Bazı mikroorganizmaların ürettiği lipaz enziminin optimizasyon ve karakterizasyonu
Optimization and characterization of the lipase enzyme produced by some microorganisms
- Tez No: 547225
- Danışmanlar: PROF. DR. ŞAHLAN ÖZTÜRK
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2019
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Nevşehir Hacı Bektaş Veli Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 109
Özet
Bu çalışmada ekstrem çevre şartlarından alınan yağ ile kontamine olmuş toprak ve kaynak sularından izole edilen 24 tribütrin agar pozitif izolatın lipolitik aktivitesi pNPP lipaz testi ile incelenmiştir. Lipaz aktivitesinin yüksek olduğu izolatlar Aeromonas veronii olarak tanımlanmıştır. En yüksek enzim aktivitesine sahip EK-2 (26 U/ml) izolatı optimizasyon ve karakterizasyon çalışmalarında kullanılmıştır. EK-2 izolatından lipaz üretimi için en iyi koşulları belirlemek üzere, farklı fermentasyon parametreleri optimize edilmiş ve optimum inkübasyon süresi ve sıcaklığı 18 saat ve 30 °C, optimum besiyeri pH'sı 7, en uygun yağ oranı ve kaynağı % 1 hindistancevizi yağı, en uygun inorganik ve organik azot kaynakları sırasıyla amonyum sülfat ve jelatin olarak belirlenmiştir. Optimize edilmiş fermentasyon koşullarında, hücre dışı lipaz üretilmiş ve diyaliz ve ultrafiltrasyon ile kısmen saflaştırılmıştır. Kısmi olarak saflaştırılan enziminin ultrafiltrasyon aşamasında toplam ve spesifik aktivitesinin (39,47 U/ml) diğer saflaştırma adımlarından daha yüksek olduğu tespit edilmiştir. Kısmi saflaştırılmış lipaz karakterize edilmiş ve optimum çalışma sıcaklığı 40 °C (45,05 U/ml), tampon pH'sı pH 8.0 (45,17 U/ml), tampon konsantrasyonu 50 mM (56,35 U/ml) ve substrat konsantrasyonu 27 mg/ml (48,6 U/ml) olarak belirlenmiştir. Ayrıca, EK-2 izolatının lipid içeriği, sülfo-fosfo vanilin testi ile 26,08 μg/ml olarak belirlenmiştir. Bu çalışma, fermantasyon koşullarının optimizasyonunun ve enzim karakterizasyonu çalışmalarının EK-2 lipaz aktivitesinde önemli bir artışa yol açtığını göstermiştir. Bu sonuçlara göre, ileriki çalışmalarda yüksek enzimatik aktiviteye sahip EK-2 lipazının biyodizel üretimi gibi biyoteknolojik uygulamalarda kullanılması mümkündür.
Özet (Çeviri)
In this study lipolitic activity of 24 tributyrin agar positive strains isolated from extreme environmental sources such as oil contaminated soil and spring water were examined with pNPP lipase assay. Isolates having higher lipase activity were identified as Aeromonas veronii. In the subsequent optimization and characterization studies, EK-2 (26 U/ml) strain possessing higher enzyme activity was used. To determine the best conditions for EK-2 lipase production, different fermentation conditions were performed and optimum incubation time and temperature were determined as 18 hours and 30 °C, optimum media pH as 7, optimum fat content and source was determined as 1% coconut oil, inorganic and organic nitrogen source were determined as ammonium sulfate and gelatin with respectively. At the optimized fermentation conditions, extracellular lipase was produced and partially purified by dialysis and ultrafiltration. It was determined that the total and specific activity of purified enzyme (39,47 U/ml) in the ultrafiltration step was higher than the other purification steps. The partially purified lipase was characterized and the optimum working temperature, buffer pH and concentration, substrate concentration was determined as 40 °C (45,05 U/ml), pH 8.0 (45,17 U/ml), 50 mM (56,35 U/ml) and 27 mg/ml (48,6 U/ml) with respectively. This study revealed that the optimization of fermentation conditions and enzyme characterization studies led to a significant increase in activity of EK-2 lipase. In addition, the lipid content of the EK-2 strain was determined as 26,08 μg/ml by sulfo-phospho vanillin assay. According to these results, it is possible to use EK-2 lipase with high enzymatic activity in biotechnological applications such as biodiesel production in advanced studies.
Benzer Tezler
- Petrol rezervuarlarında mikrofungusların varlığının araştırılması
The investigation of the presence of microfungi in petroleum reservoirs
SEDAT BERKE SÜMER
Yüksek Lisans
Türkçe
2020
Mikrobiyolojiİstanbul ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. DUYGU KADAİFÇİLER
- Ayvalık tuzlası (Balıkesir)'ndan halofilik bakterilerin izolasyonu ve biyoteknolojik enzim potansiyellerinin araştırılması
Isolation of halophilic bacteria from Balıkesir/Ayvalık saltern and determination theirs biotechnological enzyme potential
MEVLÜT MERT YILMAZ
Yüksek Lisans
Türkçe
2019
BiyolojiManisa Celal Bayar ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MUSTAFA OSKAY
- Tahıl bitkilerinden izole edilmiş olan endofit bakterilerde biyoteknolojik öneme sahip bazı enzimlerin belirlenmesi
Determination of some biotechnologically important enzymes in endophytic bacteria isolated from cereal plants
GÖKHAN DOĞAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2020
ZiraatVan Yüzüncü Yıl ÜniversitesiTarımsal Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ BİLGİN TAŞKIN
- Kefire özgü mikroorganizmaların ürettiği vitamin K ve diğer yağda çözünen vitamin miktarlarının belirlenmesi
Determination of vitamin K and other fat-solublvitamin e levels produced by some microorganisms in kefir
AYKUT KAYMAZ
Yüksek Lisans
Türkçe
2024
Bilim ve TeknolojiSüleyman Demirel ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. TUĞBA KÖK TAŞ
- ZnS, CdS ve PbS kuantum noktaların biyosentezi, karakterizasyonu ve genotoksik özelliklerinin incelenmesi
Investigation of genotoxic properties and characterization, biosynthesis of ZnS, CdS and PbS quantum dots
NECİP ÖCAL