Melatonin´in mikroglial hücrelerde inflamazom aktivasyonu üzerine etkisi
The effects of melatonin on inflammasome activation in microglial cells
- Tez No: 466351
- Danışmanlar: PROF. DR. ŞERMİN GENÇ
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Genetik, Biology, Genetics
- Anahtar Kelimeler: Melatonin, mikroglia, inflamazom, piroptoz, LPS, ATP, Melatonin, microglia, inflammasome, piroptosis, LPS, ATP
- Yıl: 2017
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Dokuz Eylül Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Sinir Bilimi Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Temel Sinirbilimler Bilim dalı
- Sayfa Sayısı: 57
Özet
Doğal bağışıklık sistemi vücuda giren patojenik mikropların hızlı bir şekilde tanınıp tayin edilmesinde görevlidir. Gerek membrana bağlı gerekse sitozolik reseptörler bu süreçte görev almaktadır. İnflamazom aktivasyonu klasik inflamatuar yanıtlardan farklıdır. Mikrobiyal ajanların yanı sıra metabolik stres ürünlerinin (ürik asit, ATP gibi) ve asbestos, silika gibi dışsal ajanların inflamazom aktivasyonuna neden olduğu bilinmektedir. İnflamazom aktivasyonu, inflamatuar yanıtların başlatılmasında rolü olan bir süreçtir. Aktivasyon hücreden IL-1β, IL-18 sitokinlerinin salınımı ve Kaspaz-1 aktivasyonu ile sonlanır. Buna bağlı olan inflamazom başlangıcı ise inflamatuar yanıtların harekete geçirmesi suretiyle piroptotik hücre ölümüne yol açar. Bu nedenle inflamazom aktivasyonunun baskılanması gereklidir. Melatonin (MEL) sitoprotektif ve aynı zamanda anti-inflamatuar bir moleküldür. Bu projede MEL'in N9 mikroglial hücre hattında inflamazom aktivasyonuna etkisinin incelenmesi amaçlanmıştır. Projemizde N9 mikroglia hücrelerine LPS ve ATP verilerek inflamazom aktivasyonu sağlanmıştır. MEL'in inflamazom modelinde etkisi N9 mikroglial hücrelerde incelenmiştir. IL-1β, IL-18 ve Kaspaz-1 seviyeleri ELISA ve Western Blot yöntemleriyle; Hücre canlılığı WST-8 testi ile; Hücre toksisitesi LDH testiyle; Piroptotik ölüm PI boyamayla; Mitokondrial bütünlük ve süperoksit üretimi Mitosox ve JC-1 boyamayla; IL-1β, IL-18 ve NALP3 gen seviyelerindeki değişim rtPCR yöntemiyle bakıldı. Çalışmamızda, MEL, LPS ve ATP ile IL-1β, IL-18 ve NLRP3 için protein ve gen düzeyindeki artışı istatistiksel anlamlılıkla önlemiştir. LDH ve WST testleriyle MEL'in, LPS ve ATP ile artan inflamazom aktivasyonuyla oluşan hücre ölümü üzerinde istatistiksel olarak anlamlı azaltıcı etkisi saptandı. Bunlara ek olarak uyaran ile artan mitokondrial ROS ve mitokondrial bütünlük bozulması LPS+ ATP grubuna göre MEL verildikten sonra yine istatistiksel anlamlılıkla azaldığı gözlemlendi. Sonuçlarımız MEL'in N9 mikroglial hücrelerde NLRP3 inflamazom aktivasyonunu baskıladığını ortaya koymuştur. Bu çalışma MEL'in mikroglial hücrelerde inflamazom aktivasyonunu baskılaması üzerine etkili olduğu kanıtlayan ilk çalışmadır.
Özet (Çeviri)
The natural immune system is responsible for the rapid identification and identification of pathogenic microbes entering the body. Both membrane-bound and cytosolic receptors are involved in this process. Inflammatory activation is different from classical inflammatory responses. In addition to microbial agents, metabolic stress products (such as uric acid, ATP) and exogenous agents such as asbestos and silica are known to cause inflammatory activation. Inflammatory activation is a process that has a role in the initiation of inflammatory responses. Activation results in the release of IL-1β, IL-18 cytokines and activation of Caspase-1 in the cell. Inflammatory activation may also result in inflammation of the inflammatory response, as well as pyrogenic death of the cell. Therefore, suppression of inflammatory activation is necessary. Melatonin (MEL) is a cytoprotective and anti-inflammatory molecule at the same time. In this project, it is aimed to investigate the effect of MEL on N9 microglial cell line for inflammatory activation. In our protocol, N9 microglia cells were given LPS and ATP to activate inflammation. The effect of MEL in the inflammatory model was examined in N9 microglial cells. IL-1β, IL-18 and Caspase-1 levels by ELISA and Western Blot methods; Cell viability was assessed by WST-8 test; Cell toxicity by LDH assay; Piroptopic cell death with PI staining; Mitochondrial integrity and superoxide production Mitosox and JC-1 staining; Changes in IL-1β, IL-18 and NALP3 gene levels were assessed by rtPCR. In our study, the increase in protein and gene levels for IL-1β, IL-18 and NLRP3 with MEL, LPS and ATP was statistically significant. LDH and WST tests showed statistically significant reductions in cell death due to increased inflammation of MEL, LPS and ATP. In addition, increased mitochondrial ROS and mitochondrial integrity deterioration with stimuli were observed to decrease with statistical significance after administration of MEL according to LPS + ATP group. Our results demonstrate that MEL suppresses NLRP3 inflammatory activation in N9 microglial cells. This is the first study to demonstrate that MEL is effective on suppressing inflammatory activation in microglial cells.
Benzer Tezler
- Parkinson hastalığı modelinde melatoninin toll benzeri reseptör 4 ilişkili inflamatuvar yolak üzerine etkisi
The effect of melatonin on toll like receptor 4 related inflammatory pathway in the parkinson's disease model
SENDEGÜL YILDIRIM
Yüksek Lisans
Türkçe
2020
Histoloji ve EmbriyolojiAkdeniz ÜniversitesiHistoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. GAMZE TANRIÖVER
- Yenidoğan sıçanlarda kortikal displazi modelinde melatoninin davranış değişiklikleri üzerine etkileri
Effects of melatonin on behavioral changes in neonatal rat cortical dysplasia model
HASAN HÜSEYİN KARADELİ
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2010
NörolojiYeditepe ÜniversitesiNöroloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. CANAN AYKUT BİNGÖL
- Melatoninin model hücre membranları ile etkileşmesinin biyofiziksel yöntemlerle incelenmesi
The investigation of the interaction of melatonin with model mebrane by using biophysical methods
İPEK ŞAHİN
Yüksek Lisans
Türkçe
2003
Fizik ve Fizik MühendisliğiEge ÜniversitesiFizik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. NADİDE KAZANCI
PROF. DR. FERİDE SEVERCAN
- Melatoninin fare ince ve kalin bağirsak motilitesi üzerine etkisi
Effects of melatonin on the motility of mouse small and large intestine
ZEHRA ELVAN ERALP
Doktora
Türkçe
2009
Veteriner HekimliğiAnkara ÜniversitesiFizyoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
PROF. DR. İLKSİN PİŞKİN
- Melatoninin lipopolisakkarit ile indüklenmiş deneysel sepsis modelinde sıçan kardiyak fonksiyonu üzerine etkisi
Effect of melatoni̇n on cardi̇ac function in an experi̇mental model of sepsis induced by lipopolysaccharide in rats
BERNA KÖSEKAYA
Doktora
Türkçe
2020
Eczacılık ve FarmakolojiHacettepe ÜniversitesiTıbbi Farmakoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ALPER BEKTAŞ İSKİT