Geri Dön

İnsan büyüme hormonu salgılatma sinyal dizisinin Tetrahymena thermophila tarafından rekombinant protein üretiminde kullanımı

Use of human growth hormone secretory signal sequence in recombinant protein production by Tetrahymena thermophila

PDF İndir

  1. Tez No: 479955
  2. Yazar: SERKAN DERELİ
  3. Danışmanlar: DOÇ. DR. MUHİTTİN ARSLANYOLU
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoloji, Biyoteknoloji, Biology, Biotechnology
  6. Anahtar Kelimeler: Büyüme hormonu, DNA-rekombinant, Sinyal peptidleri, Growth hormone, DNA-recombinant
  7. Yıl: 2017
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Anadolu Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: İleri Teknolojiler Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.

Özet

Tetrahymena thermophila ökaryotik, silli ve tek hücreli bir organizma olup, kısa bölünme süresi ve kolay kültürizasyona sahip bir model organizmadır. Organizmanın rekombinant kapasitesi, insan DNazI enzimi ile insan alkalin fosfataz proteinlerinin rekombinant üretim çalışmaları ile tanımlanmıştır. Günümüzde ilaç sektöründe ihtiyaç duyulan terapötik proteinlerden biri olan ve büyüme bozukluğu olan bireylerin tedavisinde kullanılan insan büyüme hormonunun üretimi maya, E. coli ve insan kücre kültüründe gerçekleştirilmektedir. Daha önce bu proteinin üretiminde kullanılmamış T. thermophila'nın insan büyüme hormonunun E.R sinyal dizisini tanıyarak işleyebileceği ve rekombinant proteini dışarıya salgılayarak üretebileceği çalışmanın hipotezini oluşturmaktadır. Bu amaç doğrultusunda, E.R sinyal dizisi ile birlikte hGH geni dizisinin kodonları organizmaya uyumlu hale getirilerek sentetik olarak ürettirilmiştir. Oluşturulan hGH üretim gen kasetleri, 45 kopyalı genom entegrasyonunu sağlayan pNeo4 ve 10.000 kopyalı ekstrakromozomal dairesel pIGF vektörlerine klonlanarak, biyolistik silah ile konjugatif/vejetatif T. thermophila hücrelerine transforme edilmiştir. Pozitif transformantlar ısı şoku veya CdCI2 ile indüklendikten sonra hücre içi ve hücre dışı ortamdan saflaştırılan proteinlerin iki bağımsız SDS-PAGE ve Western Blot analizi, hücre içi ve hücre dışı ortamda yaklaşık 23 kDa'lık sinyali kesilmiş bir proteinin varlığını göstermiştir. Sonuç olarak; T. thermophila'nın insan hGH'nin E.R. sinyal dizi bölgesini tanıyıp kullandıktan sonra kesip uzaklaştırdığı ve rekombinant proteini hücre dışına salgılayabildiği anlaşılmıştır.

Özet (Çeviri)

Tetrahymena thermophila is a eukaryotic, ciliated, single-celled model organism with short division time and easy cultivation features. The recombinant capacity of the organism demonstrated by recombinant production studies of human DNaseI and human alkaline phosphatase proteins. The production of human growth hormone, which is one of the therapeutic proteins needed in the pharmaceutical sector and used to treat individuals with the growth disorder, is carried out in yeast, E. coli, and the human cell culture. It is hypothesized that T. thermophila, which is not used to produce this protein before, can recognize the E.R signal sequence of human growth hormone and secrete the recombinant protein outside of the cell. For this purpose, the codon sequence of the hGH gene with hGH E.R signal sequence was adapted to the organism and produced synthetically. The generated hGH gene cassettes were cloned into pNeo4 vectors providing genome integration over 45 copies and extrachromosomal pIGF circular vectors containing origin with 10.000 copy number, were transformed into conjugative/vegetative T. thermophila cells by biolistic particle gun. After inducing positive transformants by heat shock or CdCl2, two independent SDS-PAGE and Western Blot analyses of purified proteins from the cells showed recombinant protein has approximately 23 kDa molecular mass and the signal sequence was processed. As a result; it is understood that T. thermophila recognizes human hGH E.R signal sequence, uses the signal sequence, cuts it away and secretes the recombinant protein outside the cell.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    658617

    Tetrahymena thermophila insülin benzeri proteinlerininimmüno-afinitik tabanlı belirlenmesi, rekombinant üretimive hormonal karakterizasyonu

    Immuno-affinity based determination, recombinantproduction and hormonal characterization of tetrahymenathermophila insulin-like protein(s)

    AYÇA FULYA ÜSTÜNTANIR DEDE

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2021

    Endokrinoloji ve Metabolizma HastalıklarıEskişehir Teknik Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. MUHİTTİN ARSLANYOLU

  2. Tez No

    919272

    Bağırsak hasar modellerinde kemik iliği mezenkimal kök hücre ve bağırsak mezenkimal kök hücrelerin rejeneratif ve immün modülatuvar etkilerinin karşılaştırılması

    Comparison of regenerative and immune modulatory effecets of bone marrow and intestinal mesenchymal stem cells i intestinal damage models

    BURCU PERVİN

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2025

    BiyolojiHacettepe Üniversitesi

    Kök Hücre Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. FATİMA AERTS KAYA

  3. Tez No

    303133

    Obezlerde, aerobik egzersiz sırasında alınan farklı sıvıların, iştahı düzenleyen hormonlar üzerine etkisi

    The effect of different liquids consumed during aerobic exercise on appetite regulating hormones ın obese subjects

    RAİF ZİLELİ

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2011

    SporAbant İzzet Baysal Üniversitesi

    Antrenörlük Eğitimi Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. ÖNDER ŞEMŞEK

  4. Tez No

    246258

    Reconstruction of insulin signaling network in H. Sapiens

    H. Sapiens?de insülin sinyalleşmesi ağ yapısının oluşturulması

    PELİN ÜMİT

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2009

    BiyoteknolojiBoğaziçi Üniversitesi

    Kimya Mühendisliği Bölümü

    PROF. KUTLU ÜLGEN

  5. Tez No

    16244

    İnsan büyüme hormonu geniyle bir transfeksiyon çalışması

    Başlık çevirisi yok

    GÜHER SARUHAN(DİRESKENELİ)

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    1991

    Fizyolojiİstanbul Üniversitesi

Geri Dön