Rekombinant DNA teknolojisi ile antijen üretimi ve saflaştırılması
Antigen production and purification with recombinant DNA technology
- Tez No: 552617
- Danışmanlar: DOÇ. DR. ASUMAN DEMİROĞLU ZERGEROĞLU, DR. DİĞDEM AKTOPRAKLIGİL AKSU
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Mikrobiyoloji, Biyoloji, Biyoteknoloji, Microbiology, Biology, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2019
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Gebze Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Bacillus anthracis, oluşturduğu sporların kutanöz, inhalasyon veya gastrointestinal yolla canlı organizmanın vücuduna girmesi ile şarbon hastalığına neden olan patojenik bir bakteridir. Daha çok herbivorları (otçul canlıları) infekte eden, ancak insanlara ve diğer memelilere de bulaşarak zoonotik etki ile infeksiyona sebep olduğu bilinmektedir. Temel virülans faktörü olan koruyucu antijen (PA: Protective antigen), ödem faktörü (EF: Edema factor) ve letal faktör (LF: Lethal factor) bakteriyel ajan tarafından salgılanarak toksin oluşumuna neden olur. Koruyucu antijen ile ödem faktörünün bir araya gelmesiyle ödem toksini (ÖT veya ET) oluşurken; koruyucu antijen ile letal (ölümcül) faktörün bir araya gelmesiyle de letal toksin (LT) oluşur. Türkiye'de şarbon hastalığı endemik olarak görülmekte olup, B. anthracis sporlarıyla kontamine olmuş hayvanların veya hayvansal ürünlerin yeterli önlemler alınmadan tüketilmesi veya kullanılması sonucu insanlara bulaşması sıklıkla karşılaşılan bir durumdur. Herbivorları (otçul) korumak için çeşitli aşılar geliştirilmiştir. Hayvanlarda şarbon hastalığını önlemek için geliştirilen AVA aşısı ve varyantlarının çeşitli yan etkiler oluşturmasından dolayı rekombinant olarak aşı üretilmesine yönelinmiştir. Bu tez çalışmasında koruyucu antijenin şarbona karşı oluşturulan aşıların ana bileşeni olmasından dolayı, PA proteinini kodlayan pagA geninin pET-42a(+) ve pQE-30 vektörlerine klonlanması ile bu proteininin rekombinant olarak üretilmesi amaçlanmıştır. Klonlama sonrası plazmit çoğaltımı E. coli DH5α kompetent hücrelerinde ve protein ekspresyonu çalışmaları E.coli Rosetta 2(DE3)pLysS ve E.coli XLI-Blue ekspresyon konak hücrelerinde gerçekleştirilmiştir. Eksprese edilen protein örnekleri SDS-PAGE ile ayrıştırılmış ve His-tag taşıyan rekombinant PA proteini Western blot analizi ile belirlenmeye çalışılmıştır. Rekombinant PA proteinini içerdiği düşünülen pozitif sonuç veren örnekler, His-tag pürifikasyon kolonundan geçirilerek Western blot analizi ile kontrol edilmiştir.
Özet (Çeviri)
Bacillus anthracis is a pathogenic bacterium that causes the formation of anthrax when the spores formed by it enter the body of the living organism through cutaneous, inhalation or gastrointestinal tracts. It causes disease by infecting herbivores; but it is also known to infect humans and other mammals. The main virulance factors are protective antigen, edema factor and lethal factor, which are secreted by bacterial zoonosis and cause toxin. PA combines with LF and EF, it results in the formation of lethal toxin and edema toxin. Anthrax is an endemic disease for Turkey. It is common for animals or animal products contaminated with B. anthracis spores to be transmitted to humans as a result of consuming or using these products without adequate measures. Various vaccines have been developed to protect herbivores. Since AVA vaccine and its variants developed to prevent anthrax disease in animals cause various side effects, it has been directed to produce vaccine recombinantly. In this thesis, because the protective antigen is the main component of vaccines against anthrax, it was aimed to recombinantly produce this protein by cloning the pagA gene into pET-42a(+) and pQE-30 vectors. Plasmid amplification after cloning was performed in E. coli DH5α competent cells and protein expression studies were performed in E.coli Rosetta 2 (DE3) pLysS and E.coli XLI-Blue expression host cells. Expressed protein samples were separated by SDS-PAGE and His-tag-bearing recombinant PA protein was determined by Western blot analysis. Samples with positive results thought to contain recombinant PA protein were checked by Western blot analysis by passing through His-tag purification column.
Benzer Tezler
- Rekombinant DNA teknolojisi ile LF antijeni üretimi ve saflaştırılması
LF antigen production and purification with recombinant DNA technology
MUSTAFA EMREM
Yüksek Lisans
Türkçe
2020
Gebze Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyokimya ve Genetik Ana Bilim Dalı
Yükleniyor...
- Rekombinant dna teknolojisi ile ef antijeni üretimi ve saflaştırılması
Production and purification of ef antigen with recombinant dna technology
MELİKE OYUNCAKÇI
Yüksek Lisans
Türkçe
2020
Gebze Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
Yükleniyor...
- Detecting binding activity of a therapeutic monoclonal antibody targeting vascular endothelial growth factor using surface plasmon resonance
Vasküler endotelyal büyüme faktörünü hedeleyenterapötik monoklonal antikorun bağlanma aktivitesinin yüzey plazmon rezonans ile belirlenmesi
SERİM ERDEM
Yüksek Lisans
İngilizce
2024
İstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı (disiplinlerarası)
Yükleniyor...
- Recombinant antigen and monoclonal antibody production for katanin P60
Katanin P60 için rekombinant antijen ve monoklonal antikor üretimi
DERYA CANBAZ
Yüksek Lisans
İngilizce
2009
İstanbul Teknik Üniversitesiİleri Teknolojiler Ana Bilim Dalı
Yükleniyor...
- Rekombinant DNA teknolojisi ile rekombinant bir antijene karşı antikor üretimi
Production of antibody against a recombinant antigen by using recombinant DNA techniques
IŞIN NERGİZ GEREN