Characterization of leishmania RNA virus infected Leishmania major exosomes and evaluation of the impact of cytosolic DNA sensing related pathways in L. major infection
Leishmania RNA virus ile enfekte Leishmania major eksozomlarinin karakterizasyonu ve L. major enfeksyonunda sitosolik DNA algıılama ile alakalı yolakların etkisinin değerlendirilmesi
- Tez No: 610407
- Danışmanlar: PROF. DR. MAYDA GÜRSEL
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2020
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Orta Doğu Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 161
Özet
Leishmaniasis, Leishmania parazitinin neden olduğu ihmal edilmiş bir bulaşıcı hastalıktır. Hastalık, etkili tedavi stratejilerinin acil olarak geliştirilmesini gerektiren önemli bir sağlık sorununu temsil eder. Leishmania RNA virüsü (LRV) barındıran Yeni Dünya Leishmania türleri ciddi, metastatik hastalıklara neden olur. Bu tezde, LRV2-1 bulunduran ve bulundurmayan Eski Dünya L. major suşlarını eksozom içeriği ve enfektiviteleri açısından karşılaştırdık. PCR ve kütle spektrometri bazlı analizler, virüs bulaşmış Leishmania eksozomlarının viral RNA genomunun en az % 64'ünü içerdiğini, ancak viral proteinleri içermediğini ortaya koydu. LRV2-1 pozitif ve negatif L. major suşlarının makrofajlarda benzer enfektivitesi olmasına rağmen pozitif suş, farelerde kutanöz leishmaniasis modelinde gecikmiş enfeksiyon sergiledi. Daha sonra Leishmania enfeksiyonunda cGAS-STING DNA algılama yolunun rolünü araştırmayı amaçladık. STING ve TBK-1 nakavt hücre hatlarındaki enfeksiyon oranları, vahşi tip THP-1 hücrelerinden önemli ölçüde daha düşüktü ve bu fark nakavt hücre hatlarının fagositik kapasitelerinin azalmasıyla ilgiliydi. Daha sonra, TBK1 inhibitörü amlexanox'un in vitro ve in vivo enfeksiyon modellerindeki etkisi araştırıldı. İlaç, makrofajlarda parazit fagositozunu azalttı ve parazit enfekte farelerde ayak pedi şişmesini geciktirdi, bu da amlexanox'un kutanöz leishmaniasis tedavisinde aday bir ilaç olabileceğini düşündürdü. Ayrıca ISG15'i THP-1 hücrelerinde LentiCRISPRv2 sistemi kullanarak mutasyona uğrattık ve ISG15'in L. major enfeksiyonunda ve otofajideki rolünü belirlemeye çalıştık. Bulgularımız Leishmania enfeksiyonunun erken evrelerinde ISG15'in parazit için olunlu bir rolü olduğunu ortaya koydu. Ayrıca, otofajinin ISG15 KO hücrelerinde arttığını ve ISG15'in otofajide düzenleyici bir rolü olduğunu ortaya koyduk. Sonuç olarak bulgularımız Leishmania enfeksiyonunda faydalanılacak ve ilaç hedefi olarak kullanılacak yeni alanlar belirlemesi açısından gelecekteki çalışmalara ışık tutmaktadır
Özet (Çeviri)
Leishmaniasis is a neglected infectious disease caused by Leishmania parasite. The disease represents a significant health problem, necessitating urgent development of effective treatment strategies. New World Leishmania species harboring Leishmania RNA virus (LRV) cause severe, metastatic disease. In this thesis, we compared LRV2-1 deficient and proficient Old World L. major strains in terms of their exosomal content and infectivity. PCR and mass spectrometry based analysis revealed that virus infected Leishmania exosomes contained at least 64% of the viral RNA but not the viral proteins. LRV2-1 positive and negative L. major strains had similar infectivity in macrophages, the positive strain exhibited delayed infection in a cutaneous leishmaniasis model in mice. Next, we aimed to investigate the role of cGAS-STING DNA sensing pathway in Leishmania infection. Infection rates in STING and TBK-1 knockout cell lines were significantly lower than wild type THP-1 cells and this difference was related to decreased phagocytic capacities of the knockout lines. Effect of the TBK1 inhibitor amlexanox was investigated in in vitro and in vivo infection models. The drug blocked parasite phagocytosis in macrophages and delayed footpad swelling in parasite infected mice, suggesting that amlexanox could be of interest as a candidate drug in cutaneous leishmaniasis treatment. We also aimed to determine the role of ISG15 in L. major infection and autophagy by mutating the ISG15 using a LentiCRISPRv2 system. Our findings revealed a pro-parasitic role of ISG15 in early stages of Leishmania infection. Furthermore, we found that autophagy was enhanced in ISG15 KO cells, suggesting a regulatory role for ISG15 in autophagy. Collectively, our findings might benefit future work related to Leishmania immunity in defining new targets and developing effective treatment strategies.
Benzer Tezler
- Establishment of intracellular infection and assessment of the developing immune response in cell cultures with different leishmania species obtained from clinical samples in turkey and proteomic characterization of leishmania surface proteins
Türkiye'de klinik örneklerden izole edilen farklı leishmania türleri ile hücre kültüründe hücre içi enfeksiyonların oluşturulması, gelişen immün yanıtın ölçümü ve leishmania yüzey proteinlerinin proteomik karakterizasyonu
NESTEREN MANSUR ÖZEN
Doktora
İngilizce
2022
ParazitolojiAcıbadem Mehmet Ali Aydınlar ÜniversitesiMedikal Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ÖZGÜR KURT
- Leishmania infantum aşı adayı LACK ve KMP-11 genlerinin moleküler karakterizasyonu, füzyon proteinin ekspresyonu ve antijenik yapısı
Molecular characterization of leishmania infantum LACK and KMP-11 vaccine candidate genes, expression and antigenic structure of fusion protein
SERKAN KARACA
Doktora
Türkçe
2018
ParazitolojiErciyes ÜniversitesiTıbbi Parazitoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ALPARSLAN YILDIRIM
- Visseral leishmaniasis etkeni Leishmania infantum parazitlerinin büyük ölçekli üretimi ve immunojen özellikli GP63 molekülünün izolasyonu ve karakterizasyonu
Large scale production of Leishmania infantum which cause Visseral leishmaniasis and isolation and characterization of immunogen GP63 molecule
MEHMET AYDOĞDU
Yüksek Lisans
Türkçe
2017
BiyomühendislikYıldız Teknik ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. MELAHAT BAĞIROVA
- Leıshmanıa ınfantum'un farklı antijen kombinasyonlarını içeren poli(laktik-ko-glikolik asit) nanopartiküllerinin sentezi, karakterizasyonu ve visseral leishmaniasis'e karşı aşı adayı olarak etkinliklerinin in vitro ve in vivo incelenmesi
Synthesis, characterization and in vitro and in vivo investigation of effectiveness as vaccine candidate against visceral leishmaniasis of poly(lactic-co-glycolic acid) nanoparticles containing combination of different antigens of leishmania infantum
ÖZLEM AYŞE TOSYALI
Doktora
Türkçe
2018
BiyomühendislikYıldız Teknik ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ MELAHAT BAGIROVA
- Leıshmanıasıs tedavisinde ekstrasellüler veziküller içeren formülasyonların geliştirilmesi ve etkinliğinin incelenmesi
Development of formulations containing extracellular vesicles and evaluation of efficacy in the treatment of leishmaniasis
GÜLNAZ YILDIRIM KÖKEN
Doktora
Türkçe
2022
BiyolojiYıldız Teknik ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. EMRAH ŞEFİK ABAMOR
PROF. DR. ERDAL KARAÖZ