Evaluation of T cell responses in the co-cultures established with neutrophils, monocytes and lung adenocarcinoma cells
T lenfosit yanıtlarının nötrofil, monosit ve akciğer adenokarsinom hücrelerini içeren ko-kültürlerde analizi
- Tez No: 555203
- Danışmanlar: PROF. DR. GÜNEŞ ESENDAĞLI
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2019
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Temel Onkoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 154
Özet
CD4+ ve CD8+ T hücreleri, anti-tümör immün yanıtlarında kritik aracılardır. Nötrofillerle beraber, küçük hücreli dışı akciğer kanserinin (KHDAK) tümör mikroçevresinde fazla miktarlarda bulundukları gösterilmiştir. Ayrıca, bir dizi çalışma, akciğer kanserinde nötrofil/lenfosit oranının prognostik önemini göstermiştir. Bununla birlikte, nötrofillerin immün düzenleyici rolü henüz tam olarak açıklanamamıştır. Bu nedenle, bu çalışma, nötrofiller, monositler ve akciğer adenokarsinom hücrelerinin varlığında T hücre yanıtlarını değerlendirmeyi amaçlamaktadır. Periferik kan nötrofilleri, CD14+ monositler ve CD8+ ve CD4+ T hücreleri sağlıklı bireylerden toplanan kanlardan izole edilmiştir. Ko-kültürleri optimize etmek için, bu hücre tiplerinin farklı kombinasyonları ile ve çeşitli uyaranlar varlığında ko-kültürler oluşturulmuştur. Nötrofiller IFN-γ, G-CSF, NAC ve fMLP ile uyarılmıştır. Farklı oranlarda, önceden uyarılmış veya yeni izole edilmiş nötrofiller, KHDAK hücre hatları (A549, NCI-H1299 veya NCI-H441 ve/veya monositler) ile birlikte ko-kültür edilmiştir. T hücreleri üzerindeki antijenden bağımsız etkileri test etmek için çözünür anti-human CD3 monoklonal antikoru eklenmiştir. İmmün hücrelerin proliferasyonu, canlılığı, aktivasyonu, ROS üretim kapasitesi, sitokin üretimi, ve kostimülatör gen ekspresyonu belirli hücre tiplerinde test edilmiştir. TIM-3mod/high alt popülasyonun yorulmuş olup olmadığını anlamak için, TIM-3 ekspresyonuna göre, CD8+ T hücreleri ko-kültürlerden toplanarak yeniden uyarılmıştır. G-CSF ve NAC ile uyarılan nötrofillerde, ROS üretimi düşerek canlılık süresi artmıştır ve bu nötrofillerin T hücre proliferasyonunu da desteklediği görülmüştür. Kanser hücrelerinin ve monositlerin varlığı, nötrofillerin yaşam sürelerini uzatmış, üzerlerindeki CD62L ekspresyonunu düşürmüş ve ROS üretim kapasitelilerini azaltmıştır. Monositlerin, nötrofillerin ve akciğer kanseri hücrelerinin varlığı, CD8+ T hücre çoğalmasını ve üzerlerindeki inhibitör reseptörlerinin ekspresyonunu arttırmıştır. T hücre proliferasyonunun ana destekçileri olarak monositlerden yoksun olan belirli koşullar altında, akciğer kanseri hücreleri ile birlikte nötrofillerin varlığında CD8+ T hücre proliferasyonu ve aktivasyonu engellenmemiştir. KHDAK ko-kültürlerinden toplanan TIM-3mod/high CD8+ T hücreleri yüksek proliferasyon ve IFN-γ üretimi kapasitesine sahip olup yorulmamış hücre oldukları gösterilmiştir. NAC eklenen ko-kültürlerde CD8+ T hücre proliferasyonu veya TIM-3/LAG3 ekspresyonu değişmemiştir. Akciğer kanseri hücreleri, monositler ve CD8+ T hücreler ile birlikte kültürlenen nötrofillerde 4-1BBL, OX40L ve B7-2 kostimülatör genlerinin ekspresyonu artmıştır. Nötrofiller, monositler, CD8+ T hücreleri ve akciğer kanseri hücrelerini kullanarak tümör mikroçevresini kısmen modellemek için kurulan bir ko-kültür düzeninde, bulgularımız nötrofillerin CD8+ T hücre yanıtları için kritik bir modülatör olarak önemini göstermektedir.
Özet (Çeviri)
CD4+ and CD8+ T cells are critical mediators in anti-tumor immunity. Together with neutrophils, they have been shown to dominate the immune landscape of the non-small cell lung cancer (NSCLC). A number of studies have estimated the prognostic significance of neutrophil-to-lymphocyte ratio in NSCLC. However, immune regulatory role of neutrophils has not yet been fully elucidated. Hence, this study aims to evaluate T cell responses in the presence of neutrophils, monocytes and lung adenocarcinoma cell lines, in vitro. Peripheral blood neutrophils, CD14+ monocytes, and CD8+ or CD4+ T cells were purified from the healthy volunteers. In order to optimize the co-cultures, different combinations of these cell types were employed under various stimuli. Neutrophils were stimulated with different combinations of IFN-γ, G-CSF, N-acetylcysteine (NAC), and N-Formylmethionine-leucyl-phenylalanine (fMLP). At different ratios, pre-stimulated or freshly isolated neutrophils were co-cultured with NSCLC cell lines media (A549, NCI-H1299, or NCI-H441) or their conditioned with or without monocytes. Soluble anti-human CD3 mAb was added in order to test the antigen-independent influences on T cells. Proliferation, viability, activation, ROS production capacity, cytokine secretion, and expression of co-stimulatory molecules were tested on specific cell types. Based on TIM-3 expression, CD8+ T cells were recovered from the co-cultures and re-stimulated to test whether the TIM-3mod/high subpopulation is exhausted. G-CSF and NAC stimulation promoted the PMN longevity, diminished the ROS production, and enhanced the stimulatory capacity of PMNs on T cell proliferation. The presence of lung cancer cells and monocytes prolonged the survival of neutrophils. In co-cultures, neutrophils swiftly acquired an activated state with decreased CD62L. Besides, ROS production by neutrophils was decreased in the co-cultures. The presence of monocytes, neutrophils, and lung cancer cells enhanced CD8+ T proliferation and the expression of inhibitory receptors. Under certain conditions lacking monocytes as major supporters of T-cell proliferation, the presence of neutrophils together with lung adenocarcinoma cells, barely supported CD8+ T cell responses. TIM-3mod/high CD8+ T cells recovered from NSCLC co-cultures were not exhausted and displayed high proliferation and IFN-γ secretion. NAC stimulation did not modulate the CD8+ T cell proliferation or TIM-3/LAG3 expression in co-cultures. Expression of 4-1BBL, OX40L and B7-2 costimulatory genes were increased in the PMNs co-cultured with lung cancer cells, monocytes and CD8+ T cells. Consequently, in a co-culture setup employing neutrophils, monocytes, CD8+ T cells and lung cancer cells, which was established to partially model the tumor microenvironment, our findings indicate the importance of neutrophils as a critical modulator for CD8+ T cell responses.
Benzer Tezler
- İmmünoinformatik yaklaşımlarla Kırım-Kongo Kanamalı Ateşi'ne (KKKA)karşı aşı tasarımı ve etkinliğinin sorgulanması
Evaluation vaccine design and efficacy against Crimean-Congo Hemorrhagic Fever (CCHF) with immunoinformatic approaches
SÜMEYYE ALTUNOK
Doktora
Türkçe
2024
BiyoteknolojiAnkara ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. AYKUT ÖZKUL
DR. ÖĞR. ÜYESİ MUTLU ERDOĞAN
- Süspanse ortamda şap virüsü üretimi için optimum koşulların belirlenmesi
Determination of optimum conditions for the suspension culture of foot and mouth disease virus (FMDV) production
GENCAY ERGİN
Doktora
Türkçe
2016
BiyomühendislikHacettepe ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MENEMŞE GÜMÜŞDERELİOĞLU
- Farklı şekilli nanopartiküllerin geliştirilmesi, immünoterapötik ve kemoterapötik madde yüklü optimum şekilli nanopartiküllerin küçük hücreli dışı akciğer kanseri üzerine antikanser etkinliğinin değerlendirilmesi
Development of different shaped nanoparticles, evaluation of anticancer activity of optimum shaped nanoparticles loaded with immunotherapeutic and chemotherapeutic agents on non-small cell lung cancer
MERYEM KAPLAN
Doktora
Türkçe
2024
Eczacılık ve FarmakolojiHacettepe ÜniversitesiFarmasötik Teknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SEMA ÇALIŞ
- İnterlökin-2 içeren ilaç taşıyıcı sistemlerin inhalasyon formülasyonlarına yönelik çalışmalar
Studies on inhalation formulations of interleukin-2 containing drug delivery systems
BURCU DEVRİM
Doktora
Türkçe
2009
Eczacılık ve FarmakolojiAnkara ÜniversitesiFarmasötik Teknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ASUMAN BOZKIR
PROF. DR. KANDEMİR CANEFE
- Identification of expression levels of transcripts in tumors and tumor microenvironment and investigation of their relationship to clinical characteristics in diagnostic mantle cell lymphoma cases
Tanısal mantle hücreli lenfoma olgularında tümör ve tümör mikroçevresindeki transkript ifadelerinin tüm transkriptom analizleri aracılığıyla belirlenmesi ve klinik karakteristiklerle ilişkilerinin araştırılması
ESRA ESMERAY SÖNMEZ
Doktora
İngilizce
2024
BiyolojiDokuz Eylül ÜniversitesiGenom Bilimleri ve Moleküler Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. CAN KÜÇÜK