SARS-CoV-2 spike proteinine karşı monoklonal antikor geliştirilmesi
Generation of monoclonal antibody against SARS-CoV-2 spike protein
- Tez No: 656004
- Danışmanlar: PROF. DR. ERKAN YILMAZ
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Bilim ve Teknoloji, Biyoteknoloji, Science and Technology, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2021
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Ankara Üniversitesi
- Enstitü: Biyoteknoloji Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Temel Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 87
Özet
Dünya Sağlık Örgütü'nün 2019 Aralık ayında SARS-CoV-2 virüsünü resmen tanımlaması ve global pandemi etiyolojik ajanı olarak ilan etmesinden sonra, dünya genelinde yaklaşık 2 milyon kişinin ölümüne sebep olan ve 100 milyon kişiyi enfekte eden COVID19, tüm dünyada hız kesmeden etkisini sürdürmeye devam etmektedir. Ülkeler arasında tedavi yönergeleri değişiklik gösterse de henüz virüse özel geliştirip onaylanmış kesin bir tedavi yöntemi bulunmamaktadır. Bu etiyolojik ajana karşı özel bir tedavi yönteminin bulunmaması dolayısıyla, dünya genelinde enfekte olmuş kişiler, pandeminin kontrol altına alınabilmesi için, sosyal izolasyonla karantina altında tutulmaya çalışılmış ve mevcut ilaçlarla virüs üzerinde etkinliği net olarak bilinmeden tedavi edilmiştir. Tedavide yüksek doz ilaç kullanımı sistemik yük oluşturmuş ve akut böbrek, karaciğer hasarı, sekonder enfeksiyonların gelişmesi gibi sistemik hasarlara yol açmıştır. Özellikle de multipl kronik hastalığı olan bireylerde tedavinin yetersiz kalması ciddi dezavantajları da beraberinde getirmiştir. Mevcut durum COVİD19 a karşı kullanılabilecek spesifik bir ajan/antikor geliştirilmesi yönündeki ihtiyacın aciliyetini vurgulamıştır. Bu konuda yürütülen bilimsel araştırmalardan elde edilecek veriler, hem virüsün daha iyi tanınmasını sağlama hem de global kullanım potansiyeline sahip biyoteknolojik ürün geliştirme ihtimali taşıdığından kritik seviyede önemlidir. Bu tez çalışmasında, SARS-CoV-2 virüsünün bağlanma füzyon ve hücresel girişinde önemli rol oynayan Spike (S) proteinine karşı hibridoma teknolojisi ile 146 klon toplandı. Pozitifliği kanıtlanan 8 klon içinden, IgG1 kappa isotipinde yüksek doz monoklonal antikor üreten 3 adet klon seçildi.. İndirekt ELISA testinde en yüksek pozitifliği veren klonun ürettiği antikor saflaştırıldıktan sonra immünblotlama ile inaktif virüs üzerinde etkinliği doğrulandı. Üretilen monoklonal antikorun nötralizan etkisi 1x10-8 titrasyonda SARS-CoV-2 virüsü ile inoküle edilen Vero E6 hücreleri kullanılarak araltırıldı. İnoküle Vero E6 hücrelerinde sitopatik etki gözlemlendiğinden mevcut antikorların nötralizan etkiye sahip olmadığına karar verildi. Çalışma ürünü olarak elde edilen bu antikor, humanizasyonu sonrasında pasif immünizasyon geliştirmede kullanılacak önemli biyoteknolojik ajan olacaktır.
Özet (Çeviri)
The World Health Organization officially identified the SARS-CoV-2 virus in December 2019 and declared it as a global pandemic etiological agent. COVID19, which caused the death of approximately 2 million people and infected 100 million people worldwide, still continues to be effective all over the world without a sign of a slight decrease. Although the treatment guidelines vary between countries, there is no virus-specific treatment method developed yet. Due to the lack of a special treatment procedure against this etiological agent, infected people all around the world were tried to be kept under social isolation in quarantine in order to control the pandemic and were treated with existing drugs without knowing their effectiveness on this virus. The use of high doses of these drugs has created systemic burden and caused damages such as acute kidney and liver damage, and the development of secondary infections. In particular, inadequate treatment in individuals with multiple chronic diseases brought serious disadvantages. The current situation has emphasized the urgency of the need to develop a specific agent / antibody that can be used against COVID19. The data to be obtained from scientific studies conducted on this subject are critically important, as they have the possibility of both ensuring better recognition of the virus and developing biotechnological products with global use potential. In this thesis study, among generated 146 clones, 8 clones in IgG1 kappa isotype showed positivity against Spike protein. 3 clones were chosen as monoclonal antibodies producing the best positivity against Spike (S) protein, which plays an important role in binding fusion and cellular entry of SARS-CoV-2 virus. After the antibody producing clone with the highest positivity detected by indirect ELISA test, the antibody was purified using protein G agarose binding column and its effectiveness on detection of the inactive virus was confirmed by immunoblotting. Whether the produced monoclonal antibody had a neutralizing effect was checked by using Vero E6 cells inoculated with SARS-CoV-2 virus at 1x10-8 titration. Since cytopathic effect was observed in inoculated Vero E6 cells, it was decided that the existing antibodies did not have neutralizing effect. By product of the thesis study after its humanization will be at great importance to be used as biotechnologic agent generating passive immunity.
Benzer Tezler
- COVID-19'a karşı nötralizan ve anti-idiyotipik antikorların geliştirilmesi
Development of neutralizing and anti-idiotypic antibodies against COVID-19
GAMZE KILIÇ
Doktora
Türkçe
2024
BiyoteknolojiBursa Uludağ ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ELİF DEMİRKAN
DOÇ. DR. FATIMA YÜCEL
- COVİD-19 patogenezi ile hematolojik parametrelerin ilişkisi
The Relationship Between COVİD-19 Pathogenesis and Hematologic Parameters
FEYZA ATİŞ
Yüksek Lisans
Türkçe
2023
MikrobiyolojiRecep Tayyip Erdoğan ÜniversitesiTıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ZİHNİ AÇAR YAZICI
- Design of short peptides targeting the interaction between SARS-CoV-2 and human ACE2
SARS-CoV-2 spike ve insan ACE2 arasındaki etkileşimi hedefleyen kısa peptitlerin tasarımı
NUMAN NUSRET USTA
Yüksek Lisans
İngilizce
2023
Bilim ve Teknolojiİstanbul Teknik ÜniversitesiHesaplamalı Bilimler ve Mühendislik Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ SEFER BADAY
- Predicting novel small inhibitors of SARS-CoV-2: Targeting SARS-CoV-2 spike protein, human ACE2 protein and SARS-CoV-2 NsP16 via molecular docking
SARS-CoV-2 için yeni küçük inhibitör moleküllerin tahmini: Moleküler yanaştırma yöntemiyle SARS-CoV-2 spike proteini, insan ACE2 proteini ve SARS-CoV-2 NsP16 hedeflenmesi
ONUR ÖZER
Yüksek Lisans
İngilizce
2022
Biyolojiİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. MERT GÜR
DR. ÖĞR. ÜYESİ SEFER BADAY
- Development and immunological evaluation of SARS-CoV-2 virus-like particles (VLP) expressing the prefusion stabilized variants of the spike protein
Prefüzyon stabilize Spike proteini varyantlarını taşıyan SARS-CoV-2 virüs benzeri parçacıkların geliştirilmesi ve immünolojik değerlendirilmesi̇
EMRE MERT İPEKOĞLU
Yüksek Lisans
İngilizce
2022
Allerji ve İmmünolojiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MAYDA GÜRSEL