Bendamustin ile indüklenen hl60 hücre serisinde apoptozun ve hücre döngüsünde görevli genlerin ekspresyon değişimlerinin belirlenmesi
Determination of apoptosis and changes on/of cell cycle genes expressions in hl60 cell line induced with bendamustine
- Tez No: 464761
- Danışmanlar: YRD. DOÇ. DR. NUR SELVİ GÜNEL
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Tıbbi Biyoloji, Medical Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2014
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Ege Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 96
Özet
Akut miyeloid lösemi (AML), hematopoetik öncül hücrelerin heterojen klonal bir hastalığıdır. Akut promiyelositer lösemi (APL), bir AML alt tipidir ve morfolojik olarak anormal promiyelositler ile karakterize edilir. APL'de görülen en belirgin kromozom düzensizliği ise 15. kromozomdaki promyelositik lösemi (PML) geni ile 17. kromozomdaki retinoik asit reseptör (RAR) alfa geninin translokasyonu sonucu bir füzyon proteini oluşturmasıdır. Bendamustin suda çözünebilen, beyaz, nitrojen hardal grubu ve bütirik asit yan zinciri bulundurması nedeniyle amfoterik özellik özellik gösteren mikrokristallin tozudur. Alkilleyici ajan olan bendamustin aynı zamanda pürin analoğu özelliği gösterir ve diğer alkilleyici ajanlara göre toksisite profili daha ılımlıdır. Çalışmadaki amacımız bendamustinin APL hücre serisi olan HL60 hücreleri üzerindeki sitotoksik, sitostatik ve apoptotik etkileri incelemekti ve hücre döngüsü, mitotik katastrof, apoptoz, DNA onarım ve Nf-κB sinyal yolağı genlerinin ilaç ile muamele sonrasındaki ekspresyon değişimleri belirlemektir. Çalışmamızda bendamustinin APL'ye model oluşturan HL60 hücreleri üzerindeki sitotoksik etkisini WST-1 testi ile, apoptotik etkisini Annexin V ve Apo Direct Tunnel methoduyla, sitostatik etkisini ise Cycletest Plus DNA Reagent Kit ile değerlendirilmiştir. Ayrıca bendamustinin HL60 hüce serilerindeki hücre döngüsü, mitotik katastrof, apoptoz, DNA onarım ve Nf-κB sinyal yolağı genlerinin mRNA ekspresyonlarına etkisi kantitatif RT-PCR ile rölatif olarak belirlenmesidir. Bendamustinin sitotoksik etkisinin HL60 hücre serisi üzerinde yüksek dozlarda etkili olduğu belirlenmiştir. Bununla birlikte, apoptotik etkisinin her iki yöntem ile de doza bağımlı olarak anlamlı bir şekilde arttığı belirlenmiştir. Bendamustin ile 48 saat muamele sonrasında HL-60 hücrelerinde apoptoz ile ilişkili olduğu bilinen CASP3, CASP8, CASP9 ekspresyonlarını sırasıyla 2.4, 5.7, 6.8 – kat arttırdığı saptanmıştır. Ayrıca mitotik katastrofi ile ilişkili olduğu bilinen Plk1 ekspresyonun 2.5-kat azldığını ve tümör supresör olduğu bilinen Plk2 ekspresyonunda ise 17 katlık bir artma belirlenmiştir. Sonuç olarak, bendamustinin apoptoz ve mitotik katastrof gibi hücre ölüm mekanizmaları üzerinde etkili olduğunu ve APL'nin tamamlayıcı tedavisinde kullnılabileceğini düşünmekteyiz.
Özet (Çeviri)
Acute myeloid leukemia (AML), is a heterogeneous clonal disorder of hematopoietic progenitor cells. Acute promyelocytic leukemia (APL), is a subtype of AML and characterized by aberrant morphology of promyelocytes. The most specific chromosomal disorder that occurs in APL patients is (15;17) translocation. This translocation the promyelocytic leukemia (PML) gene on chromosome 15 and the retinoic acid receptor (RAR) alpha gene on chromosome 17 fuse and produce a PML-RARα fusion protein. Bendamustine is a water soluble, white, microcrystalline powder with amphoteric properties due to a nitrogen mustard group and a butyric acid side chain. Bendamustine acts as an alkylating agent and also has purine analog activity. Bendamustine has more moderate toxicity profile than the other alkylatingg agents. In our study, it is aimed to investigate cytotoxic, cytostatic and apoptotic effects of bendamustine on APL cell line HL60. Also we aime to evaluate the effect of bendamustine on HL60 cells according to the expression of genes including several signal transduction pathways such as; cell cycle, mitotic catastrophe, apoptosis, DNA repair and Nf-κB. In our study, cytotoxic effect of bendamustine on HL60 cell line was assessed by WST-1 assay, apoptotic effect by Annexin V and Apodirect Tunnel assay and cytostatic effect by Cycletest Plus DNA Reagent Kit. Also the effect of bendamustine on expression levels of several cell cycle, mitotic catastrophe, apoptosis, DNA repair and Nf-κB pathway related genes in HL60 was determined by quantitative RT-PCR relatively. We determined that bendamustine has cytotoxic effect on HL60 cell line with high-dose treatment. Also we found that Bendamustine significantly induces apoptosis in dose dependent manner and has no cytostatic effects on HL60 cells. After the 48 hours treatment with bendamustine, expression levels of apoptosis related CASP7, CASP8, CASP9 genes were upregulated 2.4, 5.7, 6.8 fold in HL60 cells, relatively. Also expressions of mitotic catastrophe related genes Plk1downregulated 2.5 fold and Plk2 which as known as tumor suppressor gene, upregulated 17fold. In conclusion, our data suggest that Bendamustine is effective on cell death mechanisms such as apoptosis ve mitotic catastrophe and can be used in supplement APL treatment.
Benzer Tezler
- İlaç-DNA etkileşimine dayalı elektrokimyasal biyosensörlerin tasarımı ve uygulamaları
Design and application of electrochemical biosensors based on drug-DNA interaction
AYLİN EROL
Yüksek Lisans
Türkçe
2020
KimyaAydın Adnan Menderes ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. MİHRİCAN MUTİ
- Bendamustin hcı 'nin lipozomal formülasyonun geliştirilmesi
Developing liposomal formulation in bendamustin hci
SELİM GİRGİN
Yüksek Lisans
Türkçe
2017
Eczacılık ve FarmakolojiEge ÜniversitesiFarmasötik Teknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ERCÜMENT KARASULU
- Rituksimab içerikli kemoimmunoterapi alan kronik lenfositik lösemi'li hastalarda obezite ve cinsiyetin tedavi etkinliği üzerine etkisi: Retrospektif değerlendirme
Effect of obesity and gender on treatment efficacy in chronic lymphocytic leukemia patients receiving rituximab based chemoimmunotherapy: Retrospective evaluation
NURDAN UZUNER
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2022
HematolojiKaradeniz Teknik Üniversitesiİç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MEHMET SÖNMEZ
- Hematolojik malignansili hastalarımızda bendamustin ve rituksimab kombine tedavi sonuçları
Outcomes of our patients with hematological malignancies treated wi̇th bendamustine and rituximab
HİLAL NUR YALDIZ
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2024
İç HastalıklarıÇukurova Üniversitesiİç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. EMEL GÜRKAN
- Kronik lenfositik lösemi tanılı olgularda tedavi durumu ile COVİD-19 enfeksiyonu sıklığı, prognozu ve mortalitesi arasındaki ilişki
Başlık çevirisi yok
FEYZA YAYLACI MERT
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2023
HematolojiSağlık Bilimleri Üniversitesiİç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. OSMAN YOKUŞ