Proteazın Üretimini Arttırmak için Kimyasal Mutagenez (etil metan sülfonat, EMS) Yoluyla Bacillus subtilis E6-5'den Mutant Suş Geliştirilmesi ve Üretim Ortamının Optimizasyonu
Mutant Strain İmprovement From Bacillus subtilis E6-5 By Chemical Mutagenesis (ethyl methane sulfonate, EMS) for Enhanced Production of Protease and Optimization of Growth Medium
- Tez No: 526857
- Danışmanlar: PROF. ELİF DEMİRKAN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2018
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Bursa Uludağ Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: 87
Özet
Bu çalışmada EMS ile muamele edilen Bacillus subtilis E6-5 suşundan proteaz üreten 82 adet mutant elde edilmiştir. Bu mutantlar içerisinde en büyük zon çapına (15 mm) sahip olan mutant suş seçilerek bu suş Bacillus subtilis KE20 şeklinde adlandırılmıştır. Elde edilen mutantın sıvı ortamda enzim üretim kapasitesi test edilmiş ve mutant suş ana suştan 9.2 kat daha fazla enzim üretmiştir. En yüksek enzim üretimi 48. saatte elde edilmiştir. Fiziksel ve besinsel faktörlerin enzim üretimi üzerine etkileri incelenmiştir. Besinsel faktörler için farklı karbon ve azot kaynaklarının, metal iyonlarının etkileri incelenmiştir. En iyi karbon kaynağı olarak mısır nişastası (560 IU/mL), en iyi azot kaynağı olarak skimmilk (624 IU/mL) ve metal iyonu olarak CaCl2 (196 U/mL) elde edilirken, fiziksel parametreler içinde en iyi sonuçlar 30°C'de, pH 8.0'de, çalkalama hızı olarak 100 rpm, inokülasyon miktarı % 3 ve inokülüm yaşı 3 gün olarak elde edilmiştir. Proteaz üretimini artırmak amacıyla, çalışmada besinsel ve fiziksel koşulların optimize edilmesi ile oluşturulan modifiye ortamda EK20 mutantı temel besi ortamına göre %79'luk bir artışla enzim üretimi göstermiştir. Ana suş (60 U/mL) ile kıyaslandığında mutant KE20 modifiye ortamda (992 U/mL) 16.5 kat verim artışı sağlamıştır. Elde edilen mutant suşun endüstriyel ölçekte proteaz üretimi, büyük bir potansiyele sahip olabilir.
Özet (Çeviri)
In this study, the parent strain Bacillus subtilis E6-5 was exposed to EMS by classical mutation procedure, and 82 mutants were obtained. Among of these mutants, a mutant strain was selected based on its ability to produce highest zone formation (15 mm), and strain was named as Bacillus subtilis KE20. Obtained mutant was tested for enzyme production capacity in the liquid media, the mutant KE20 showed 9.2 fold increase in protease production over the parent strain Bacillus subtilis E6-5. It was found that mutant strain produced protease on maximum level at 48th hour. In addition, the effects of nutrional andphysical factors on enzyme production were examined. For this purpose, the effects of major medium ingredients (different carbon sources, nitrogen sources and metal ions) on the production of the enzyme were used. The best carbon source was found to be corn starch (560 IU/mL). Among the organic nitrogen sources, the highest enzyme production was obtained in the presence of skimmilk (624 IU/mL), CaCl2 (196 U/mL) was detected as effective as metal ion. In the physical parameters, the best results was obtained at 30°C, pH 8.0, 100 rpm asagitation rate, 3% as inoculum size and 3 days as inoculum age. A new medium was obtained by optimizing the incubation conditions (nutrional and physical factors) of protease production from KE20 mutant. In this medium, enzyme yield was enhanced 79% compared to basal medium. The production of protease by KE20 was inreased 16.5 fold compared to the parental strain. The mutant strain produced may have a prominent potential for protease production on an industrial scale.
Benzer Tezler
- Evolutionary engineering of phenylethanol-resistant saccharomyces cerevisiae
Evrimsel mühendislik yöntemi ile feniletanole dirençli saccharomyces cerevisiae suşlarının eldesi
CAN HOLYAVKİN
Yüksek Lisans
İngilizce
2013
Biyolojiİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ZEYNEP PETEK ÇAKAR
- Environmental stresses applied to microalgae for high lipid production
Yüksek lipit üretimi için mikroyosunlara uygulanan çevresel stresler
ECE POLAT
Doktora
İngilizce
2023
Biyokimyaİstanbul Teknik ÜniversitesiÇevre Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DOÇ. MAHMUT ALTINBAŞ
- Proteazın üretimini arttırmak için kimyasal mutagenez (Etidyum bromid, EtBr) ve fiziksel mutagenez (UV) yoluyla bacillus subtilis E6-5'den mutant suş geliştirilmesi ve üretim ortamının optimizasyonu
Mutant strain improvement from bacillus subtilis E6-5 by physi̇cal mutagenesis (ultraviyole, UV) and chemical mutagenesis (Ethidium bromide, EtBr) for enhanced production of protease and optimization of growth medium
BÜŞRA ÖZALPAR
Yüksek Lisans
Türkçe
2018
BiyolojiBursa Uludağ ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ELİF DEMİRKAN
- Evolutionary engineering of freeze-thaw stress-resistant yeasts without using chemical mutagenesis
Donma-erime stresine dirençli mayaların kimyasal mutajen kullanılmadan evrimsel mühendislik ile elde edilmesi
İREM BALABAN
Yüksek Lisans
İngilizce
2023
Biyoteknolojiİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ZEYNEP PETEK ÇAKAR
- Genomic analysis of freeze-thaw stress-resistant Saccharomyces cerevisiae
Donma-erime stresine dirençli Saccharomyces cerevisiae'nin genomik analizi
ÇAĞLA GÜNEY
Yüksek Lisans
İngilizce
2024
Biyolojiİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ZEYNEP PETEK ÇAKAR