Entomopatojen funguslara ait hidrofobin genlerinin araştırılması, hidrofobin-infektivite ilişkisinin belirlenmesi ve in vitro sistemde ifadesi
Investigation of hydrophobin genes of entomopathogenic fungi, determination of hydrophobin-infectivity relationship and expression in the in vitro system
- Tez No: 729880
- Danışmanlar: PROF. DR. ZİHNİ DEMİRBAĞ
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Gen ifadesi, Hidrofobik özellik, Mantarlar, Pichia pastoris, Gene expression, Hydrophobic property, Fungi, Pichia pastoris
- Yıl: 2022
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Karadeniz Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Hidrofobinler, moleküler kütlesi yaklaşık 10 kDa olan filamentli funguslarda üretilen sistein açısından zengin, amfipatik proteinlerdir. Bu özelliklerinden dolayı yüzey kaplamaları, biyosensörler, rekombinant proteinlerin saflaştırılması ve kendi kendini temizleyen yüzeyler gibi birçok endüstriyel uygulamada önemli rol oynarlar. Bu tezde, entomopatojenik funguslarda (EPF) bulunan hidrofobin genlerinin belirlenmesi, hidrofobin özellikleri ile insektisidal özelliklerin karşılaştırılması ve seçilen hidrofobin geninin Pichia pastoris maya sisteminde ifade edilerek endüstriyel kullanıma hazırlanması amaçlanmıştır. Bu amaçla Karadeniz Teknik Üniversitesi fungus koleksiyonundan elde edilen 20 adet entomopatojenik fungus izolatında hidrofobin geninin varlığı araştırılmış ve bu izolatların 14'ünde hidrofobin geni (hyd) tespit edilmiştir. hyd taşıyan tüm izolatların sınıf I hidrofobin grubuna ait oldukları belirlenmiştir. Hidrofobin geni ihtiva eden entomopatojenik funguslar değerlendirildiğinde, insektisidal aktivite, morfolojik özellikler, hızlı büyüme, konak spektrumu, konak yüzeylerindeki adhezyon derecesi ve yüksek mortaliteye sahip olma özellikleri göz önünde bulundurulduğunda Beauveria bassiana KTU-57 izolatına ait hidrofobin geninin P. pastoris maya sisteminde ifade edilmesine karar verildi. Bu doğrultuda fungal genomdan ribozomal RNA elde edilerek revers transkriptaz enzimi ile cDNA'sı oluşturuldu. RT-PCR (Reverse Transcriptase-Ters Transkriptaz) ile elde edilen hidrofobin geni, pPICZC vektörüne klonlandı ve rekombinant maya vektörünün (pPICZC+hyd) P. pastoris X-33 gen ifade konağında ifadesi sağlandı. Önemli miktarda protein ifadesi gerçekleştirilmiş olmakla birlikte hidrofobin proteinin endüstriyel amaçlı kullanılması için üretim kapasitesinin arttırılmasına yönelik optimizasyon çalışmaları devam etmektedir.
Özet (Çeviri)
Hydrophobins are cysteine-rich, amphipathic proteins produced in filamentous fungi with a molecular mass of about 10 kDa. Because of these properties, they play an important role in many industrial applications such as surface coatings, biosensors, purification of recombinant proteins and self-cleaning surfaces. In this thesis, it was aimed to determine the hydrophobin genes found in entomopathogenic fungi (EPF), to compare the hydrophobin properties and insecticidal properties, and to prepare the selected hydrophobin gene for industrial use by expressing it in Pichia pastoris yeast system. For this purpose, the presence of hydrophobin gene was investigated in 20 entomopathogenic fungus isolates obtained from the fungus collection of Karadeniz Technical University, and the hydrophobin gene (hyd) was detected in 14 of these isolates. It was determined that all isolates carrying the hydrophobin gene belong to the class I hydrophobin group. When the entomopathogenic fungi containing the hydrophobin gene were evaluated, considering the insecticidal activity, morphological features, rapid growth, host spectrum, degree of adhesion on the host surfaces and high mortality, it was decided to express the hydrophobin gene of Beauveria bassiana KTU-57 in the P. pastoris yeast system. In this direction, ribosomal RNA was obtained from the fungal genome and its cDNA was created with the reverse transcriptase enzyme. The hydrobin gene obtained by RT-PCR (Reverse Transcriptase-Reverse Transcriptase) was cloned into the pPICZC vector and expression of the recombinant yeast vector (pPICZC+hyd) in the P. pastoris X-33 gene expression host was achieved. Although a significant amount of protein expression has been achieved, optimization studies are continuing to increase the production capacity for the industrial use of hydrophobin protein.
Benzer Tezler
- Böcek patojeni entomophthora virulenta üzerinde kültürel bir çalışma
Başlık çevirisi yok
ÖZNUR ÖZKÜTÜK
Yüksek Lisans
Türkçe
1984
ZoolojiEge ÜniversitesiTemel ve Endüstriyel Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MEHMET ÖNER
- Protoplast füzyonu yolu ile bacillus thuringiensis suşlarının özelliklerinin geliştirilmesi üzerinde araştırmalar
Studies on the development of the characteristics of bacillus thuringiensis strains by protoplast fusion
GÖNÜL DÖNMEZ(ÇETİNKAYA)
Doktora
Türkçe
1990
Gıda MühendisliğiAnkara ÜniversitesiGıda Bilimi ve Teknolojisi Ana Bilim Dalı
PROF.DR. M. LÜTFÜ ÇAKMAKÇI
- İzmir ili ve çevresinde cruciferae familyasına bağlı bitkilerde zarar yapan pieridae (Lepidoptera) türleri, önemleri, bunlardan lahana kelebeği Spieris brassicae (L.)Ö'nin biyolojisi ve populasyon dalgalanmalarına ...
Investigations on the species and their importance of pieridae (Lepidoptera) which harmful on crucifers at İzmir with the biology and factors affecting the population trends of large white butterfly Spieris brassical ...
PERVİN HINCAL
- Ankara'nın bazı bölgelerindeki yeraltı sularında enterik bakterilerin aranması
Başlık çevirisi yok
ABBAS YOUSEFİ RAD
- İzmir ve çevresindeki sürgün olgularında enteropatojen escherichia coli ve enterohemorajik E. coli kökenlerinin araştırılması
Başlık çevirisi yok
M.SELDA ERENSOY