Geri Dön

Floresan protein temelli fret biyosensörünün üretilmesi ve geliştirilmesi

Production and development of fluorescent protein based fret biosensor

PDF İndir

  1. Tez No: 641742
  2. Yazar: İBRAHİM İNCİR
  3. Danışmanlar: PROF. DR. İSA GÖKÇE, DR. SEMA BİLGİN
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyokimya, Biyomühendislik, Biyoteknoloji, Biochemistry, Bioengineering, Biotechnology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2020
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Tokat Gaziosmanpaşa Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyomühendislik Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Biyomühendislik Bilim Dalı
  13. Sayfa Sayısı: 93

Özet

Förster veya Floresan Rezonans Enerji Transferi (FRET), iki florofor arasında meydana gelen radyoaktif olmayan enerji transferi olarak tanımlanmaktadır. FRET biyosensörlerinde, küçük organik boyalar, floresan proteinler ve kuantum noktacıklar olmak üzere üç ana tipte florofor kullanılmaktadır. Floresan proteinler, genetik olarak kodlanabilmesi ve hücrelerle uyumlu olmasından dolayı yaygın şekilde kullanılmaktadır. Floresan Protein temelli FRET (FP-FRET) biyosensörleri, enzim aktivitesi, hücre içi iyon konsantrasyonu, konformasyonel değişimler, protein-protein etkileşimleri gibi biyolojik süreçlerin görüntülenmesinde kullanılmaktadır. Sunulan tez çalışması ile proteaz aktivitesinin FP-FRET biyosensörü yardımıyla tespit edilmesi amaçlanmıştır. Bu kapsamda, TEV proteaz enzimi model olarak seçilmiştir. mClover3-mRuby3 ve mNeonGreen-mRuby3 floresan çiftlerini içeren FRET biyosensörlerine ait plazmitlerin tasarımı gerçekleştirilmiştir. Tasarlanan FP-FRET biyosensörüne ait genin ekspresyonu, rekombinant DNA teknikleri kullanılarak E. coli DH5α hücrelerinde gerçekleştirilmiştir. Ekspresyonu gerçekleştirilen füzyon protein, afinite kromatografisiyle saflaştırılmıştır. Sonuç olarak, TEV proteaz enziminin aktivitesi üretilen FP-FRET biyosensörü kullanılarak spektroflorometre cihazında gerçekleştirilen emisyon ölçümleri ile tespit edilmiştir. Daha sonraki çalışmalarda, önemli biyolojik süreçlerde belirteç olarak kullanılan enzimlerin aktivite tayini için yeni FP-FRET biyosensörlerinin üretilmesi hedeflenmektedir.

Özet (Çeviri)

Förster or Fluorescent Resonance Energy Transfer (FRET) is defined as non-radioactive energy transfer between two fluorophores. Three main types of fluorophores are used in FRET biosensors, small organic dyes, fluorescent proteins and quantum dots. Fluorescent proteins are widely used because they are genetically coding and compatible with cells. Fluorescent Protein-based FRET (FP-FRET) biosensors are used to display biological processes such as enzyme activity, intracellular ion concentration, conformational changes, protein-protein interactions. With the presented thesis study, it was aimed to determine the protease activity with the help of the FP-FRET biosensor. In this context, TEV protease enzyme was chosen as a model. Plasmids of FRET biosensors containing mClover3-mRuby3 and mNeonGreen-mRuby3 fluorescent pairs were designed. Expression of the gene of the designed FP-FRET biosensor was performed in E. coli DH5α cells using recombinant DNA techniques. The expressed fusion protein was purified by affinity chromatography. As a result, the activity of the TEV protease enzyme was determined by emission measurements performed on the spectrofluorometer device using the FP-FRET biosensor produced. In later studies, it is aimed to produce new FP-FRET biosensors for the activity determination of enzymes used in important biological processes.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    383012

    DNA-based assembly of transcription factors for bioluminescence resonance energy transfer (BRET) assay

    Biyolüminesans rezonans enerji transferi (BRET) analizi için transkripsiyon faktörlerinin dna temelli bir araya getirilmesi

    HASAN HÜSEYİN KAZAN

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2015

    BiyoteknolojiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. CAN ÖZEN

    DOÇ. DR. MESUT MUYAN

  2. Tez No

    593256

    Fluorescence based detection of magnetic fieldeffect on photolyases and flavin containingsolutions

    Manyetik alanın photolyase ve flavin içeren çözeltilerdeki etkisinin floresan tabanlı tespit edilmesi

    GAMZE GÜL

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2019

    Fizik ve Fizik MühendisliğiKoç Üniversitesi

    Fizik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ALPER KİRAZ

  3. Tez No

    385024

    Detection of homo/hetero-dimerizations between adenosine A2A, dopamine D2 and NMDA receptors by use of FRET and BiFC assays

    Adenozin A2A, dopamin D2 ve NMDA reseptörleri arasındaki homo/hetero-dimer oluşumlarının BiFC ve FRET yöntemleri ile tespiti

    SİNEM ÇELEBİÖVEN

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2014

    BiyolojiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. ÇAĞDAŞ DEVRİM SON

  4. Tez No

    865326

    Silybum marianum bitki ekstraktının antioksidan ve SARS-CoV-2'ye karşı antiviral aktivitelerinin in vitro modeller ile belirlenmesi

    Determination of antioxidant and antiviral activities of Silybum marianum plant extract against SARS-CoV-2 using in vitro models

    JENYA DURSUN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2024

    BiyolojiMarmara Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. NÜZHET CENK SESAL

    DR. YÜKSEL ÇETİN

  5. Tez No

    689205

    Kumarin-hidrazon temelli bir schıff bazı ile pepsin/hsa arasındaki bağlanma özelliklerinin spektroskopik ve moleküler kenetlenme metotları ile incelenmesi

    Investigation of binding properties between a schiff base based on coumarin-hydrazone and pepsin/hsa by spectroscopic and molecular docking methods

    ESRA ÖZGENÇ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2020

    KimyaHacettepe Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ELMAS GÖKOĞLU

Geri Dön