Characterization of human erythroyte GST TI-I and polymorphic distribution in a Turkish population
İnsan eritrositinde GST TI-1 enziminin karakterizasyonu ve Türk populasyonundaki polymorfizmi
- Tez No: 68731
- Danışmanlar: PROF. DR. MESUDE İŞCAN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: İnsan eritrositi, metilen klörür, Glutatyon S-tranferaz Teta (1-1), ızozım. vi, Human erythrocytes, methylene chloride, glutathione S-transferase Theta (1-1), isozyme. IV
- Yıl: 1997
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Orta Doğu Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 106
Özet
ÖZ İNSAN ERİTROSİTİNDE GST Tl-1 ENZİMİNİN KARAKTERIZASYONU VE TÜRK POPULASYONUNDAKİ POLYMORFİZMİ Bozcaarmutlu, Azra Yüksek Lisans, Biyokimya Bölümü Tez Yöneticisi, Prof. Dr. Mesude İşcan Haziran 1997, 89 sayfa Glutatyon S-transferazlar (GST) birçok elektrofilik madde ile glutatyon konjugasyonunu katalize eden çok fonksiyonlu izozimler grubudur. Memelilerde, farklı katalitik ve yapısal özellik gösteren dört farklı sitozolik GST vardır, Alfa, mu, pi, ve teta. Teta bu enzimlerden insanda ve sıçanda en yeni bulunanıdır. Günümüzde üç sıçan teta ailesi, T5-5, T12-12 ve T13-13 ve iki insan enzimi, T1-1 ve T2-2 bilinmektedir. GST T1-1 halojenli alkan ve alifhatik epoksitler diye anılan endüstriyel kimyasalların metabolizmasında önemli rol oynarlar, GST T2-2 ise aktif sülfat esterlerini metabolize eder.Bu çalışmada, insan eritrositinde GST T1-l'in özellikleri metilen klörür substrat olarak kulanılarak incelenmiştir. Metilen klörûr endüstride birçok alanda kullanılan bir çözücüdür ve yüksek doza maruz kalan farelerde kanserojen etki gösterdiği bulunmuştur. Metilen klörür, GST Tl-1 izozimi tarafından GSH ile konjuge edilerek S-klorometil glutatyonu oluşturur. Bu ara metabolit hızla hidrolize olarak glutatyon ve formaldehide dönüşür. Tüpler içinde oluşan formaldehit miktarı Nash reaktifi kullanılarak belirlenir. İnsan eritrositlerinde averaj GST Tl-1 aktivitesi 50.9±29.8pmole/dak/mgHgb olarak bulundu. Reaksiyon hızının 0.040 mg hemoglobine ve 105 dakika reaksiyon süresine kadar doğru orantılı arttığı görüldü. İnsan eritrosit GST Tl-1 enziminin en yüksek aktiviteyi pH 7.4 ve 37°C verdiği saptandı. İnsan eritrositinde GST Tl-1 120mM metilen klörür ve 2mM GSH konsantrasyonlarında doygunluğa ulaştığı gözlendi. Eritrosit GST Tl-l'nin GSH için Vmax ve Km değerleri, sırasıyla, 41 pmole/dak/mgHgb ve 1.1 mM olarak ve metilen klörür için 54 pmole/dak/mgHgb ve 106 mM olarak hesaplandı. GST Tl-l'in diğer iki substratı, l,2-epoxy-3-(p-nitrophenoxy) propane (EPNP) ve p-nitrobenzyl chloride, kullanılarak substrat kompetion deneyleri yapıldı. Bunlara ek olarak, GST Tl-1 aktivitesine 131 sağlıklı erkek ve bayandan kan örneği toplanarak bakıldı. Metilen klorürün glutatyon S-transferase'e bağlı konjugasyonun Türk populasy onunda polimorfik olduğu, 14% bireyde enzimin olmadığı bulundu.
Özet (Çeviri)
ABSTRACT CHARACTERIZATION OF HUMAN ERYTHROCYTE GST Tl-1 AND POLYMORPHIC DISTRIBUTION IN A TURKISH POPULATION Bozcaarmutlu, Azra M.S., Department of Biochemistry Supervisor: Prof. Dr. Mesude Işcan July, 1997, 89 pages The glutathione S-transferases (GST) are a family of multifunctional isoenzymes catalysing the conjugation of glutathione (GSH) to a variety of electrophilic compounds. In mammals, there are four distinct families of soluble cytosolic GSTs, Alpha, Mu, Pi and Theta, with distinct catalytic and structural properties. The Theta family has been identified recently in rat and man. At present three rat Theta-class enzymes are known, 5-5, 12-12 and 13-13 and two human enzymes, Tl-1 and T2-2. GST Tl-1 plays a critical role in the metabolism of important industrial chemicals, namely halogenated alkanes and aliphatic epoxides and GST T2-2 metabolizes reactive sulfate esters. iiiThe present study was performed in order to characterize GST Tl-1 in human erythrocytes using methylene chloride (DCM) as substrate. Methylene chloride is a widely used industrial solvent and it was found to be carcinogenic in mice when they are exposed in high doses. It is conjugated with glutathione by GST Tl-1 to S-chloromethyl glutathione, which is rapidly hydrolyzed and degraded to glutathione and formaldehyde. The quantity of formaldehyde formed in head space vials was determined by Nash reagent. The average enzyme activity of erythrocyte GST Tl-1 was found to be 50.9+ 29.8 pmole/min/mgHb. The rate of reaction was linear up to 0.040mg hemoglobin and 105 minutes of incubation period. The erythrocyte GST Tl-1 showed its maximum activity at pH values around 7.4 and 37°C. Human erythrocyte GST Tl-1 seemed to be saturated at around 120mM methylene chloride and 2mM GSH concentrations. The Vmax and Km values of erythrocyte GST Tl-1 for methylene chloride as a substrate were calculated as 54 pmole/min/mgHb and 106 mM, respectively, and for GSH as 41 pmole/min/mgHb and 1.1 mM, respectively. The substrate competion experimants were carried out by using two other substrates of GST Tl-1, l,2-epoxy-3-(p-nitrophenoxy) propane (EPNP) and p-nitrobenzyl chloride (pNBC). In addition, the erythrocyte GST Tl-1 activity was measured from 131 healthy volunteers males and females. It was shown that glutathione S-transferase dependent conjugation of DCM is polymorphic in a Turkish population, 14% of the individuals lacked the activity.
Benzer Tezler
- İnsan ve sığır eritrosit glutatyon redüktaz enziminin saflaştırılması, karakterizasyonu, bazı ilaç ve kimyasal maddelerin inhibisyon veya aktivasyon etkilerinin araştırılması
Purification and characterization of human and bovine erythrocytes glutathione reductase, investigation of inhibition or activation effects of some drugs
MUSTAFA ERAT
- Isolation and characterization of two forms of soluble NADH cytochrome b5 reductase from human erythrocytes
Başlık çevirisi yok
ADİLE ŞAPLAKOĞLU(UMAY)
- Mikrodalga yöntemiyle 2,2' ditiyo dibenzo taç etrelerin sentezi ve karakterizasyonu
Synthesis and characterization of 2,2 'dithio dibenzo crown ether by microwave method
AHMET SAPMAZ
- Ratlarda sentetik seks steroidlerinin lipid metabolizması üzerine etkileri
Başlık çevirisi yok
KADER KÖSE
- Preparation of cryogel columns for depletion of hemoglobin from human blood
İnsan kanından hemoglobin uzaklaştırılması için kriyojel kolonlarının hazırlanması
ALİ DERAZSHAMSHIR
