Bakteri yüzey gösterim tekniği ile rekombinant nükleaz enziminin saflaştırılması
Nuclease enzyme purification by bacterial surface display technique
- Tez No: 643058
- Danışmanlar: PROF. DR. GAMZE BAŞBÜLBÜL
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2020
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Aydın Adnan Menderes Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: 50
Özet
Proteinlerin üretimini kolaylaştırmak ve verimini artırmak için rekombinant teknoloji sürekli geliştirilmektedir. Böylece düşük miktarda üretilen proteinlerin üretimleri artırılabilir ve bunun sonucu olarak maliyetleri düşer. Günümüzde rekombinant protein üretimi için sıklıkla kullanılan tekniklerden biri de gösterim tekniğidir. Gösterim tekniği ile füzyon proteinler hedeflenebilir ve hücre veya bakteriofajın dış yüzey proteinlerine eklenir. Gösterim tekniği yeni protein tasarlamada oldukça kullanışlıdır. Hücre içeriğindeki çeşitli proteinler arasından hedeflenen proteini izole etmek karmaşık bir işlemdir. Bu çalışmada gösterim tekniği, sentezlenen hedef protein streptodornazı saflaştırmada kullanılmıştır. Bu amaçla lpp, ompA ve spd1 genleri için primerler dizayn edilmiş, çoğaltılıp birleştirilen bu genler plazmide aktarılmış ve füzyon protein halinde E. coli'de sentezi sağlanmıştır. Ardından E. coli membranı izole edilmiş ve enterokinaz kesimi ile Spd1 enzimi membrandan ayrılmıştır. Membran proteinleri santrifüjle uzaklaştırıldıktan sonra Spd1 enziminin saflaştırıldığı SDS-PAGE yöntemiyle doğrulanmıştır. Sonuç olarak klinikte kullanım alanı bulunan streptodornaz enziminin bakteri gösterim tekniği ile saflaştırılması ve bu amaçla rekombinant olarak üretilmesi, diğer klasik saflaştırma prosedürlerine kıyasla oldukça hızlı ve düşük maliyette gerçekleştirilmiştir. Tez çalışmamız kapsamında laboratuvarımızda geliştirilen bu yöntem, diğer pek çok hidrofilik, rekombinant protein için de kullanışlı olacaktır.
Özet (Çeviri)
Recombinant protein technology is constantly being developed to facilitate the production of proteins and their effiency. Thus, amount of produced protein can be increased by this technique, and as a result, their costs decrease. One of the techniques frequently used to design recombinant protein is display technique. Fusion proteins can be targeted by the display technique and bind to the outer surface proteins of the cell or bacteriophage. The display technique is very useful in designing new proteins. Targeted protein isolation from any cell is a complex process because cells have many functionally or structurally different proteins. In this study, the display technique is used to purify the target protein which is synthesized by a recombinant E. coli. For this purpose, primers have been designed for lpp, ompA and spd1 genes. These genes were amplified and combined, then transferred in a plasmid and cloned into E. coli as a fusion protein. After that, E. coli membrane was isolated and the Spd1 enzyme was cleavaged by enterokinase. Then membrane proteins were removed by centrifugation, the purified Spd1 enzyme was visualized on SDS-PAGE gel. As a result, the purification of the streptodornase enzyme, which is used clinically, with bacterial display technique. By this way, it was produced recombinantly with a very fast way and low cost compared to other classical purification techniques. This method, developed in our labratory within the scope of our thesis, will be useful for many other hydrophilic, recombinant proteins.
Benzer Tezler
- Langmuir Blodgett assembly of peptide functionalized nanoparticles onto silicatebased surfaces and their characterization
Peptit ile fonksiyonlandırılmış nanoparçacıkların Langmuir Blodgett yöntemi ile silika tabanlı yüzey üzerine kaplanması ve karakterizasyonu
NUR MUSTAFAOĞLU
Yüksek Lisans
İngilizce
2012
Biyolojiİstanbul Teknik ÜniversitesiNanobilim ve Nanomühendislik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MUSTAFA ÜRGEN
- Cam iyonomer içerikli farklı restoratif materyallerin yüzey özelliklerinin biyofilm oluşumuna etkisi
Effects of surface characteristic of glass ionomer based different restorative materials on biofilm formation
ÖZLEM SEÇKİN
Diş Hekimliği Uzmanlık
Türkçe
2018
Diş HekimliğiSüleyman Demirel ÜniversitesiRestoratif Diş Tedavisi Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ ÖZGE KAM HEPDENİZ
- Peptide drug candidates for pathogenic amyloids
Patojenik amiloidler için aday ilaç peptitleri
CEMİLE ELİF ÖZÇELİK
Yüksek Lisans
İngilizce
2020
Biyoteknolojiİhsan Doğramacı Bilkent ÜniversitesiMalzeme Bilimi ve Nanoteknoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. URARTU ÖZGÜR ŞAFAK ŞEKER
- Constructing peptide (GEPI)-protein molecular hybrids by using genetic engineering methods for materials and medical applications.
Malzeme ve medikal uygulamalar için gen mühendisliği yoluyla peptid (GEPI)-protein hibritlerin oluşması.
DENİZ ŞAHİN
Doktora
İngilizce
2011
Biyomühendislikİstanbul Teknik Üniversitesiİleri Teknolojiler Ana Bilim Dalı
PROF. DR. CANDAN TAMERLER
PROF. DR. MEHMET SARIKAYA
- Peptide based ligand discovery to prevent protein aggregation in neurodegenerative disease conditions
Nörodejeneratif hastalık koşullarında agregasyonu önlemek için peptit temelli ligand keşfi
ÖZGE BEĞLİ
Yüksek Lisans
İngilizce
2019
Biyokimyaİhsan Doğramacı Bilkent ÜniversitesiMalzeme Bilimi ve Nanoteknoloji Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ URARTU ÖZGÜR ŞAFAK ŞEKER