PC-3 prostat kanser hücre hattında mutant TP53 geninin crıspr-cas9 aracılıklı restorasyonu
Crispr-cas9 directed TP53 gene restoration in human prostate cancer cell line PC-3
- Tez No: 614265
- Danışmanlar: PROF. DR. FETHİ SIRRI ÇAM
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Tıbbi Biyoloji, Genetik, Medical Biology, Genetics
- Anahtar Kelimeler: Genetik, Genler, Genler-P53, Hücre dizisi, Moleküler genetik, Mutasyon, Neoplazmlar, Prostat hastalıkları, Prostat neoplazmları, Genetics, Genes, Genes-P53, Cell line, Molecular genetic, Mutation, Neoplasms, Prostatic diseases, Prostatic neoplasms
- Yıl: 2019
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Manisa Celal Bayar Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Tıbbi Biyoloji Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
daha sonra dolduAmaç:Prostat kanseri, dünya çapında erkekler arasında yaygın bir sağlık sorunudur ve bu prostat kanseri vakalarının çoğu, disfonksiyonel mutant TP53 geni ile ilişkilidir. Bununla birlikte, disfonksiyonel mutant TP53 geni CRISPR/Cas9 sistemi ve tek iplikli oligodeoksinükleotid tamir kalıbı yardımıyla hücrelerin sahip olduğu homoloji aracılıklı tamir mekanizması aracılığıyla tamir edilebilir. Bu çalışmada, insan kanser PC-3 hücre hattı TP53 gen bölgesi üzerinde bulunan TP53 414delC (p.K139fs*31) null mutasyonunun CRISPR/Cas9 sistemi ve donör tek iplikli oligodeoksinükleotid yardımıyla tamir verimliliğinin incelenmesi amaçlanmıştır. Gereç ve Yöntem: Bu çalışmada iskelet yapısında CRISPR/Cas9 sistemini taşıyan px459V2.0 plazmidi ve tamir kalıbı olarakda iki farklı kullanılmıştır. CRISPR/Cas9 sistemiyle düzenlenen TP53 gen bölgesi yeni nesil sekans sistemi ile analiz edilmiştir. Düzenlemiş PC-3 hücrelerinde p53 ekspresyonunun varlığının tespiti için qPCR ve immünofloresan analizi yapılmıştır. Ayrıca, TP53 gen düzenlenmesine bağlı olarak apoptotik hücrelerin tespiti için flow sitometri analizi yapılmıştır. Bulgular: YNS sonuçlarına göre, sgRNA2 rehberliğindeki CRISPR/Cas9 sistemine eşlik eden iki ayrı tek iplikli oligodeoksinükleotid 1 ve tek iplikli oligodeoksinükleotid 2 varlığında TP53 414delC mutasyonu sırası ile %19,95 ve %26,0 oranında tamir edilmiştir. qPCR ve immünofloresan analizleri TP53 414delCmutasyonunun tamir olduğu PC-3 hücrelerinde p53 ekspresyonunu göstermiş ve ayrıca, yapılan flow sitometri analizi apoptotik hücre oranında belirgin bir artış olduğunu göstermiştir. Sonuçlar: Sonuç olarak, CRISPR/Cas9 sistemi aracılığıyla TP53 414delC mutasyonunun başarılı olarak tamir edildiği görülmüştür. rulacaktır
Özet (Çeviri)
daha sonra Aim:Prostate cancer is a common health problem among men worldwide and most of these prostate cancer cases are related to a dysfunctional mutant Tumor Protein p53 (TP53) gene. However, the CRISPR/Cas9 system can be used for repairing of a dysfunctional mutant TP53 gene in combination with donor single-stranded oligodeoxynucleotide (ssODN) via cells' own homology-directed repair (HDR) mechanism. In this study, we aimed to evaluate the CRISPR/Cas9 repairing efficiency on TP53 414delC (p.K139fs*31) null mutation, located in the TP53 gene, of human prostate cancer cell line PC-3 in combination with ssODNs. Material and method:CRISPR/Cas9 backbone carier px459 plasmids were used in this study. Edited TP53 414delC gene region were analysed with next-generation sequencing system. qPCR and immunofluorescence analysis was performed for detection of p53 expression from the edited PC-3 cells. Flow cytometry analysis was also performed for the detection of apoptotic cells. Results:According to the next-generation sequencing results, TP53 414delC mutation was repaired with an efficiency of 19,95% and 26,0% at the TP53 414delC position with ssODN1and ssODN2 accompanied by sgRNA2 guided CRISPR/Cas9, respectively. Besides, qPCR and immunofluorescence analysis showed that PC-3 cells, the TP53 414delC mutation of which were repaired, expressed wild type p53 again. Also, significantly increased number of apoptotic cells, driven by the repaired TP53 gene weredetected compared to the control cells by flow cytometry analysis. Discussion: As a result, CRISPR/Cas9 system accompanied by ssODN was shown to effectively repair the TP53 414delC gene region doldurulacaktır
Benzer Tezler
- Hedefe yönelik olarak geliştirilen toksin füzyonunun çeşitli kanser hücrelerinde in vitro tedavi edici etkisinin incelenmesi
Investigation of the in vitro therapeutic effects of targeted toxin fusion on various cancer cells
DAMLA ULUDAĞ
Yüksek Lisans
Türkçe
2021
Biyolojiİstanbul Medipol ÜniversitesiTıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. NİHAL KARAKAŞ
- İnsan prostat kanser PC-3 hücre hattında TRPM2 iyon kanalının otofajik yolaklardaki rolünün araştırılması
The investigation of TRPM2 ion channel's role on autophagic pathways in human prostate cancer PC-3 cell line
AHMET TEKTEMUR
Yüksek Lisans
Türkçe
2015
Tıbbi BiyolojiFırat ÜniversitesiTıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HALİT MOHAMMED ELYAS
- Prostat kanseri hücre hattında 6,6,9-trimetil-3-(2-fenilpropan-2-yl)-6a,7,10,10a-tetrahidrobenzo[c]kromen-1-ol (KM-233)'ün 5α-redüktaz (5AR) protein düzeyi üzerine etkisi
Effect of 6,6,9-trimethyl-3-(2-phenylpropan-2-yl)-6a,7,10,10a-tetrahydrobenzo[c]chromen-1-ol (KM-233) on 5α-reductase (5AR) protein levels in prostate cancer cell lines
ALIAKBAR SENOBARI GHEZELJEHMEIDAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2025
Tıbbi BiyolojiAnkara Yıldırım Beyazıt ÜniversitesiKanser Biyolojisi Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ENDER ŞİMŞEK
- Kapsaisin uygulanmış insan prostat kanser hücre hattında (PC3) AgNOR protein düzeylerinin belirlenmesi
Determination of AgNOR protein levels in the human prostat cancer cell line (PC3) applied with capsaicin
EMRE BUĞRAHAN ÖZMERDİVENLİ
Yüksek Lisans
Türkçe
2017
GenetikDüzce ÜniversitesiTıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. RECEP ERÖZ
- İnsan prostat kanseri hücre hattı PC-3'te oxaliplatin ve STAT3 inhibitörü piceatannol kombinasyonunun TGF-β sinyal yolağı aracılı sitotoksik etkisi
Cytotoxic effect of oxaliplatin and STAT3 inhibitor piceatannol combination in human prostate cancer cell line PC-3 via TGF-β signaling pathway
AYŞE KARDELEN KURTDERE
Yüksek Lisans
Türkçe
2022
Tıbbi BiyolojiTrakya ÜniversitesiTıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ZEYNEP BANU DOĞANLAR