D-laktat dehidrogenazın kovalent immobilizasyonu ve karakterizasyonu
Covalent immobilization and characterization ofd-lactate dehydrogenase
- Tez No: 691915
- Danışmanlar: PROF. DR. SEYDE SEYHAN TÜKEL
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Kimya, Chemistry
- Anahtar Kelimeler: D-laktat dehidrogenaz, immobilizasyon, 3-aminopropil silika jel, D-lactate dehydrogenase, immobilization, 3-aminopropyl silica gel
- Yıl: 2021
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Çukurova Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 91
Özet
Bu tez çalışmasında, glutaraldehit ara kolu üzerinden 3–aminopropil silika jele kovalent immobilize edilen Leuconostoc mesenteroides D-laktat dehidrogenaz'ın (D-LDH), D-Laktik asit üretebilen aktif ve kararlı preparatları optimize edilmiştir. 0,250 g destek üzerine eklenen 1 mg/mL protein derişimindeki enzim çözeltisi ile % 86 immobilizasyon verimi elde edilmiştir. Serbest ve immobilize D-LDH karakterize edilerek optimum pH ve sıcaklık değerleri ve kinetik parametreleri belirlenmiştir. Ayrıca, serbest ve immobilize D-LDH'ların depolanma ve termal kararlılıkları araştırılmış ve immobilize D-LDH'ın tekrar kullanım kararlılığı kesikli reaktörde incelenmiştir. Serbest D-LDH için optimum pH 7,0, immobilize D-LDH için ise pH 6,0 olarak belirlemiştir. Serbest ve immobilize D-LDH'lar için optimum sıcaklık sırasıyla 37 C ve 45 C olarak bulunmuştur. Serbest D-LDH için Km ve Vmax değerleri sırasıyla 0,365 mM ve 86,95 U/mg protein, immobilize D-LDH için bu değerler sırasıyla 0,077 mM ve 19,16 U/mg protein olarak belirlenmiştir. Serbest D-LDH, 4 C'de 30 gün depolama sonunda başlangıç aktivitesinin % 85'ini korumakta, 25 C'de ise 10 gün depolama sonunda başlangıç aktivitesinin % 97'sini kaybetmektedir. İmmobilize D-LDH ise 4 C ve 25 C'de 30 gün depolama sonunda sırasıyla başlangıç aktivitesinin % 82 ve % 37 'sini koruduğu belirlenmiştir. Serbest D-LDH, 45 C'de 4 saat inkübasyon sonunda aktivitesinin % 86'sını korurken, immobilize D-LDH aynı koşullarda % 82'sini korumuştur. İmmobilize D-LDH'ın kesikli reaktörde 10 kullanım sonunda başlangıç aktivitesinin % 38'ini koruduğu belirlenmiştir.
Özet (Çeviri)
In this thesis, the covalent immobilization of D-Lactate dehydrogenase (D-LDH) from Leuconostoc mesenteroides onto 3-aminopropyl silica gel via the glutaraldehyde spacer arm was optimized to have an active and stable preparation which is able to produce D-Lactic acid. The immobilization yield of 86 % was achieved using 1 mg/mL protein for 0.250 g support. The free and immobilized D-LDHs were characterized and their optimum pH and temperature values and kinetic parameters were determined. In addition, the storage and thermal stability of free and immobilized D-LDHs were investigated. The reuse stability of immobilized D-LDH was also determined in a batch reactor. The optimum pH for free D-LDH was determined as 7.0, however, it was 6.0 for immobilized D-LDH.The optimum temperatures for free and immobilized D-LDHs were found to be 37 C and 45 C, respectively. The Km and Vmax values for free D-LDH were determined as 0.365 mM, 86.95 U/mg protein, and the corresponding values were determined as 0.077 mM and 19.16 U/mg protein, respectively for immobilized D-LDH. The free D-LDH retained 85 % of its initial activity after 30 days of storage at 4 C, however it lost 97 % of its initial activity after 10 days of storage at 25 C. The immobilized D-LDH retained 82 % and 3 % of its initial activity after 30 days of storage at 4 C and 25 C, respectively. The free D-LDH preserved 86 % of its initial activity after 4 hours of incubation at 45 C, while immobilized D-LDH preserved 82 % under the same conditions. The immobilized D-LDH retained 38 % of its initial activity after 10 uses in a batch reactor.
Benzer Tezler
- Progesteron ve D vitamininin karaciğer kanseri hücreleri üzerine etkilerinin araştırılması
Investigation of the effects of progesterone and vitamin D on liver cancer cells
MELEK NAZ AKKUŞ
Yüksek Lisans
Türkçe
2023
Histoloji ve EmbriyolojiMaltepe ÜniversitesiKlinik Embriyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. YAPRAK DÖNMEZ ÇAKIL
- Kumarin türevlerinin Bacteroides fragilis'in D-LDH enzimi üzerine olan inhibitör etkisinin belirlenmesi
Determination of inhibitory effects of coumarin derivatives on Bacteroides fragilis D-LDH enzyme
ERENNUR UĞUREL
Yüksek Lisans
Türkçe
2015
BiyomühendislikYıldız Teknik ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. DİLEK BALIK
DR. ÖZKAN DANIŞ
- Isolation and characterization of the gene encoding d-lactate dehydrogenase enzyme from bacteroides fragilis that is known to be localized in colon cancer tissues
Kolon kanseri dokularında yerleştiği bilinen bacteroıdes fragılıs in d-laktat dehidrogenaz enzimini kodlayan genin izolasyonu ve karakterizasyonu
ZEYNEP BÜŞRA BOLAT
Yüksek Lisans
İngilizce
2013
BiyokimyaYıldız Teknik ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. DİLEK TURGUT BALIK
- Akut mezenterik iskeminin erken tanısında serum I-FABP düzeylerinin yeri (Deneysel çalışma)
The role of serum I-FABP levels in the early diagnosis of acute mesenteric ischemia (Experimental study)
SERKAN ZENGER
- Pichia pastoris mayasına sığır laktat dehidrogenaz geninin aktarımı ve laktik asit üretimi
Expression of bovine lactate dehydrogenase gene in yeast Pichia pastoris and lactic acid production
FIRAT AYAS
Doktora
Türkçe
2018
BiyoteknolojiAkdeniz ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MEHMET İNAN