Termofilik anoxybacillus amylolyticus bakterisinin gchı geninin klonlanması ve enzimin biyokimyasal karakterizasyonu
Cloning of gchi gene from thermophilic bacterium, anoxybacillus amylolyticus and biochemical characterization of the enzyme
- Tez No: 624659
- Danışmanlar: DOÇ. DR. FATİH ŞABAN BERİŞ
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2020
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Recep Tayyip Erdoğan Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 63
Özet
Bu çalışma, fenilketonüri metabolizmasında görevli birinci enzim olan GTP siklohidrolaz I'in termofilik Anoxybacillus amyloliticus bakterisinden klonlanmasını, ekspresyonunu ve enzimin saflaştırılarak biyokimyasal karakterizasyonunu içermektedir. A. amyloliticus bakterisinden PZR ile tespit edilen gchI geni 561 baz çifti büyüklüğünde toplam 186 amino asidi kodlayan tek bir açık okuma dizisidir. GTP'den dihidroneopterin trifosfat dönüşümünü katalizleyen enzim gen ekspresyonu pET28a(+) vektörüne klonlandıktan sonra E. coli BL21(DE3)pLysS hücresinde 1 mM IPTG ile indüksiyonu sağlandı. Enzimin saflaştırılması için Ni-NTA afinite kolonu kullanıldı. Yapılan karakterizasyon çalışmaları sonucunda enzimin Vmax'ı 6,9x10-5 ± 2,3x10-4 µM/dk/mg protein ve Km'si 7,0 ± 1,4 mM olarak bulundu. Enzim en iyi aktivite gösterdiği sıcaklık değeri 70C ve en uygun pH değeri ise 7,0 olarak belirlendi.
Özet (Çeviri)
This study was included the cloning, expression and biochemical charactreization of gchI that was coded the first enzyme responsible for fenilketonuria pathway, from thermophilic Anoxybacillus amyloliticus. This gene was 561 basepairs by detected PCR and its open reading frame has 186 amino acids. This enzyme catalyzed from GTP to dihydroneopterin triphosphate. We cloned into pET28a(+) expression vector and transform in E. coli BL21(DE3)pLysS host cells to express with 1 mM IPTG induction. The purification of the enzyme was achieved by Ni-NTA affinity column chromatography. We determined that its optimum pH was 7.0 and temperature is 70°C. Under optimal conditions, GCH-I exhibited a low enzymatic activity with Km- and Vmax- values of 7.0 ± 1,4 mM and 6,9x10-5 ± 2,3x10-4 µM/dk/mg protein, respectively..
Benzer Tezler
- Yeni türler oldukları öngörülen amilaz üreticisi termofilik Anoxybacillus izolatlarının fenotipik, kemotaksonomik ve moleküler taksonomik yaklaşımlar kullanılarak teşhisi
Identification of thermophilic amylase producing Anoxybacillus isolates proposed as novel bacterial species by using phenotypic, chemotaxonomic and molecular taxonomic approaches
EMİNE DEREBAY YILDIZ
Doktora
Türkçe
2017
BiyoteknolojiAnkara ÜniversitesiTemel Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ARZU ÇÖLERİ CİHAN
- Ağır metallerin değişik termofilik bakterilerdeki akümülasyonu, biyosorbsiyonu ve çevre biyoteknolojisinde kullanımı üzerine çalışmalar
The studies on the accumulation, biosorption of heavy metals in different thermophilic bacteria and their use in environmental biotechnology
SADİN ÖZDEMİR
- Termofilik Anoxybacillus flavithermus bakterisinin ısıl kararlı β-glukozidaz geninin klonlanması, ekspresyonu ve biyokimyasal karakterizasyonu
Cloning and expression of Afbgl gene from, Anoxybacillus flavithermus and biochemical characterization of thermophilic β-glucosidase
AYTÜL UZUN
Yüksek Lisans
Türkçe
2016
BiyolojiRecep Tayyip Erdoğan ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. FATİH ŞABAN BERİŞ
- Termofilik Anoxybacillus gonensis G2t bakterisinin alfa-amilaz aktivitesinin incelenmesi
Investigation of alpha-amylase activity of the thermophilic bacterium Anoxybacillus gonensis g2t
NECMETTİN NAROĞLU
Yüksek Lisans
Türkçe
2023
BiyolojiRecep Tayyip Erdoğan ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. FATİH ŞABAN BERİŞ
- Termofilik Anoxybacillus sp. AH1'de ?-amilaz enzimi üzerine çalışmalar
The studies of ?-amylase from thermophilic Anoxybacillus sp. AH1
ÖMER ACER