Geri Dön

Bakteri yüzey gösterim tekniği ile rekombinant nükleaz enziminin saflaştırılması

Nuclease enzyme purification by bacterial surface display technique

PDF İndir

  1. Tez No: 643058
  2. Yazar: YUNUS DOĞAN
  3. Danışmanlar: PROF. DR. GAMZE BAŞBÜLBÜL
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2020
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Aydın Adnan Menderes Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Bilim Dalı
  13. Sayfa Sayısı: 50

Özet

Proteinlerin üretimini kolaylaştırmak ve verimini artırmak için rekombinant teknoloji sürekli geliştirilmektedir. Böylece düşük miktarda üretilen proteinlerin üretimleri artırılabilir ve bunun sonucu olarak maliyetleri düşer. Günümüzde rekombinant protein üretimi için sıklıkla kullanılan tekniklerden biri de gösterim tekniğidir. Gösterim tekniği ile füzyon proteinler hedeflenebilir ve hücre veya bakteriofajın dış yüzey proteinlerine eklenir. Gösterim tekniği yeni protein tasarlamada oldukça kullanışlıdır. Hücre içeriğindeki çeşitli proteinler arasından hedeflenen proteini izole etmek karmaşık bir işlemdir. Bu çalışmada gösterim tekniği, sentezlenen hedef protein streptodornazı saflaştırmada kullanılmıştır. Bu amaçla lpp, ompA ve spd1 genleri için primerler dizayn edilmiş, çoğaltılıp birleştirilen bu genler plazmide aktarılmış ve füzyon protein halinde E. coli'de sentezi sağlanmıştır. Ardından E. coli membranı izole edilmiş ve enterokinaz kesimi ile Spd1 enzimi membrandan ayrılmıştır. Membran proteinleri santrifüjle uzaklaştırıldıktan sonra Spd1 enziminin saflaştırıldığı SDS-PAGE yöntemiyle doğrulanmıştır. Sonuç olarak klinikte kullanım alanı bulunan streptodornaz enziminin bakteri gösterim tekniği ile saflaştırılması ve bu amaçla rekombinant olarak üretilmesi, diğer klasik saflaştırma prosedürlerine kıyasla oldukça hızlı ve düşük maliyette gerçekleştirilmiştir. Tez çalışmamız kapsamında laboratuvarımızda geliştirilen bu yöntem, diğer pek çok hidrofilik, rekombinant protein için de kullanışlı olacaktır.

Özet (Çeviri)

Recombinant protein technology is constantly being developed to facilitate the production of proteins and their effiency. Thus, amount of produced protein can be increased by this technique, and as a result, their costs decrease. One of the techniques frequently used to design recombinant protein is display technique. Fusion proteins can be targeted by the display technique and bind to the outer surface proteins of the cell or bacteriophage. The display technique is very useful in designing new proteins. Targeted protein isolation from any cell is a complex process because cells have many functionally or structurally different proteins. In this study, the display technique is used to purify the target protein which is synthesized by a recombinant E. coli. For this purpose, primers have been designed for lpp, ompA and spd1 genes. These genes were amplified and combined, then transferred in a plasmid and cloned into E. coli as a fusion protein. After that, E. coli membrane was isolated and the Spd1 enzyme was cleavaged by enterokinase. Then membrane proteins were removed by centrifugation, the purified Spd1 enzyme was visualized on SDS-PAGE gel. As a result, the purification of the streptodornase enzyme, which is used clinically, with bacterial display technique. By this way, it was produced recombinantly with a very fast way and low cost compared to other classical purification techniques. This method, developed in our labratory within the scope of our thesis, will be useful for many other hydrophilic, recombinant proteins.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    315327

    Langmuir Blodgett assembly of peptide functionalized nanoparticles onto silicatebased surfaces and their characterization

    Peptit ile fonksiyonlandırılmış nanoparçacıkların Langmuir Blodgett yöntemi ile silika tabanlı yüzey üzerine kaplanması ve karakterizasyonu

    NUR MUSTAFAOĞLU

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2012

    Biyolojiİstanbul Teknik Üniversitesi

    Nanobilim ve Nanomühendislik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MUSTAFA ÜRGEN

  2. Tez No

    520513

    Cam iyonomer içerikli farklı restoratif materyallerin yüzey özelliklerinin biyofilm oluşumuna etkisi

    Effects of surface characteristic of glass ionomer based different restorative materials on biofilm formation

    ÖZLEM SEÇKİN

    Diş Hekimliği Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2018

    Diş HekimliğiSüleyman Demirel Üniversitesi

    Restoratif Diş Tedavisi Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ ÖZGE KAM HEPDENİZ

  3. Tez No

    610430

    Peptide drug candidates for pathogenic amyloids

    Patojenik amiloidler için aday ilaç peptitleri

    CEMİLE ELİF ÖZÇELİK

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2020

    Biyoteknolojiİhsan Doğramacı Bilkent Üniversitesi

    Malzeme Bilimi ve Nanoteknoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. URARTU ÖZGÜR ŞAFAK ŞEKER

  4. Tez No

    310529

    Constructing peptide (GEPI)-protein molecular hybrids by using genetic engineering methods for materials and medical applications.

    Malzeme ve medikal uygulamalar için gen mühendisliği yoluyla peptid (GEPI)-protein hibritlerin oluşması.

    DENİZ ŞAHİN

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2011

    Biyomühendislikİstanbul Teknik Üniversitesi

    İleri Teknolojiler Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. CANDAN TAMERLER

    PROF. DR. MEHMET SARIKAYA

  5. Tez No

    593787

    Peptide based ligand discovery to prevent protein aggregation in neurodegenerative disease conditions

    Nörodejeneratif hastalık koşullarında agregasyonu önlemek için peptit temelli ligand keşfi

    ÖZGE BEĞLİ

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2019

    Biyokimyaİhsan Doğramacı Bilkent Üniversitesi

    Malzeme Bilimi ve Nanoteknoloji Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ URARTU ÖZGÜR ŞAFAK ŞEKER

Geri Dön