Börülce bitkisinden (Vigna unguiculata) afinite tekniği kullanılarak peroksidaz enziminin saflaştırılması ve karakterizasyonu
Purification of peroxidase enzyme from cowpea (Vigna unguiculata) using affinity technique and, characterization study
- Tez No: 702150
- Danışmanlar: DR. ÖĞR. ÜYESİ AYKUT ÖZTEKİN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2021
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Ağrı İbrahim Çeçen Üniversitesi
- Enstitü: Lisansüstü Eğitim Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 82
Özet
Bu tez kapsamında amino benzohidrazid türevi moleküller tabanlı afinite kromatografisi tekniği kullanılarak börülce (Vigna unguiculata) peroksidaz enziminin ilk defa tek kademede saflaştırılması gerçekleştirildi ve enzimin biyokimyasal karakterizasyonu yapıldı. Sefaroz 4B-L-tirozin-4-amino-3-bromo-2-metilbenzohidrazid afinite jelinin kullanıldığı tek kromatografik adımda, %53,6 verime ve 91,6 kat saflaştırma katsayısına ulaşıldı. Elde edilen enzimin saflığını ve molekül ağırlığını belirlemek için yapılan SDS-PAGE'de 39 kDa'da tek bant gözlendi. Saflaştırmada ligand olarak kullanılan 4-amino-3-bromo-2-metilbenzohidrazid, 4-amino-3-bromo-5-florobenzohidrazid, 4-amino-3-bromo-5-klorobenzohidrazid ve 5-aminoizoftalohidrazid'in enzim ile etkileşimlerini analiz etmek için, her bir molekülün börülce POD üzerine inhibisyon etkisi incelendi ve saflaştırmada en etkili ligand olan 4-amino-3-bromo-2-metilbenzohidrazid için Ki değeri 970±130 µM olarak hesaplandı. Enzimin karakterizasyon çalışmaları kapsamında, enzim için optimum şartların; pH 6,0, iyonik şiddet 0,3 M ve 40 ºC olduğu bulundu. Ayrıca börülce POD'nin guaiakol, H2O2, 4-metilkatekol ve ABTS substratlarına olan ilgisini belirlemek amacıyla kinetik çalışmalar yapıldı ve bu substratlara ait KM değerleri sırasıyla 7,21 mM, 17,03 mM, 7,28 mM ve 49,21 mM olarak hesaplandı.
Özet (Çeviri)
In this thesis, a single step purification of cowpea (Vigna unguiculata) peroxidase enzyme was carried out for the first time by using amino benzohydrazide derivative molecules-based affinity chromatography technique and biochemical characterization of the purified enzyme was performed. 53,6% yield and 91,6 purification fold were achieved in a single chromatographic step using Sefaroz 4B-L-tyrosine-4-amino-3-bromo-2-methylbenzohydrazide affinity gel. A single band at 39 kDa was observed in SDS-PAGE performed to determine the purity and molecular weight of the obtained enzyme. To analyze the interactions of 4-amino-3-bromo-2-methylbenzohydrazide, 4-amino-3-bromo-5-fluorobenzohydrazide, 4-amino-3-bromo-5-chlorobenzohydrazide and 5-aminoisophthalohydrazide used as ligands in purification with the enzyme, the inhibition effect of each molecule on cowpea POD was assayedand the Ki value for 4-amino-3-bromo-2-methylbenzohydrazide, the most effective ligand in purification, was calculated as 970±130 µM. Within the scope of enzyme characterization studies, optimum conditions for enzyme; It was found that the pH was 6,0, the ionic strength was 0,3 M and the temperature was 40 ºC. Additionally, kinetic studies were carried out to determine the affinity of cowpea POD with guaiacol, H2O2, 4-methylcatechol and ABTS substrates, and the KM values of these substrates were calculated as 7,21 mM, 17,03 mM, 7.28 mM and 49,21 mM, respectively.
Benzer Tezler
- Börülce (Vigna unguiculata L.) bitkisinde fosfor ve bor uygulamalarının verim ve verim ögeleri üzerine etkisi
The effect of phosphorus and boron applications on yield and yield components in börülce (Vigna unguiculata L.) plant
YUNUS ELMAS
- Tatlı darı (Sorghum bicolor (L.) Moench var. Saccharatum) ve börülce (Vigna ungiuculata (L.) Walp.) karışımlarının silaj amacıyla kullanım olanakları üzerine bir araştırma
An investigation on usage possibilities of sweet sorghum (Sorghum bicolor (L.) Moench var. Saccharatum) and black eyed-pea (Vigna unguiculata (L.) Walp.) mixture for silage
ECE GÜRE
- Kahramanmaraş koşullarında börülce (Vigna unguiculata (L.) walp) bitkisine uygulanan farklı sıra arası ve sıra üzeri mesafelerinin verim unsurlarına etkisi
The effect of different interrow and intrarow distances implementation on yield components of cowpea (Vigna unguiculata (L.) walp) plant in Kahramanmaraş conditions
TAHSİN BEYCİOĞLU
Yüksek Lisans
Türkçe
2016
ZiraatKahramanmaraş Sütçü İmam ÜniversitesiTarla Bitkileri Ana Bilim Dalı
PROF. DR. LEYLA İDİKUT
- Bazı börülce (Vigna unguiculata L. Walp) yerel popülasyonlarının ve tescilli çeşitlerinin siirt ekolojik koşullarına adaptasyonunun belirlenmesi
Determing the adaptation of some cowpea (Vigna unguiculata L. Walp) local populations and registered cultivars to the ecological conditions of Siirt
HALİSE ŞEYMA ÖZÇELEBİ
- Magnezyum nanoparçaçıklarının yem börülcesinin (Vigna unguiculata L. Walp ) in vitro rejenerasyonu üzerine etkisinin belirlenmesi
Determination of the effect of magnesium nanoparticle on the in vitro rejeneration of cowpea (Vigna unguiculata L. Walp)
RABİA KOÇAK
Yüksek Lisans
Türkçe
2019
BiyoteknolojiGümüşhane ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. MELİH OKCU