Leucojum aestivum L.'den tirozin dekarboksilaz (TYDC) geninin izolasyonu ve klonlanması
Isolation and cloning of the tyrosine decarboxylase (TYDC) gene from Leucojum aestivum L.
- Tez No: 661235
- Danışmanlar: DOÇ. DR. SEMRA HASANÇEBİ, DR. ÖĞR. ÜYESİ EMEL ORDU
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoteknoloji, Genetik, Biotechnology, Genetics
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2021
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Trakya Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoteknoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 86
Özet
Bu çalışmada, Amaryllidaceae ailesine ait olan Leucojum aestivum L. (göl soğanı) bitkisinden, tirozin dekarboksilaz (TYDC) geninin izole edilmesi amaçlanmıştır. L. aestivum Trakya bölgesinde yayılış gösteren ve farmakolojik olarak önemli bazı alkaloidlerin, özellikle de likorin ve galantaminin doğal üreticisi olan oldukça önemli bir farmasötik bitkidir. Galantamin, Alzheimer hastalığı başta olmak üzere demans benzeri nörolojik problemlerin tedavisinde kullanılan ilaçların etkin maddesi olarak önemli bir sekonder metabolittir. TYDC enzimi; çeşitli bitki türlerinde önemli bazı sekonder metabolitlerin sentez yolağında, ilk basamaklarda etkin olan kritik bir enzimdir. Galantamin biyosentezi de, fenilalanin ve tirozin amino asitleri ile başlar ve TYDC sentez yolağındaki kritik iki enzimden biridir. Dolayısıyla TYDC geninin aydınlatılması, galantamin üretiminin artırılması yönündeki manipülasyonlara olanak tanıyacaktır. Daha önce bir çok bitkide TYDC geni incelenmiş ancak L. aestivum'da herhangi bir çalışma yapılmamıştır. Sunulan tez çalışması kapsamında galantamin üreticisi olan yakın akraba türlerin TYDC gen bilgileri incelenmiş ve genin izolasyonu için primerler tasarlanmıştır. L. aestivum'un çiçeklerinden total RNA izole edilerek tasarlanan primerler ile genin tam ORF'si elde edilmeye çalışılmıştır. Elde edilen TYDC1 genine ait DNA fragmenti, öncelikle pJET.Blunt/1.2 klonlama vektörüne klonlanmış ve dizi analizi yaplılarak LuaTYDC1 genine ait kodlayıcı dizi elde edilmiştir. Genin kodlayıcı dizisi, galantamin üreticisi olan yakın türler Narcissus pseudonarcissus, Narcissus papyraceus, Lycoris aureus ve Lycoris longituba'un TYDC1 geni ile %87-91,6 oranında yüksek bir homoloji göstermiş, amino asit dizisi karşılaştırmalarında ise homoloji oranı %89-93,53 olarak gözlenmiştir. Daha sonra restriksiyon enzimleri ile kesilerek pJET.Blunt/1.2 vektöründen geri kazanılan LuaTYDC1 geni pQE.70 ekspresyon vektörüne bağlanarak ekspresyon ve fonksiyon analizleri için E. coli'ye transfer edilmiştir.
Özet (Çeviri)
In this study, it was aimed to isolate the tyrosine decarboxylase (TYDC) gene from Leucojum aestivum L. (summer snowflake) plant belonging to the family Amaryllidaceae. L. aestivum is a very important pharmaceutical plant that is a natural producer of some pharmacologically important alkaloids, especially lycorine and galantamine, spread Thrace region. Galantamine is an important secondary metabolide as the active ingredient of drugs used in the treatment of dementia-like neurological problems, especially Alzheimer's disease. TYDC enzyme; It is a critical enzyme that is effective in the first steps in the synthesis pathway of some important secondary metabolites in various plant species. Galantamine biosynthesis also starts with the phenylalanine and tyrosine amino acids and TYDC is one of the two critical enzymes in the synthesis pathway. Thus, the illumination of the TYDC gene will allow manipulations to increase galantamine production. TYDC gene has been studied in many plants before, but no study has been done in L. aestivum. Within the scope of the presented thesis, TYDC genes of closely related species that are galantamine producers were examined and primers were designed for the isolation of the gene. The full ORF of the gene was obtained with designed primers by using isolated total RNA from the flowers of L. aestivum. The obtained DNA fragment was firstly cloned into pJET.Blunt / 1.2 cloning vector and the coding sequence of the LuaTYDC1 gene was obtained by sequence analysis. The coding sequence of the gene showed a high homology of 87-91.6% with the TYDC1 gene of Narcissus pseudonarcissus, Narcissus papyraceus, Lycoris aureus and Lycoris longituba which are galantamin producer close relative species, and the homology rate was 89-93,53% in their amino acid sequence comparisons. Later, the LuaTYDC1 gene, which was cut with restriction enzymes and recovered from the pJET.Blunt / 1.2 vector, was ligated to the pQE.70 expression vector and transferred to E. coli for expression and functional analysis.
Benzer Tezler
- Leucojum aestivum lL.'den Tirozin dekarboksilaz enziminin (LuaTYDC1) heterolog ekspresyonu ve saflaştırılması
Heterologous expression and purification of Tyrosine decarboxylase enzyme (LuaTYDC1) from Leucojum aestivum L.
ZEKİYE DEMİR
Yüksek Lisans
Türkçe
2023
BiyoteknolojiYıldız Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. EMEL ORDU
- Türkiye'de yetişen bazı bitkilerin asetilkolinesteraz inhibitörü aktiviteleri yönünden incelenmesi
Investigation of acetylcholinesterase inhibitor activity of some plants some Turkish plants
İLKAY ORHAN
Doktora
Türkçe
2002
Eczacılık ve FarmakolojiGazi ÜniversitesiFarmakognozi Ana Bilim Dalı
PROF. DR. BİLGE ŞENER
- Türkiye'den ihraç edilen bazı amaryllidaceae familyası bitkilerinin alkaloitleri yönünden incelenmesi
Başlık çevirisi yok
FUNDA MUHTAR
- Leucojum aestıvum L. bitkisinden alkaloidlerin izolasyonu, yapılarının aydınlatılması ve asetilkolinesteraz ve butirilkolinesteraz inhibisyon aktivitelerinin (Anti-Alzheımer) incelenmesi
The isolation and structure elucidation of alkaloids from Leucojum aestivum L. and investigation of acetylcholinesterase and butyrylcholinesterase inhibition (Anti-Alzheimer) activities
CANAN KARUNCULA
- Determination of seasonal variation in alkaloid content,morphological characterizataon and evaluation of biologicalactivities of Leucojum aestivum L. (summer snowflake)populations growing in different locations of turkey
Türkiye'de farklı lokasyonlarda yetişen Leucojum aestivum(gölsoğanı) popülasyonlarının alkaloid içeriğinin mevsimselvaryasyonunun belirlenmesi, morfolojik karakterizasyonu vebiyolojik aktivitelerinin değerlendirilmesi
SİNA CAFER DEMİR
Doktora
İngilizce
2021
BiyolojiBolu Abant İzzet Baysal ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. İSMAİL EKER
PROF. DR. ARZU TÜRKER