz zincirleşme yöntemini kullanımı
Two different pcr methods in the diagnosis of brucellosis
- Tez No: 455937
- Danışmanlar: DOÇ. DR. SEDAT KAYGUSUZ
- Tez Türü: Tıpta Uzmanlık
- Konular: Enfeksiyon Hastalıkları ve Klinik Mikrobiyoloji, Infectious Diseases and Clinical Microbiology
- Anahtar Kelimeler: Bruselloz, Polimeraz zincirleme reaksiyonu, Brucellosis, Polymerase chain reaction
- Yıl: 2008
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Kırıkkale Üniversitesi
- Enstitü: Tıp Fakültesi
- Ana Bilim Dalı: Enfeksiyon Hastalıkları ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Brusella cinsi bakterilerin neden olduğu bruselloz, pek çok ülkede olduğu gibi ülkemiz için de önemli bir halk sağlığı sorunu olan zoonozdur. Özgül olmayan şikayetler ve bulgularla seyreden hastalığın tanısında altın standart olan kültürde bakteriyi üretmek oldukça zor ve zaman alıcıdır. Rutinde daha sık kullanılan serolojik yöntemlerin ise diğer proteinlerle olan çapraz reaksiyonlardan dolayı özgüllüğü düşüktür. Polimeraz zincirleşme reaksiyonu (PZR) gibi moleküler yöntemler pek çok infeksiyon hastalığı gibi brusellozun erken ve hızlı tanısında iyi bir alternatif yöntem olmaktadır.Bu çalışmada, brusellozun erken tanısı ve maliyet etkinliği yönlerinden iki farklı PZR yönteminin konvansiyonel yöntemlerle karşılaştırılması amaçlandı.Çalışma, K.Ü.T.F. İnfeksiyon Hastalıkları ve Klinik Mikrobiyoloji A.D. polikliniğine başvuran bruselloz ön tanılı 35 hasta (Grup 1) ve 20 sağlıklı gönüllüden (Grup 2) oluşturuldu. Gruplardan serolojik çalışma (SAT, Coombs) için serum, PZR için tam kan (EDTA'lı tüplere) alınırken, hastalardan ateşli oldukları dönemde kan kültürleri alındı. Tam kan örneklerinden elde edilen lökosit pelletlerinden DNA izolasyonu yapıldı ve hem in house hem de real time PZR (RT-PZR) yöntemleriyle brusella DNA'sı çalışıldı.Grup 1'deki hastaların SAT değeri 1 olguda 1/80 iken, diğerlerinde ? 1/160 idi. Bunların 16'sında kan kültürü pozitif bulundu. Grup 2'de ise SAT değerleri negatif idi. Nested PZR yöntemiyle yapılan çalışmada hastaların %97'sinde, RT-PZR `de ise % 57 oranında pozitiflik saptanırken, her iki yöntemde de kontrollerin hepsi negatif bulundu. Her iki yöntemde de özgüllük % 100 bulunurken, RT-PZR'de duyarlılığın düşük olmasının kullanılan farklı primerlere veya ekstraktların saklama şartlarına bağlı olabileceği düşünüldü. Kullanılan nested PCR yönteminin erken ve hızlı tanıda yüksek duyarlılıkta olduğu, aynı şekilde RT-PZR'ye göre daha duyarlı ve ucuz olduğu; bu nedenle brusellozun erken ve doğru tanısı için kullanılmasının doğru olacağı sonucuna varıldı.
Özet (Çeviri)
Brucellosis is a public health problem in our country like many parts of the world. The illness is a zoonosis caused by Brucella spp. and has non specific symptoms and physical signs. Bacterial culture is gold standard in the diagnosis of brucellosis but it is difficult and time consuming, so serologic techniques are used routinely. But they have low specificity because of the cross reactions. Molecular methods like polymerase chain reaction (PCR) are good alternatives in the early and rapid diagnosis of brucellosis, like other infectious diseases.The aim of this study is to use two different PCR methods in diagnosis of brucellosis and compare their efficiency and cost with conventional methods.The study included 35 patients who referred to Kırıkkale University Medical Faculty, department of Infectious Diseases and Clinical Microbiology with symptoms and laboratory findings of brucellosis (Group-1) and 20 healthy volunteers (Group-2). Sera for serology (SAT, Coombs test) and whole blood samples (collected in tubes with EDTA) for PCR were collected from each subject in both groups and two blood cultures were done for all patients in Group-1. DNA was extracted from peripheral mononuclear cells obtained from the blood samples and in house and real time PCR assays were used to detect brucella DNA.SAT titers of patients in Grup-1 were ? 1/160 except one patient that was 1/80. Blood cultures were of 16 patients were positive. The SAT titers of Group-2 were negative. Thirty-four (97%) of the patients in Group-1 had positive nested PCR results, while 20 (57%) were positive with RT-PCR. None of the 20 volunteers in Group-2 were positive with both methods. The low sensitivity we found with RT_PCR may be partly explained by primer used or inadequate preservation of the leukocyte pellets (4 months at ?20°C) before RT-PCR assay. Nested PCR has high sensitivity and it has low-priced when compared with RT-PCR; therefore it may be used in rapid diagnosis of brucellosis.
Benzer Tezler
- Eskişehir ve çevresinde tüketilen sütlerin brucella antikorları açısından değişik yöntemlerle incelenmesi
Consumed milks were determinated with different methods by the perspective of brucella antibodies, at Eskişehir and it's district
NURHAN MUTLU
- Bursa bölgesindeki koyunlarda campylobacter ve salmonella enfeksiyonları
Başlık çevirisi yok
A.FİGEN BÜYÜKÇOBAN
Doktora
Türkçe
1988
Veteriner HekimliğiUludağ ÜniversitesiMikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. MUSTAFA KAHRAMAN
- Bruselloz tanısında çeşitli serolojik yöntemlerin değeri
Başlık çevirisi yok
CAHİDE BALABAN(HASANOĞLU)
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
1989
Mikrobiyolojiİstanbul ÜniversitesiMikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ENVER TALİ ÇETİN
- Brusellozun serolojik tanısında enzyme linked imunosorbent assay, standart tüp aglütinasyon ve rose bengal plate testlerinin karşılaştırılması
Comparison of enzyme linked immunosorbent assay, standart tube agglutination and rose bengal plate tests in diagnosis of brucellosis
AHMET MURAT BİLGİN
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
1990
MikrobiyolojiGazi ÜniversitesiMikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. SEVGİ TÜRET
- Brusellozluların rivanol ve 2-mercaptoethanol deneyleri yapılan serumlarında ELISA (Enzyme-Linked immunosorbent Assay) ile IgM aranması
Başlık çevirisi yok
MUSTAFA AK
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
1990
Enfeksiyon Hastalıkları ve Klinik Mikrobiyolojiİstanbul ÜniversitesiEnfeksiyon Hastalıkları ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. EKREM KADRİ UNAT