Purification, characterization and the effect of some drugs on glutathione s-transferase (GST) enzyme from rat erythrocyte
Glutatyon s-transferaz (GST) enziminin sıçan eritrositlerinden saflaştırılması, karakterizasyonu ve bazı ilaçların enzim aktivitesi üzerine etkisinin araştırılması
- Tez No: 521556
- Danışmanlar: PROF. DR. MEHMET ÇİFTCİ
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2018
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Bingöl Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 74
Özet
Bu çalışmada glutatyon S-transferaz (GST; EC: 2.5.1.18) enzimi, sıçan eritrositlerinden glutatyon agaroz afinite kromatografisi ile tek basamakta 6.3 EU / mg protein spesifik aktivite ile % 44 verimle 115 kat saflaştırıldı. Enzimin saflığı, sodyum dodesil sülfat poliakrilamid jel elektroforezi (SDS-PAGE) ile tespit edildi.Saf enzimin alt birimlerine ait molekül ağırlığı 25.2 kDa olarak hesaplandı. Sıçan eritrositlerinden saflaştırılan GST enzimi için yapılan karakterizasyon çalışmalarında; optimum pH potasyum fosfat tamponu pH=8, optimum iyonik şiddet potasyum fosfat tamponu 0.2M, optimum sıcaklık 50oC, stabil pH potasyum fosfat tamponu pH=8 olarak belirlendi. Yapılan kinetik çalışmalarsonucunda; GST enzimine ait iki substrat olan glutatyon (GSH) ve 1-kloro- 2,4-dinitrobenzen (CDNB) için KM ve Vmax değeri sırasıyla GSH için 1.22 mM ve 1.21 EU / mL, CDNB için 0.374 mM ve 3.614 EU / mL olarak bulunmuştur. Son olarak, bazı ilaçların enzim aktivitesi üzerine olan etkileri in vitro olarak çalışıldı. Yapılan çalışmalar sonucunda buscopan ve ampisidin antibiyotiklerinin rat eritrositlerinden saflaştırılan GST enziminin aktivitesini artırdığı, gentamisin ve klindamisin' antibyotiklerinin, enzim aktivitisini inhibe ettiği (IC50 değerleri sırasıyla 1.69 ve 6.9 mM olarak, Ki değerleri sırasıyla 1.70 ve 2.36 mM bulundu), sefazolin antibiyotiğinin ise enzim aktivitesi üzerinde bir etkisinin olmadığı tespit edildi.
Özet (Çeviri)
In this study, glutathione S-transferase (GST; EC: 2.5.1.18) enzyme was purified from rat erythrocyte in a single step by glutathione agarose affinity chromatography. The enzyme was purified with 6.3 EU/mg protein specific activity, with 44% recovery and 115 purification fold. The purity of enzyme was detected by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and produced a single protein band with a calculated molecular weight of 25.2 kDa. The characterization studies showed that the optimum pH=8 in potasium phosphate buffer, optimum temperature is 50oC, optimum ionic strength is 0.2M in potasium phosphate and stable pH=8 in potasium phosphate buffer. Kinetic studies performed for calculating KM and Vmax for (GST) using both glutathione (GSH), and 1-chloro 2,4- dinitrobenzene (CDNB) as two subsrates, the obtained results are 1.22 mM and 1.21 EU/mL respectively for GSH 0.374 mM and 3.614 EU/mL respectively for (CDNB). Finally inhibition or activation effect of some drugs on the enzyme activity were studied in vitro. The results proved that buscopan and ampisid were two activators of the enzyme, gentamicin and clindamicin were two inhibitors (IC50 values were found as 1.69 and 6.9 mM respectively and Ki values were found as 1.70 and 2.36 mM respectively), and cefazoline has no effect on the enzyme activity.
Benzer Tezler
- Glutatyon redüktaz enziminin koyun dalak dokusundan saflaştırılması, karakterizasyonu ve bazı antibiyotiklerin enzim aktivitesi üzerine etkilerinin araştırılması
Purification, characterization of glutathion reductase enzyme from sheep splen tissue and investigation of the effects of some chemical substances on enzyme activity
ÇİĞDEM ÇOBAN
- Sıçan kalp ve akciğer dokusundan glukoz?6-fosfat dehidrogenaz, 6-fosfoglukonat dehidrogenaz, glutatyon redüktaz enzimlerinin saflaştırılması, karakterizasyonu, kotinin ve bazı ilaçların enzimlerin aktiviteleri üzerine etkilerinin incelenmesi
Purifcacation and characterization of glucose 6-phosphate dehydrogenase, 6-phospho gluconate dehydrogenase and glutathione reductase enzymes from rat lung and heart tissues and investigation of the inhibition effects cotinin and some durgs on the enzymes activities
ŞEVKİ ADEM
- Tavuk karaciğerinden glutatyon redüktaz enziminin saflaştırılması, karekterizasyonu ve bazı ilaçların etkilerinin incelenmesi
Purification and characterization of chicken glutathione reductase, investigation of effects some drugs on these enzymes
HÜLYA DEMİR
- İnsan ve sığır eritrosit glutatyon redüktaz enziminin saflaştırılması, karakterizasyonu, bazı ilaç ve kimyasal maddelerin inhibisyon veya aktivasyon etkilerinin araştırılması
Purification and characterization of human and bovine erythrocytes glutathione reductase, investigation of inhibition or activation effects of some drugs
MUSTAFA ERAT
- Van gölü balığından (Chalcalburnus tarichi, p-1811) glutatyon redüktaz enziminin saflaştırılması, karakterizasyonu ve bazı ilaç ve kimyasal maddelerin etkilerinin araştırılması
Purification and characterization of glutathione reductase from Van Lake fish (Chalcalburnus tarichi, p-1811) and investigation of effects of some drugs and chemicals on this enzyme
MUHAMMED ALTUN
