Tuz Gölü'nden izole edilen halofilik mikroorganizmaların serin proteaz aktivitelerinin belirlenmesi ve kısmi saflaştırılması
The determination of serine protease activities of halophilic microorganism isolated from Tuz Lake and their partial purification
- Tez No: 498515
- Danışmanlar: DOÇ. DR. GÜLTEN ÖKMEN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoteknoloji, Mikrobiyoloji, Biotechnology, Microbiology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2017
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Muğla Sıtkı Koçman Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 103
Özet
Bu çalışmanın amacı, halofil mikroorganizmalardan serin proteaz enziminin tanımlanması, aktivitelerinin belirlenmesi ve kısmen saflaştırılmasıdır. Tuz Gölü'nden izole edilen kültürler Sehgal-Gibbons broth (SGB) ve Sehgal-Gibbons agar (SGA) ortamında yetiştirildi. Proteaz aktivitesi olan kültürler %1 skim milk içeren SGA ortamı vasıtası ile belirlenmiştir. En iyi proteaz etkinliğine sahip 3 kültür sonraki basamaklarda kullanılmıştır. En iyi proteaz aktivitesine sahip bir kültür, enzim saflaştırması için aday olarak seçilmiştir. Bu kültür, amonyum sülfat çökeltmesi ve jel geçirgenlik kromatografisi ile saflaştırma için kullanılmıştır. Enzim % 22 saflaştırma oranı ve % 6,2 verimle elde edilmiştir. Enzimin varlığı sodyum dodesil sülfat-poliakrilamid jel elektroforezi (SDS-PAGE) yöntemi ile belirlenmiş ve enzimin yaklaşık 55 kD olduğu bulunmuştur. Enzim karakterizasyonu çalışmalarında, saf enzimin aktiviteleri farklı sıcaklık, pH, tuz konsantrasyonu, metal iyonları, substratlar, inhibitörler ve yüzey aktif maddelerinde saptanmıştır. Optimum enzim aktivitesi 60 oC' de bulunmuştur. pH 7' de, enzim optimum aktivite göstermiştir. Farklı tuz konsantrasyonlarında, enzimin optimum aktivitesi % 10 NaCl ortamında bulunmuştur. Farklı metal iyonlarının kullanıldığı çalışmalarda, optimum enzim aktivitesi 1 mM MgCl2 (% 95,9) içeren ortamda belirlenmiştir. Buna ek olarak, optimum enzim aktivitesi % 0,65 sığır serum albümin (BSA) içeren ortamda bulunmuştur. Fenil metil sülfonil florid (PMSF) enzim aktivitesini çok fazla inhibe etmesinden dolayı serin proteaz olduğunu düşündürmektedir. Farklı yüzey aktif maddelerinin kullanıldığı çalışmalarda, enzim aktivitesi sodyum dodesil sülfat (SDS)' den en fazla inhibe (% 87,5) olmuştur.
Özet (Çeviri)
The purpose of this work was to identify, determine their activities, and perform purification of this enzyme serine protease from halophilic microorganisms. The cultures isolated from Lake Tuz were grown in Sehgal-Gibbons broth (SGB) and Sehgal-Gibbons agar (SGA) media. The cultures with protease activity were determined by SGA media contain 1% skim milk. The 3 cultures with best protease activity were used at the following. The one culture with the best protease activity has been selected as candidate for enzyme purification. This culture was used for ammonium sulphate precipitation and purification by gel permeation chromatography. The enzyme was obtained with 22 % purification rate and 6.2 % yield. The presence of the enzyme was determined by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) method, and the enzyme was found to be about 55 kD. In the enzyme characterization studies, activities of pure enzyme have been determined at different temperatures, pH, salt concentrations, metal ions, substrat, inhibitors and surfactants. Optimal enzyme activity was found at 60 °C. In pH 7, enzyme showed optimum activity. At different salt concentrations, the optimum activity of enzyme has been found in 10 % NaCl containing media. In studies with the different metal ions in the medium optimum enzyme activity was determined in the medium containing 1 mM MgCl2 (95.9 %). Additionally, optimum enzyme activity was found in the medium containing 0.65 bovine serum albumin (BSA). Since the inhibition of enzyme by phenyl methyl sulfonyl fluoride (PMSF) was dramatic, it was thought that enzyme is serine protease. In studies with different surfactants in the medium the highest inhibition (% 87.5) was due to sodium dodecyl sulfate (SDS).
Benzer Tezler
- Halofilik arkelerde poli-β-hidroksibütirat (PHB) üretiminin belirlenmesi ve optimizasyonu
Determination and optimization of poly-β-hydroxybutyrate (PHB) production in halophylic arcea's
EYLEM TÜRE
Yüksek Lisans
Türkçe
2019
BiyoteknolojiOndokuz Mayıs ÜniversitesiTarımsal Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ASLIHAN KURT KIZILDOĞAN
- Characterization of bacterial isolates from salt lake
Tuz Gölü'nden bakteri izolatlarının karakterizasyonu
FİRDEVS YALÇIN
Yüksek Lisans
İngilizce
2000
BiyoteknolojiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. G. CANDAN GÜRAKAN
YRD. DOÇ. DR. AYŞEGÜL OZAN
- Tuz Gölü'nden izole edilen aşırı halofilik bakterilerin izolasyon ve identifikasyon yöntemlerinin geliştirilmesi
Development methods of isolation and identification of extremely halophilic bacteria isolated from salt lake
NURAY KALLI
Yüksek Lisans
Türkçe
2000
BiyolojiMarmara ÜniversitesiBiyoloji Eğitimi Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. MERAL BİRBİR
- Tuzların içindeki aşırı halofil arkelerin alternatif elektrik akımı ile inaktivasyonu
Inactivation of extremely halophilic archaea in salt samples with alternating electric current
SEMA ANIK
Yüksek Lisans
Türkçe
2014
MikrobiyolojiMarmara ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MERAL BİRBİR
DOÇ. DR. YAŞAR BİRBİR
- Tuz Gölü'nden izole edilen arkelerin (halobacteriales: halobacteriaceae) filogenetik tür tanımlaması, karotenoidlerinin antioksidan aktivitelerinin belirlenmesi
Phylogenetic identification of archaea (halobacteriales: halobacteriaceae) isolated from salt lake and antioxidant activity of their carotenoids
FEVZİYE IŞIL KESBİÇ
Doktora
Türkçe
2020
BiyolojiKastamonu ÜniversitesiGenetik ve Biyomühendislik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. NEJDET GÜLTEPE