Rekombinant DNA teknolojisi ile rekombinant bir antijene karşı antikor üretimi
Production of antibody against a recombinant antigen by using recombinant DNA techniques
- Tez No: 91478
- Danışmanlar: PROF. DR. BEYAZIT ÇIRAKOĞLU
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Tıbbi Biyoloji, Medical Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 1999
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Marmara Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Tıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 123
Özet
IX ÖZET Son yıllarda klasik hibridoma teknolojisi ile hücrelerin ölümsüzleştirilmesinin yerini, rekombinant DNA teknolojisi ile faj gösterim tekniklerinin birleştirilerek uygulanması ile genlerin ölümsüzleştirilmesi almaya başlamıştır. Monoklonal antikorlar in vitro tanı testlerinde, 1980'lerden beri basan ile kullanılmaktadır. Antikorların tedavi ve in vivo tanı testlerinde kullanımı 1990' dan sonra giderek artmıştır ve tedavi molekülleri olarak da değerlendirilmeye başlanmışdır. Monoklonal antikor üretiminde kullanılan B hücre ölümsüzleştirme tekniğindeki pek çok zorluk faj gösterim ile çözülmüştür. 1990'lann başına kadar monoklonal antikorlar Köhler ve Milstein tarafından tanımlanan hibridoma teknolojisi ile elde edilmekte idi. İmmün sistemin antijene özgül antikorları üreten B hücrelerinin sayısını artırmaya yönelik uyarımı, hücre fîizyonu ile bu antikor üreten hücrelerin immortalizasyonu ve geniş bir tarama ile istenen özelliklerde antikor üreten sabit hücre hatlarının tanımlanması ile özetlenebilen teknik 20 yıldan fazla zamandır kullanılmaktadır. 1990'lann başından bu yana kaydedilen son gelişmelerle; bakteride fonksiyonel antikor parçalannın üretilmeye başlanması, polimeraz zincir reaksiyonu (PZR) (58) kullanılarak antikor genlerinin izolasyonu ve çoğaltılması, faj gösterimle güçlü tarama sistemlerinin birleştirilmesi (53), hibridoma tekniğindeki karşılaşılan pekçok zorluğu aşmakta hatta immünizasyon ve hayvan kullanımı tamamen işlem dışı bırakılmaktadır. Bu tez çalışması rekombinant DNA teknolojisi ve faj gösterim tekniği uygulanarak yapısal olmayan bir protein antijen olarak kullanılarak rekombinant proteine ait scFv eldesi üzerine yapılan bir çalışmadır. Model protein olarak kullanılan Tütün Mozaik Virüs'ünün fonksiyonel proteini olan RNA'ya bağlı RNA polimerazın (replikaz) antijenik bölgesi, bakteride fuzyon protein olarak eksprese edilmiş ve fîizyon protein antijen olarak hazırlanmıştır. TMV'nin bitki hücresini enfekte ettiğinde ilk sentezlenen proteini olan replikaz membran yapıda bulunan saflaştınlması zor bir proteindir. Fuzyon protein olarak hazırlanan replikaz farelere immunize edilmiş ve fare dalaklanndan antikorlann değişken bölge genleri çoğaltılmıştır. scFv şeklinde bir araya getirilen antikor V bölge genleri pCANTAB 5E fajmit vektöre klonlanmıştır. scFv-faj kütüphanesi fuzyon protein ile elenerek anti-replikaz-P-gal.-scFv kütüphanesi elde edilmiştir. Bu tez çalışması TMV replikazına karşı ilk rekombinant antikor çalışmasıdır.
Özet (Çeviri)
ABSTRACT Hybridoma technology is uesd for the immortalization of antibody producing cells, but in recent years by using recombinant DNA and phage display antibody genes are immotalized. Monoclonal antibodies have been used succesfMy in vitro diagnostic tests since 1980. In vivo therapeutic and diagnostic use of antibodies have been increasing since 1990. The technical problems seen in B cell immortalization in monoclonal antibody production has not been observed in phage display. Monoclonal antibodies have been obtained by the methods described by Köhler and Milstein till 1990's. Stimulation of immune system to increase antigen specific B cell number immortalization of antibody producing cells by cell fusion, and with wide screening system to detect stable cell lines producing antibodies with desired properties. Hybridoma technology have been used for 20 years succesfully. The improvements from the begining of 1990; production of antibody fragments in bacteria, isolation and amplification of antibody varibale region by using polimerase chain reaction (PCR) (58), combination of phage display (53) and powerful screaning systems, the difficulties in hybridoma technology have been bypassed even without immunization and use of animal. In this thesis, recombinant DNA technology and phage display techniques have been used for obtaining scFv against a recombinant nonstructural protein. Tobacco Mosaic virus nonstructural protein, RNA dependent RNA polymerase (replicase) antigenic site was used as a model protein and expressed in bacteria and used as an antigen. Replicase is a membraneus protein and it is difficult to purify. Replicase is the first protein expressed by TMV after infection of plant cell. Mouse were immunized with prepared replicase fusion protein and V genes were amplified. V genes were assembled as scFv and cloned on pCANTAB 5E phagemid vector. ScFv-phage library selected with fusion protein and an anti-replicase-P-gal.-scFv library has been obtained. This thesis is the first scFv study against TMV replicase.
Benzer Tezler
- Anti-HER2 scFV antikor fragmanının Escherichia coli bakterisinde üretim bölgesinin optimizasyonu
Optimization of anti-HER2 scFV antibody fragment production region in Escherichia coli
SELEN CİLASUN
Yüksek Lisans
Türkçe
2022
BiyomühendislikHacettepe ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. EDA ÇELİK AKDUR
- Detecting binding activity of a therapeutic monoclonal antibody targeting vascular endothelial growth factor using surface plasmon resonance
Vasküler endotelyal büyüme faktörünü hedeleyenterapötik monoklonal antikorun bağlanma aktivitesinin yüzey plazmon rezonans ile belirlenmesi
SERİM ERDEM
Yüksek Lisans
İngilizce
2024
Biyoteknolojiİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ ABDULHALİM KILIÇ
- İnsan rekombinant nano-antikor yapılarından kanser tanısı ve tedavisine yönelik etken madde geliştirilmesi
Development of an active substance from human recombinant nano-antibody constructs for the diagnosis and treatment of cancers
NURŞAH ERSEZEN
Yüksek Lisans
Türkçe
2020
BiyolojiGebze Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. TAMER YAĞCI
PROF. DR. BERRİN ERDAĞ
- Bruselloza karşı aşı geliştirilmesinde antijen yüklü polimerik nanopartiküllerin immünostimülan etkinliklerinin incelenmesi
Investigation of immunostimulating activities of antigen-loaded polymeric nanoparticles in vaccine development against brucellosis
SEDANUR ÖZTAV
Yüksek Lisans
Türkçe
2023
BiyomühendislikYıldız Teknik ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. EMRAH ŞEFİK ABAMOR
DOÇ. DR. TÜLİN ÖZBEK
- Design of inorganic peptide bonded fusion biomolecules for tracking disease related proteins
Hastalıkla ilişkili proteinlerin izlenmesinde anorganik peptit bağlarla füzyon biyomoleküllerin tasarımı
BERTAN KORAY BALCIOĞLU
Doktora
İngilizce
2014
Biyomühendislikİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. CANDAN TAMERLER
DOÇ. DR. BERRİN ERDAĞ