Aspergillus fumigatus katalazının üretimi, saflaştırılması ve karakterizasyonu
Production, purification and characterization of catalase from Aspergillus fumigatus
- Tez No: 598708
- Danışmanlar: DR. ÖĞR. ÜYESİ YONCA YÜZÜGÜLLÜ KARAKUŞ
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Mikrobiyoloji, Biology, Microbiology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2019
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Kocaeli Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 67
Özet
Bu çalışmada Aspergillus fumigatus'dan katalaz enziminin optimum üretimi, kromatografik yöntemle saflaştırılması ve enzimin biyokimyasal özelliklerinin belirlenmesi hedeflendi. Bu hedef doğrultusunda 37°C ve 155 rpm çalkalama hızında %1 (a/h) glukoz ve 0,5 mM H2O2 içerecek şekilde hazırlanan 1 litrelik YpSs besi ortamında büyütülen A. fumigatus'dan 7. günde ham enzim ekstraktı elde edildi. Daha sonra enzim tek basamakta küf özütünden %42 geri kazanımla 4 kat kısmi olarak başarıyla saflaştırıldı. SDS-PAGE analizi ile molekül ağırlığı ~70 kDa olarak hesaplandı. Enzimin optimum reaksiyon sıcaklığı 60°C, pH'sı ise 7,0 olarak belirlendi. Km ve Vmax değerleri sırasıyla 7,4 mM ve 1250 μmol-1 dak L olarak ölçüldü. Kararlılık testleri enzimin geniş bir pH (4,0-9,0) ve sıcaklık (30°C-50°C) aralığında aktif olarak kalabildiğini gösterdi. Ayrıca bazı organik çözücüleri, konsantrasyona ve inkübasyon süresine bağlı olarak tolere edebildiği bulundu. Son olarak, peroksit yokluğunda 4-metil katekol ve pyrokatekol gibi fenolik bileşikleri okside edebildiği keşfedildi. Özetle, A. fumigatus'dan katalaz enzimi iyon değiştirme kromatografi yöntemi ile tek basamakta ilk kez bu çalışmada saflaştırıldı. Enzimde belirlenen biyokimyasal özellikler (düşük Km değeri, termostabilite, vb.), katalazın farklı endüstriyel uygulamalar için iyi bir biyokatalizör adayı olacağını göstermektedir.
Özet (Çeviri)
In this study, it was aimed to determine the optimum production of catalase from Aspergillus fumigatus, to purify using chromatography and to determine its biochemical properties. In line with this goal, the crude enzyme extract was obtained from A. fumigatus on 7th day of cultivation of cells grown at 37°C and 155 rpm in 1 liter YpSs medium containing 1% glucose and 0.5 mM H2O2. Then, the enzyme was successfully purified 4-fold with 42% recovery from the crude extract in a single step. The molecular weight was found to be as ~70 kDa by SDS-PAGE. The optimum reaction temperature of the enzyme was established as 60°C and the pH was 7.0. Km and Vmax values were calculated as 7.4 mM and 1250 μmol-1 min L, respectively. Stability tests have shown that the enzyme can remain active in a wide range of pH (4.0-9.0) and temperature (30°C-50°C). It was also observed that some organic solvents could be tolerated depending on the concentration and incubation time. Finally, it was noticed that in the absence of peroxide, it was able to oxidize phenolic compounds such as 4-methyl catechol and pyrocatechol. In summary, the catalase enzyme from A. fumigatus was first purified in a single step by ion exchange chromatography in this study. The biochemical properties of the enzyme (low Km value, thermostability, etc.) indicate that it can function as a good biocatalyst in different industrial applications.
Benzer Tezler
- Klinik materyallerden ve çevreden izole edilen aspergillus fumigatus kökenlerinde olası azol direnci ile ilişkili tr34/l98h ve diğer mutasyonların araştırılması
Investigation of tr34/l98h and other mutations associated with putative azole resistance in aspergillus fumigatus strains isolated from clinical specimens and environment
KÜBRA ERDEM
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2018
MikrobiyolojiMarmara ÜniversitesiTıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. NİLGÜN ÇERİKÇİOĞLU
- Development of a PCR-based specific method for the detedction of aspergillus fumigatus by random CDNA cloning
Raslantısal CDNA klonlamasıyla aspergillus fumigatus için PCR-bazlı özgül bir tanı yönteminin geliştirilmesi
ALPER SÖYLER
Yüksek Lisans
İngilizce
2004
Gıda MühendisliğiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. UFUK BAKIR
- Optimization of mannanase production from recombinant Aspergillus sojae and analysis of Galactomannan hydrolysis
Rekombinant Aspergillus sojae de mannanaz üretiminin optimizasyonu ve Galaktomannan hidroliz analizi
BENGÜ ÖZTÜRK
Yüksek Lisans
İngilizce
2008
BiyokimyaOrta Doğu Teknik ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. UFUK BAKIR
PROF. DR. ZÜMRÜT BEGÜM ÖGEL
- Characterization and functional analysis of a novel multicopper oxidase and associated polyketide biosynthesis gene cluster of Aspergillus fumigatus
Aspergillus fumigatus'un yeni bir poliketit biyosentezi gen kümesinin fonksiyonel analizi ve karakterizasyonu
BANU METİN
Doktora
İngilizce
2007
GenetikOrta Doğu Teknik ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ZÜMRÜT BEGÜM ÖGEL
PROF. DR. UFUK BAKIR
- Expression and analysis of endo beta?1,4-mannanase of Aspergillus fumigatus in heterologous hosts
Aspergillus fumigatus endo beta-1,4-mannanazının heterolog ev sahibi organizmalarda ekspresyonu ve analizi
GÖKHAN DURUKSU
Doktora
İngilizce
2007
BiyoteknolojiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. UFUK BAKIR
PROF. DR. ZÜMRÜT BEGÜM ÖGEL