Geri Dön

Partial purification and characerization of neutral trehalase from baker's yeast

Nötral trehalaz enziminin ekmek mayası Saccharomyces cerevisiae' den kısmen saflaştırılması ve karakterizasyonu

  1. Tez No: 68809
  2. Yazar: SANİYE YARAR
  3. Danışmanlar: PROF. DR. HALUK HAMAMCI
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyokimya, Biochemistry
  6. Anahtar Kelimeler: Nötral Trehalaz, Trehaloz, Saccharomyces cerevisiae, Sıcaklık -şok proteinleri, strese dayanıklılık, Neutral Trehalase, Trehalose, Saccharomyces cerevisiae, Heat
  7. Yıl: 1997
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Orta Doğu Teknik Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 84

Özet

oz Yarar, Saniye Yüksek lisans, Biyokimya Anabilim Dalı Tez Yöneticisi: Prof. Dr. Haluk Hamamcı Aralık 1997, 71 sayfa Trehaloz (a-D-ghıkopyranosyl-a-D-ğlukopyranoz), mayalardaki başlıca depo kafbonhidratlardandrr ve trehalaz enzimi (EC 3.2.1.28) tarafından glukoza hidroliz edilir. Fungus trehalaz enzimleri başlıca iki gruba ayrılır: Birinci grup trehalaz enzimleri asidik pH optimuma sahiptir (pH 3.5 ve 5.5) ve vakuolde yer alır. ikinci grup trehalaz enzimleri ise nötr pH de çalışır (pH 6 ve 7,5) ve sitozolde bulunur. Nötral trehalaz enzim aktivitesi, cAMP bağunh-protein kinaz tarafından düzenlenir ve in vitro olarak cAMP varlığında Mg ATP ve protein kinaz ile aktive edilebilir. Bu çalışmada, nötral trehalaz enzimi, ticari ekmek mayası Saccharomyces cerevisiae den kısmen saflaştırılmış ve karakterize edilmiştir.Ticari ekmek mayası susundan, nötral trehalaz enzimi amonyum sülfat ve DEAE-selüloz kolon kromatografisi kullanılarak kısmen saflaştırılmıştır. Trehalaz % 35-50 amonyum sülfat fraksiyonunda çökmüş ve yaklaşık 5-8 kat saflaştırma başarılmıştır. Mayaların cAMP'ye bağımlı protein kinaz enzimi de % 35-50 ammonyum sülfat fraksiyonunda bulunmaktadır ve bu iki protein DEAE-selüloz kolonunda ayrışmaktadır. İyon değiştirici kromatografiden sonra tamamen inaktif bale gelen trehalaz enzimi protein kin azın, cAMP ve ATP ile birlikte eklenmesi ile aktif hale gelir. Kolon kromatografisi üe 215-260 kat saflaştırma sağlanmıştır. Bir mM EDTA ham özütteM trehalaz aktjvitesini tamamıyla inhibe ederken, amonyum sülfat ve DEAE-Selüloz kromatografisinden sonraki inhibisyon dereceleri sırasıyla % 73.5 ve % 50 olarak bulunmuştur. Optimum pH aralığı ve sıcaklığı, sırasıyla pH 6-6.8 ve 30 °C olarak tayin edilmiştir. Km ve Vmax değerleri sırasıyla trehaloz için 11.78 mM ve 12.16 pmole glu/min/ mg protein olarak bulunmuştur. Enzimin moleküler ağırlığı, % 7.5 SDS-PAGE ile 80.000 Da civarında hesaplanmıştır.

Özet (Çeviri)

ABSTRACT PARTIAL PURIFICATION AND CHARACTERIZATION OF NEUTRAL TREHALASE FROM BAKER'S YEAST Saccharomyces cerevisiae Yarar, Saniye M. S., Department of Biochemistry Supervisor:Prof. Dr. Haluk Hamamcı December, 1997, 71 Pages Trehalose (a-D-glucopyranosyl-a-D-glucopyranose), a major reserve carbohydrate in yeast, mobilized by hydrolysis to glucose catalysed by trehalases (EC 3.2. 1.28). Fungal trehalases can be divided relatively easily into two groups: The first group contains trehalases with an acid pH optimum (between pH 3.5 and 5.5) and localized in the vacuole. A second type of trehalases have neutral pH optimum (between pH 6 and 7.5) and localized in the cytosole.Neutral trehalase activity is regulated through cAMP-dependeiit protein kinase and it can be activated by protein kinase in the presence of cAMP and MgATP //; vitro. In this study, neutral trehalase enzyme was partially purified and characterized from the commercial baker's yeast Saccharomyces cerevisiae. The neutral trehalase of a commercial baker's yeast ( S. cerevisiae) strain has been partially purified using ammonium sulfate fractionation and DEAE- Cellulose column chromatography techniques. Trehalase was precipitated between 35-50 % ammonium sulfate saturation and approximately 5-8 fold purification achieved. The yeast cAMP-dependent protein kinase was also precipitated in the same fraction and these two proteins were separated by DEAE-Cellulose column chromatography. Trehalase became totally inactive after ion exchange chromatography, (“ cryptic trehalase”(tre-c) ) which was later activated with the addition of protein kinase together with cAMP and ATP. A 215 to 260 fold purification was obtained after column chromatography. One mM EDTA caused the complete inhibition of enzyme in crude extract, however the inhibition levels in ammonium sulfate and DEAE-Cellulose fraction were 73.5 % and 50 %, respestively. Optimal pH range and temperature value of the enzyme were determined as pH 6-6.8 and 30 °C, respectively. The Km and Vmax values were found as 11.78 mM trehalose and 12. 16 umole glucose/ min/mg protein, respectively by using Lineweaver-Burk plot. The molecular weight of neutral trehalase was estimated as around 80.000 Da by 7. 5 % SDS-PAGE.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    675143

    Bacillus invictae ve Lactobacillus kefiri' den mannanaz ve fitaz enzimlerinin kısmi saflaştırılması ve karakterizasyonu

    Partial purification and characterization of mannanase and phytase enzymes from Bacillus invictae and Lactobacillus kefiri

    ŞEYMA ALIM

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2021

    ZiraatAtatürk Üniversitesi

    Tarımsal Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. NESLİHAN DİKBAŞ

  2. Tez No

    309904

    Kaldirik (Trachystemon orientalis) bitkisinden polifenol oksidaz enziminin kısmi saflaştırılması ve karakterizasyonu

    Partial purification and characterisation of polyphenol oxidase from borage (Trachystemon orientalis ) plant

    ESMA HANDE ALICI

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2012

    BiyokimyaSakarya Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. GÜLNUR ARABACI

  3. Tez No

    696363

    Denizel kökenli mikrobiyal suşlardan arginin deiminaz terapötik enziminin üretimi ve karakterizasyonu

    Production and partial characterization of arginine deiminase therapeutic enzyme from marine microorganisms

    NURŞAH UYSAL

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2021

    BiyoteknolojiEge Üniversitesi

    Biyomühendislik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ELİF ESİN HAMEŞ TUNA

  4. Tez No

    76009

    Partial purification and characterization of NADH-cytochrame b5 reductase from mullet liver microsomes

    NADH-sitokrom b5 redüktaz enziminin kefal karaciğer mikroorganizmalarından kısmi olarak saflaştırılması ve karakterizasyonu

    ZAHİDE KABAKLAR

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    1998

    BiyokimyaOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyokimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. EMEL ARINÇ

  5. Tez No

    287201

    Armillaria mellea mantarından beta-glukozidaz enziminin kısmi olarak saflaştırılması ve karakterizasyonu

    Partial purification and characterization of beta-glucosidase from Armillaria mellea

    AYŞE TURAN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2011

    KimyaKaradeniz Teknik Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. NAGİHAN SAĞLAM ERTUNGA

Geri Dön