Geri Dön

Fare embriyonik kök hücrelerin endotelyal hücrelere farklanmasında Ctcfl geninin rolü

Role of ctcfl genes in the differentiation of mouse embryonic stem cells into endothelial cells

PDF İndir

  1. Tez No: 520591
  2. Yazar: GİZEM GAMZE TAŞ
  3. Danışmanlar: DOÇ. DR. GÜLER LEYLA SATI
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Histoloji ve Embriyoloji, Histology and Embryology
  6. Anahtar Kelimeler: Ctcfl, vaskülogenez, endotelyal farklanma, embriyonik kök hücre, Ctcfl, vasculogenesis, endothelial differentiation, embryonic stem cell
  7. Yıl: 2018
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Akdeniz Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 127

Özet

Amaç: CTCFL, literatürde BORİS (Brother of the Regulator of Imprinted Sites), CCCTC-bağlanma faktörü-benzeri protein ya da CTCF-T olarak ifade edilen bir proteindir. Ctcfl'in aşırı ekspresyonunun embriyogenez sırasında, vasküler bozukluklar, çoklu organ patolojileri ve neonatal ölüm ile bağlantılı olduğu ortaya konulmuştur. Bu noktadan hareketle çalışmamızda, doksisiklin ile Ctcfl gen ekspresyonunun indüklendiği fare embriyonik kök hücrelerinde (EKH), Ctcfl'in aşırı ekspresyonunun in vitro endotel yönünde farklanmada etkisinin olup olmadığının araştırılması hedeflenmiştir. Yöntem: Çalışmamızda Ctcfl transgenik ve transgenik olmayan fare EKH'leri kullanıldı. Kültür medyumuna 2 μg/ml doksisiklin ilavesi ile Ctcfl gen indüksiyonu gerçekleştirildi. Kültür sonrasında ektopik gen ekspresyonunun sağlanıp sağlanmadığı qRT-PCR ile mRNA, Western Blot ile protein düzeyinde değerlendirildi. Ektopik Ctcfl ekspresyonunun yapıldığı transgenik deney grubu ile transgen içermeyen ve gen indüksiyonunun yapılmadığı kontrol grupları çalışmaya dahil edildi. Her grup kendi içerisinde endotel yönünde farklandırılan ve farklandırılmayan şeklinde iki gruba ayrıldı. Faz-kontrast mikroskopik değerlendirme ile endotelyal hücre farklanması gruplar arasında karşılaştırıldı. Flow sitometri yöntemi ile endotelyal farklanmanın erken dönem belirteçlerinden Flk1 ve VE-kaderin proteinleri analiz edildi. Ayrıca Flk1, VE-kaderin, CD31, CD34, VEGF, Flt1 protein ekspresyonları immünofluoresan boyanma ile değerlendirildi. Bulgular: Doksisiklin ile indüklenen grupta Ctcfl gen ve protein ekspresyonları, kontrol gruplarına kıyasla anlamlı bir şekilde yüksek bulundu. Deney grupları arasında Flk1, VE-kaderin, CD31, CD34, VEGF ve Flt1 proteinlerinin ekspresyon paternleri açısından farklılık izlenmedi. Flow sitometri sonuçlarında, Flk1 ve VE-kaderin proteinleri gruplar arasında benzer ortalama fluoresan yoğunluk değerleri gösterdi. Sonuç: Bulgularımızda ektopik Ctcfl ekspresyonunun, in vitro endotel farklanmada Flk1 ve VE-kaderin ekspresyonları açısından belirgin bir etkisinin olmadığı gözlendi. Farklı belirteçler ve deney modelleri ile konunun olası moleküler mekanizmalarının aydınlatılması gerektiği kanısındayız.

Özet (Çeviri)

Objective: CTCFL is a protein called as BORIS (Brother of the Regulator of Imprinted Sites), CCCTC-binding factor-like protein or CTCF-T in literature. Overexpression of Ctcfl has been shown to be associated with vascular disorders, multiple organ pathologies and neonatal death during embryogenesis. Thus, in the present work, we aimed to investigate whether or not overexpression of Ctcfl induced by doxycycline would affect in vitro endothelial differentiation in Ctcfl transgenic mouse embryonic stem cells (ESCs). Method: Ctcfl transgenic and non-transgenic mouse embryonic stem cells were used. Ctcfl gene induction was performed by adding 2 μg/ml doxycycline to the culture media. Ectopic gene expression was confirmed by qRT-PCR at mRNA and by Western Blot method at protein level after culture. The transgenic group with ectopic Ctcfl gene expression and control groups with no transgene and no gene induction were included in the study. Each group was also divided into two subgroups that cells differentiated into endothelial cells or not. Phase-contrast microscopic evaluation was performed between groups for endothelial cell differentiation. Expression of early markers for endothelial differentiation, Flk1 and VE-cadherin, were analyzed by flow cytometry. Besides, expression of Flk1, VE-kaderin, CD31, CD34, VEGF and Flt1 proteins were assessed by immunofluorescence staining. Results: The Ctcfl gene and protein expressions in the doxycycline-induced group were found to be significantly higher than control groups. There were no differences in the expression patterns for Flk1, VE-cadherin, CD31, CD34, VEGF and Flt1 proteins between experimental groups. Flow cytometry results demonstrated that Flk1 and VE-cadherin proteins showed similar mean fluorescence intensity values in each group. Conclusion: According to our results, ectopic Ctcfl expression has no obvious effects on in vitro endothelial cells differentiation by means of Flk1 and VE-cadherin expressions. However, we believe that elucidation of potential molecular mechanisms of this phenomenon with different markers and experimental models are needed.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    783430

    Regulatory role of aplnr signaling in migration and differentiation of mesoderm tissue and mesenchymal stem cells

    Aplnr sinyalinin mesoderm doku ve mezenkimal kök hücre farklılaşmasındaki ve migrasyonundaki düzenleyici rolü

    HATİCE BURCU ŞİŞLİ

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2023

    BiyomühendislikYeditepe Üniversitesi

    Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. AYŞEGÜL DOĞAN

  2. Tez No

    624681

    Erişkin kedi ovaryumunda pluripotent kök hücre profili

    The profile of the pluripotent stem cells in adult domestic cat

    ERGÜL ERGEN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2017

    Histoloji ve EmbriyolojiErciyes Üniversitesi

    Histoloji ve Embriyoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. NARİN LİMAN

  3. Tez No

    360303

    Fare kuyruğunda oluşturulan sekonder lenfödem modelinde embriyonik kök hücre ve kemik iliği mezenkimal kök hücrelerinin lenfanjiyogenez üzerine etkisi

    Embryoni̇c stem cells and bone marrow-deri̇ved mesenchymal stem cells effect of lymphangi̇ogenesi̇s on the created secondary lymphedema mi̇ce model

    HASAN GÜÇ

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2014

    Plastik ve Rekonstrüktif CerrahiDokuz Eylül Üniversitesi

    Cerrahi Tıp Bilimleri Bölümü

    DOÇ. DR. CENK DEMİRDÖVER

  4. Tez No

    194766

    Fare embriyonik kök hücrelerin kültürü, farklılaşması ve karakterizasyonu

    Cultivation, differentiation and characterization of mouse embryonic stem cells

    ARZU TAŞ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2005

    Bilim ve TeknolojiKocaeli Üniversitesi

    Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ.DR. SEZEN ARAT

    PROF.DR. HAKKI DALÇIK

  5. Tez No

    494650

    Fare embriyonik kök hücrelerinin hücreler arası madde yoğunluğunun değiştirilerek farklılaştırılma süreçlerinin araştırılması

    Investigation of the differentiation course of mouse embryonic stem cell depending on the extracellular matrix concentration

    BERRİN ÖZDİL

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2017

    Histoloji ve EmbriyolojiEge Üniversitesi

    Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. HÜSEYİN AKTUĞ

Geri Dön