Development of hypoallergenic food product and in-HOUSE elisa to differentiate distinct severity of COW's milk allergy as biscotti, baked, fermented and pasteurized milk reactive and tolerant ones
Hipoalerjenik süt ürünü ve inek sütü alerjisi şiddetini reaktif ve toleranslı bireylerde ayırt etmek için biskoti, pişmiş, fermente ve pastörize süt kullanarak dolaylı in-HOUSE elısa geliştirilmesi
- Tez No: 713137
- Danışmanlar: PROF. DR. CANSIN SAÇKESEN
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Allerji ve İmmünoloji, Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları, Allergy and Immunology, Child Health and Diseases
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2021
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Koç Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Allerjik Hastalıklar Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: İmmünoloji ve Allerji Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: 85
Özet
Besin alerjilerinde tetikleyici ajanlardan kaçınmak hala tedavinin temel dayanağıdır. Ancak eliminasyon diyetine uyum veya kazara alerjen maruziyeti gibi zorluklar, son yıllarda besin alerjisi tedavisinde araştırmaları artırmıştır. Oral immünoterapi (OIT), alerjenin günlük tüketilen doza ulaşılıncaya kadar belirli zaman aralıklarında artan dozlarda uygulanması olarak tanımlanır. Fırınlanmış süt ürünleri ile immünoterapi güvenli görünse de bazı hastalarda anafilaksi oluşabilir. Bu nedenle, fırınlanmış süt ürünü ''kek''ten daha az alerjeniteye sahip hipoalerjenik bir ürün geliştirmek, inek sütü alerjisinin duyarsızlaştırma tedavisinde yeni bir ufuk açabilir. Bu çalışmamızda esas olarak geleneksel kekten daha hipoalerjenik bir ürün yapmak ve çeşitli süt ürünlerine karşı tolerans durumunu belirlemek için dolaylı in-house ELISA testi geliştirmeyi hedefledik. Western blot, dolaylı in-house ELISA ve bazofil aktivasyon testi (BAT) ile süt alerjili hastalarda farklı şiddetlerde süt alerjisini IgE reaktivitesi ile karşılaştırabilmek amaçlandı. İlk olarak kek iki kez pişirilerek“biskoti”adı verilen hipoalerjenik bir ürün adayı geliştirildi. Proteinler, aday ürün (biskoti) kek ve pastörize sütten izole edildi ve toplam protein konsantrasyonu Bradford tahlili ile belirlendi. Tüm ürünler için farklı süt protein içerikleri SDS-PAGE ve proteomiks ile gösterildi. Koç Üniversitesi Hastanesi Çocuk Alerji Bölümüne başvuran süt alerjisi olan hastalardan serum örnekleri alındı. Süt spesifik IgE (sIgE) bağlanma deneyleri Western blot, dolaylı in-house ELISA ile hasta serumları kullanılarak ve BAT hastaların tam kanları kullanılarak yapıldı. Farklı süt proteinleri bant yoğunluğu analizinde, hipoalerjenik ürün adayında kazein bant yoğunluğunun keke göre daha düşük olduğu gözlendi (p=0.014). Proteomiks analizler, tüm süt ürünleri için (biskoti 1 saat, biskoti 2 saat ve biskoti 3 saat, geleneksel kek) pişirme süresi artıkça tüm kazein fraksiyonlarının ve β-laktoglobulinin yoğunluğunun azaldığını ortaya koydu. Normal keke kıyasla yeni geliştirilen hipoalerjenik ürüne (biskoti) karşı süt alerjisi olan çocukların serumlarındaki süt sIgE'lerinin düşük bağlanma kapasitesi, önce western blotlama (p=0.0012) ve ardından dolaylı in-house ELISA (p=0.0001) ile gösterildi. Süt, peynir ve yoğurt ile yapılan dolaylı in-house ELISA deneylerinde, toleranslı hastaların süt, peynir ve yoğurt için OD değerlerinin reaktif olanlara göre düşük olduğu bulundu. Son olarak, BAT için biskoti üst sıvısı uyarıcı alerjen olarak kullanıldı ve sonuçlar bu testin besin yükleme testi testi öncesi ileri deneylerde kullanılabileceğini gösterdi. Bu çalışmada yeni geliştirilen hipoalerjenik ürün“biskoti”nin düşük alerjenitesi in vitro deneylerle kanıtlanmıştır. Hipoalerjenik ürünümüz, şiddetli süt alerjisi olan ve pişmiş süte tepki gösteren hastalarda güvenli ve faydalı bir tedavi seçeneği olabilir. Bu ürünün düşük alerjenitesini in vivo deneylerle (besin yükleme testleri) doğrulamayı ve sonraki adımlarda tolerans indüksiyonundaki etkilerini göstermeyi amaçlıyoruz
Özet (Çeviri)
Avoidance of culprit allergen is still the mainstay of treatment in food allergy. However, the difficulties such as adherence to elimination diet or accidental allergen exposure have increased the research in food allergy treatment in recent years. Oral immunotherapy (OIT) is a treatment model of food allergy, and it is defined as the administration of the allergen in slowly increasing doses at certain time intervals until the daily-consumed dose is reached. Although immunotherapy with baked milk products seems safe, anaphylaxis can occur in some patients. Therefore, developing a hypoallergenic product that has less allergenicity than baked milk would open a new horizon in the desensitization treatment of cow's milk allergy. Here, we mainly aimed to produce a more hypoallergenic product than conventional cake, develop indirect in-house ELISA to check the tolerance status with milk, cheese, and yogurt, to check IgE reactivity of patients' sera via western blotting, indirect in-house ELISA and basophil activation test (BAT). First, a hypoallergenic product candidate was developed by baking the cake twice, which was called“biscotti”. The proteins were isolated from the new hypoallergenic product (biscotti), conventional baked milk (cake) and pasteurized milk and the total protein concentration was determined by Bradford assay. The protein content for each product was studied by SDS-PAGE and proteomics. Serum samples were collected from patients with milk allergy who applied to the Pediatric Allergy Division in Koc University School of Medicine. Milk specific IgE (sIgE) binding assays were performed by Western blotting, indirect in-house ELISA by using patients' sera and BAT by using patients' whole blood. In the band intensity analysis, the casein band intensity was observed lower in the hypoallergenic product candidate than in the conventional cake (p=0.014). Proteomics analysis showed that the intensities of each casein fraction and β-lactoglobulin were decreased as the cooking time increased in all milk products (biscotti 1h, biscotti 2h and biscotti 3h, conventional cake). The low binding capacity of milk sIgE to the newly developed hypoallergenic product compared to the conventional cake in the sera of children with milk allergy was shown first by western blotting (p=0.0012) and then by indirect in-house ELISA (p=0.0001). Biscotti supernatant was used as a stimulating allergen in BAT and the results indicated that it could be used for further experiment before oral food challenge test. In this study, the low allergenicity of the newly developed hypoallergenic product“biscotti”has been demonstrated by in vitro experiments. Our hypoallergenic product could be a safe and useful treatment option in patients with severe milk allergy who are reactive to baked milk. We aim to confirm the low allergenicity of this product by in vivo experiments (oral food challenge tests) and show the effects in tolerance induction in the further steps.
Benzer Tezler
- The transformation of higher education by means of techno-parks: Case of Turkey
Yüksek öğretimin dönüşümü: Teknoparklar-Türkiye örneği
GAMZE SART
Doktora
İngilizce
2013
Eğitim ve ÖğretimBoğaziçi ÜniversitesiEğitim Bilimleri Ana Bilim Dalı
PROF. DR. FATMA GÖK
- Prenatal dönemde farklı dozlarda uygulanan diklofenak sodyumun merkezi sinir sistemi gelişimi üzerine toksik etkisinin araştırılması
The toxic effects of different doses of diclofenac sodium on the development of the central nervous system exposed during prenatal period
EBRU ELİBOL
Doktora
Türkçe
2014
Histoloji ve EmbriyolojiOndokuz Mayıs ÜniversitesiAnatomi Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SÜLEYMAN KAPLAN
- Terkos havzasında tuzlu su girişimlerinin geçici elektromanyetik ve doğru akım özdirenç yöntemleriyle araştırılması
Investigation of saltwater intrusion in terkos basin using transient electromagnetic and direct current resistivity methods
AYÇA SULTAN ARDALI
Doktora
Türkçe
2014
Jeofizik Mühendisliğiİstanbul ÜniversitesiJeofizik Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. AYSAN GÜRER
- Arcti̇i̇n maddesi̇ni̇n deneysel peri̇odonti̇ti̇s modeli̇ üzeri̇ndeki̇ anti̇enflamatuvar etki̇nli̇ği̇ni̇n i̇ncelenmesi̇
Evaluation of anti inflammatory effect of arctiin on experimental periodontitis model
AHMET AYDOĞDU
Doktora
Türkçe
2014
Diş HekimliğiOndokuz Mayıs ÜniversitesiPeriodontoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ELİF ESER SAKALLIOĞLU
- Türk evlerinde yapı malzemeleri ve yapım teknikleri
Construction materials and techniques in Turkish houses
MURAT EYÜP COŞKUN