Mycobacterium bovis antijenlerinin escherichia coli'de rekombinant DNA teknolojisi ile üretimi ve alt birim aşı geliştirilmesi
Production of Mycobacterium bovis Antigens in Escherichia coli by Recombinant DNA technology and Subunit Vaccine Development
- Tez No: 680183
- Danışmanlar: PROF. DR. AYŞE FİLİZ ÖNER, DOÇ. DR. SEZER OKAY
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyoteknoloji, Eczacılık ve Farmakoloji, Biotechnology, Pharmacy and Pharmacology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2021
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Farmasötik Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 154
Özet
Tüberküloz, uzun yıllardan beri hala önlenememiş en yaygın bulaşıcı hastalıklardan birisidir. Hastalığın yayılmasının önlenmesi amacıyla insanlarda kullanımı onaylanmış tek aşı BCG aşısıdır. Ancak BCG aşısının koruyuculuğunun kişiler arasında değişkenlik göstermesi, enfeksiyonu önleyememesi gibi sorunları çözmek üzere arayışlar devam etmektedir. Bu bağlamda bu tez çalışmasında M. tuberculosis ve M. bovis'in virülansında önemli rol oynayan AhpC ve LprG proteinlerinin hem kendi başlarına hem de BCG ile prime aşılamanın ardından booster aşı antijeni olarak uygulanmaları ile hümoral ve hücresel bağışıklık yanıt üzerindeki etkilerinin değerlendirilmesi amaçlanmıştır. Bu amaçla AhpC proteinini kodlayan ahpC ve LprG proteinlerini kodlayan lprG geni M. bovis genomundan polimeraz zincir reaksiyonu ile çoğaltılmış, bakteriyel ifadeleme vektörüne klonlanmış ve E.coli'de rekombinant olarak üretilmiştir. Rekombinant proteinler afinite kromatografisi ile saflaştırılmış, elektroforez ve immünoblotlama yöntemleriyle karakterize edilmiştir. Ardından, rekombinant AhpC ve LprG proteinlerinin yağ bazlı emülsiyon yapıda bir adjuvan olan Montanide ISA 61VG ile formülasyonları hazırlanmıştır. Aşılar farelere uygulandıktan sonra gelişen hümoral ve hücresel bağışıklık yanıtları ELISA yöntemine dayanan deneylerle araştırılmıştır. Fare serumlarında IgG ölçümüne dayanan hümoral yanıt ve IL-12 ölçümüne dayanan hücresel yanıt değerlendirmeleri her iki proteinin de aşı antijeni olarak etkili olduğunu göstermiştir. AhpC aşısının iyi bir booster aşı adayı olabileceği, LprG aşısının ise tek başına daha etkili olabileceği sonucuna varılmıştır.
Özet (Çeviri)
Tuberculosis is one of the most common infectious diseases that has not been prevented for many years. BCG vaccine is the only vaccine approved for use in humans to prevent spread of the disease. However, the searches continue to solve problems such as protection of BCG vaccine variations between individuals, and inability to prevent infection. In this context, evaluatation of the effects of AhpC and LprG proteins playing an important role in the virulence of M. tuberculosis and M. bovis, on the humoral and cellular immune responses, alone or as a booster vaccine antigen after BCG prime vaccination was aimed in this thesis study. In order to achieve this goal, the ahpC and the lprG genes encoding the AhpC and the LprG proteins, respectively were amplified from the M. bovis genome by polymerase chain reaction, cloned into the bacterial expression vector, and recombinantly produced in E.coli. The recombinant proteins were purified by affinity chromatography and characterized by electrophoresis and immunoblotting methods. Subsequently, recombinant AhpC and LprG proteins were formulated with Montanide ISA 61VG, an oil-based emulsion adjuvant. The humoral and cellular immune responses were investigated by using ELISA method. Evaluation of humoral response based on IgG measurement and cellular response based on IL-12 measurement in mice sera showed that both proteins are effective as vaccine antigens. It was concluded that AhpC vaccine can be a good booster vaccine candidate, and LprG vaccine may be more effective when administered alone.
Benzer Tezler
- Mycobacterium Bovis ve Mycobacterium Vaccae'nin, ovalbumin ile sensitize edilen BALB/c farelerde serum total IgE düzeyine tekisi
The Effect of mycobacterium bovis and mycobacterium vaccae on the serum IgE level in OA-sensitized BALB/c mice
FARUK TÜKENMEZ
Doktora
Türkçe
1998
Çocuk Sağlığı ve HastalıklarıMarmara ÜniversitesiÇocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MUJDAT BAŞARAN
- İnflamatuvar eklem hastalıklarında mycobacterium tuberculosis ve mycobacterium bovisin rolü
The role of mycobacterium tuberculosis and mycobacterium bovis in inflammatory joint diseases
EMEL SESLİ ÇETİN
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2003
MikrobiyolojiAnkara ÜniversitesiMikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ.DR. A. MURAT AKSOY
- Pulmoner tüberküloz tanısında Dot Immunobinding Assay ve ELISA yöntemleriyle antijen aramanın yeri
Detection of myobacterial antigens by Dot Immunobinding Assay and ELISA in pulmonary tuberculosis
TEKİN KARSLIGİL
- Comparison between multiplex PCR of the regions of difference (RD) and spoligotyping for identification of Mycobacterium bovis and Mycobacterium bovis BCG strains
Mycobacterium bovis'in ve Mycobacterium bovis BCG suşlarının tanımlanması için RD bölgelerinin multiplex PCR'ı ve spoligotyping karşılaştırması
MAHMOUD KHALEEL MOHAMMAD SHOMAN
Yüksek Lisans
İngilizce
2019
BiyomühendislikÇukurova ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. FATİH KÖKSAL
- Mycobacterium bovis izolatlarının MIRU - VNTR ve spoligotyping ile surveyansı
The surveillance of mycobacterium bovis isolates with MIRU - VNTR and spoligotyping
NEVİN TUZCU
Doktora
Türkçe
2013
MikrobiyolojiÇukurova ÜniversitesiMikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. FATİH KÖKSAL