Transgenik tütünde CRISPR/CAS9 sistemi kullanılarak sistein proteaz gen (NtCP6) ekspresyonunun susturulmasına yönelik çalışmalar
Studies for silencing the protease gen (NtCP6) expression by using CRISPR/CAS9 system in transgenic tobacco
- Tez No: 651927
- Danışmanlar: DR. ÖĞR. ÜYESİ FATMA İNCİ ÖZDEMİR, PROF. DR. YELDA ÖZDEN ÇİFTÇİ
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoteknoloji, Genetik, Biotechnology, Genetics
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2020
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Gebze Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 93
Özet
Son yıllarda bitkiler, artan oranda rekombinant proteinlerin üretimi için alternatif konakçılar olarak kullanılmaktadırlar. Tütün yabancı proteinlerin ekspresyonu için önemli konakçılardan biridir. Bununla birlikte, üretimde karşılaşılan ana sorunlardan biri, ürün ekstraksiyonu ve saflaştırılmasından önce hasat edilen biyokütlenin depolanması sırasında yabancı proteinin stabilitesidir. Aspartik ve sistein (papain benzeri sistein) proteazları gibi endojen proteazlar, genellikle depolama sırasında protein kaybından sorumlu olarak kabul edilir. Proteaz aktivitesinin, rekombinant protein üretimini iyileştirmek ve ekonomik olarak üretilmesine izin vermek için susturulabileceği düşünülmektedir. Böylece bu çalışmada, yabancı protein birikimini engellediği düşünülen NTCP6 geninin (GeneID: 107781604) CRISPR / Cas9 sistemi kullanılarak transgenik tütünde bakteriyel nitroredüktaz geni olan Ssap-NtrB'nin susturulmasını amaçladık. Tütün bitkisinde NtCP6 geninin ilk ekzonunda iki bölgeyi hedef alan sgRNA kasetleri oluşturulmuşur. Oluşturulan bu kasetlerle enzim kesim/ligasyon reaksiyonu ile tam bir ekspresyon kaseti elde edilmiş ve Golden gate klonlama ile pYLCRISPR/Cas9 plazmitine aktarılmıştır. pYLCRISPR/Cas9 plazmiti aktarılan Agrobacterium transgenik tütün bitkilerine infiltrasyon yöntemiyle transforme edilmiştir. Gözlenen morfolojik farklılıklar, sürgün uzamasının 7 kat azaldığını ve kök oluşumunun, kontrole kıyasla rejenere mutant tütün bitkilerinde geciktiğini gösterdi. Bu sonuçlara göre; bitki papain benzeri sistein proteazlarının bitkilerde yabancı protein stabilitesinde önemli bir rol oynamasının yanısıra bitki büyüme ve gelişiminde de etkili olduğu gözlenmektedir.
Özet (Çeviri)
In recent years, plants have been used as alternative hosts for the production of increasingly recombinant proteins. Tobacco is one of the attractive host system for expression of the foreign proteins. However, one of the main problems faced in production is the stability of the foreign protein during storage of the harvested biomass prior to the product extraction and purification is the main problem. Endogenous proteases such as aspartic and cysteine (papain-like cysteine) proteases are generally considered as responsible for protein loss during storage. It is contemplated that protease activity may be silenced to improve recombinant protein production and allow it to be produced economically. Thus, in this study, we aimed to silence the NTCP6 gene (GeneID: 107781604) which is thought to inhibit the accumulation of foreign protein, in this case bacterial nitroreductase gene, Ssap-NtrB, in transgenic tobacco by using CRISPR/Cas9 system. In the tobacco plant, sgRNA cassettes are created that target two regions in the first exon of the NtCP6 gene. With these cassettes, a complete expression cassette was obtained by enzyme cut / ligation reaction and transferred to pYLCRISPR / Cas9 plasmid by Golden gate cloning. The pYLCRISPR / Cas9 plasmid transferred to Agrobacterium were transferred to transgenic tobacco plant by infiltration method. The observed morphological differences showed that shoot elongation was reduced 7 fold and root formation was delayed in regenerated mutant tobacco plants in comparison to controls. Based on the these results, although plant papain-like cysteine proteases seems to play an important role in foreign protein stability in plants, it also effects the plant growth and development.
Benzer Tezler
- Sentromerik histone 3 ((CENH3) proteininin evrimsel değişimi, türleşmeye olan etkisi ve haploid tetikleme potansiyelinin S. lycopersicum türünde belirlenmesi
Evolutionary change of the centromeric histone 3 ((CENH3) protein and determination of its effect on speciation and haploid-inducing potential in S. lycopersicum species
İNANÇ SOYLU
Doktora
Türkçe
2020
BiyokimyaAkdeniz ÜniversitesiTarımsal Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. NEDİM MUTLU
- Optimizing CRISPR/CAS9 method to resolve bolting in spinach and use of cytokinin oxidase inhibitors for efficient plant transformation of 14 species
Ispanakta çiçeklenme sorunun çözümü için CRISPR/CAS9 yönteminin optimize edilmesi ve 14 türde etkin bitki transformasyonu için sitokinin oksidaz inhibitörlerinin kullanımı
IRUM SAADİA KHAN
Yüksek Lisans
İngilizce
2020
ZiraatEge ÜniversitesiTohumluk Bilimi ve Teknolojisi Ana Bilim Dalı
PROF. DR. EFTAL DÜZYAMAN
PROF. DR. STEFAAN WERBROUCK
- Kurşun metali ile kirlenmiş toprakların transgenik bitki kullanılarak temizlenme olanaklarının araştırılması
Reclamation possibility of lead contaminated soil by using transgenic tobacco
ABDULLAH EREN
- Agrobacterium mediated gene transfer in tobacco
Tütünde agrobacterium ile gen transferi
MEHRZAD MAHMOUDİAN
- Development of salt resistant transgenic plants by using TaNHX1 and TaSTR genes
TaNHX1 ve TaSTR genleri kullanarak tuza dirençli bitkilerin geliştirilmesi
MUSA KAVAS
Doktora
İngilizce
2011
BiyoteknolojiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyoloji Bölümü
PROF. DR. HÜSEYİN AVNİ ÖKTEM
PROF. DR. MERAL YÜCEL