Geri Dön

Pyrococcus furiosus kitinazının rekombinant üretimi ve analizi

Production and analysis of recombinant chitinase from Pyrococcus furiosus

PDF İndir

  1. Tez No: 457270
  2. Yazar: TUĞBA AKSOY
  3. Danışmanlar: DOÇ. DR. BİLGE HİLAL ÇADIRCI
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyomühendislik, Bioengineering
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2016
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Gaziosmanpaşa Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyomühendislik Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 70

Özet

Kitinazlar (EC 3.2.1.14) kitindeki N-asetil glukozaminler arasında bulunan β-1,4 glikozit bağını hidrolizleyebilen enzimlerdir. Arke domaini içinde, genetik ve moleküler bilgi açısından şimdiye kadar sadece 10 öriarkeal kitinaz bulunmuştur. Bunların çoğu bilinen homoloji genom işleme ile belirlenmiştir. Sulfolobus tokodaii, Halobacterium salinarum, Thermococcus chitinophagus, T. kodakaraensis KOD1 ve Pyrococcus furiosus'un rekombinant teknikler de dahil olmak üzere kitinolitik aktiviteleri üzerine çalışılmış ancak gerçek kitin parçalayabilme yetenekleri henüz ortaya çıkarılamamıştır. P. furiosus'un genom veritabanında kitinolitik özellik gösteren iki ORF homoloğu bulunmuştur. P. furiosus'un iki bitişik ORF'sinde arada bir adet insersiyon olan, iki kitin bağlama domaini ve iki katalitik domain bulunmuştur. Konu ile ilgili olan en güncel çalışmada rekombinant enzimin kristal kitine karşı aktivitesi incelenmiştir. Enzimin aktivitesi kitin substratının serbest indirgen ucunun ölçümüyle belirlenmiştir ve 1.6 μmol/mg olarak hesaplanmıştır. Çalışmamızda P. furiosus arkesine ait olan kitinaz enziminin aktivitesini arttırmak ve moleküler özelliklerinin belirlenmesi amacıyla katalitik aktivitesi yüksek olduğu literatürde bildirilen kitin bağlama bölgesi ve ilgili katalitik domain, pET 28a(+) ifade vektörüne aktarıldıktan sonra Escherichia coli rosetta (DE3) bakterisinde ifadelendirilmiştir. P. furiosus kitinaz ekspresyonu, 0.2 M IPTG varlığında gerçekleşmiş ve protein moleküler ağırlığı yaklaşık 55 kDa olarak belirlenmiştir.

Özet (Çeviri)

Chitinase (EC 3.2.1.14) the enzymes which are capable of hydrolyzing the β-1,4 bonds between N-acetyl glucosamines in chitins. In archaea domain, in terms of genetic and molecular information it has been found so far only 10 euryarcheal chitinase. Most of them have been identified similarities between known genes by the genome mining. Investigations are mostly focused on Sulfolobus tokodaii, Halobacterium salinarum, Thermococcus chitinophagus, T. kodakaraensis KOD1 and Pyrococcus furiosus chitinases including recombinant techniques, but the ability to break down the actual chitins has not yet been revealed. Two homologous ORF which showed chitinolytic activity was found in P. furiosus genome database. P. furiosus two adjacent ORFs in combination with one insertion, were binding domain of the two continents and two catalytic domains. In the latest study, the recombinant enzyme activity against the crystal chitins were examined. The enzyme activity was determined by measuring the free reducing end of the chitin substrate and calculated as 1.6 μmol/mg. In our study, in order to increase the activity of the P. furiosus chitinase and determine the properties, the claimed molecular chitin binding region and the corresponding catalytic domain according to the literature, were transferred into pET 28b (+) expression vector and expressed in Escherichia coli Rosetta (DE3). P. furiosus chitinase was expressed in the presence of 0.2 M IPTG and protein molecular weight was determined approximately 55 kDa.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    305088

    Recombinant Pyrococcus furiosus extracellular alpha-amylase expression in Pichia pastoris

    Pyrococcus furiosus hücre dışı alfa-amilaz enziminin rekombinant Pichia pastoris ile ekspresyonu

    ERDEM BOY

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2011

    BiyoteknolojiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Kimya Mühendisliği Bölümü

    PROF. DR. GÜZİDE ÇALIK

    PROF. DR. PINAR ÇALIK

  2. Tez No

    305083

    Bioprocess development for thermostable glucose isomerase production

    Isıya dayanıklı glukoz izomeraz üretimi için biyoproses geliştirilmesi

    VAHİDEH ANGARDİ

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2011

    BiyokimyaOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Kimya Mühendisliği Bölümü

    PROF. DR. PINAR ÇALIK

  3. Tez No

    90965

    Engineering of citrate synthase from thermoplasma acidophilum to investigate the molecular mechanisms of thermostability

    Thermoplasma acidophilum sitrat sentaz enziminde thermal stabilitenin moleküler mekanizmasının protein mühendisliği yöntemi ile araştırılması

    İPEK ERDURAN

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2000

    BiyolojiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. SEMRA KOCABIYIK

  4. Tez No

    783309

    Expression, purification and characterization of high-fidelity DNA polymerase

    Yüksek-duyarlı DNA polimeraz enziminin üretilmesi, saflaştırılması ve karakterizasyonu

    KÜBRA TÜRK

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2022

    Biyoteknolojiİstanbul Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. GİZEM DİNLER DOĞANAY

  5. Tez No

    223154

    Heterologous expression of two putative glutamate synthase subunits from Pyrococcus horikoshii

    Pyrococcus horikoshii iki putatif glutamat sentaz küçük altünite homologlarının heterolog ekspresyonu

    HANDE AKÇE

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2006

    Biyolojiİstanbul Teknik Üniversitesi

    İleri Teknolojiler Ana Bilim Dalı

    DOÇ.DR. BENAN DİNÇTÜRK BOTOFTE

Geri Dön