APC mutant fare intestinal organoidlerinde WNT yolak modülasyonunun kök hücreler üzerine etkilerinin araştırılması
Investigation of WNT signaling modulation on intestinal stem cell dynamics in APC mutant intestinal organoids
- Tez No: 752291
- Danışmanlar: PROF. DR. AYTEKİN AKYOL
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Genetik, Genetics
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2022
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kök Hücre Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 72
Özet
Kolorektal kanser (KRK) gelişiminin en önemli nedenlerinden bir tanesi WNT sinyal yolağında rol alan genlerin mutasyonlarıdır. Vakaların büyük çoğunluğunda WNT sinyal yolağı yıkım kompleksinde negatif düzenleyici olarak görev almakta olan APC tümör baskılayıcı gen mutasyonlarına rastlanmaktadır. Çok hızlı bir çoğalma ve yenilenme sürecine sahip olan intestinal epitel hücrelerde WNT sinyal yolağı yüksek aktivite göstererek intestinal kök hücrelerin ve doku homeostazının düzenlenmesinde aktif görev almaktadır. APC genine ait mutasyonların çoğunluğu yıkım kompleksinin bir diğer elemanı olan AXIN bağlanma bölgesinde gerçekleşmektedir. Yıkım kompleksi elemanlarında oluşan çeşitli mutasyonlar nedeniyle görevini tam olarak yerine getirememektedir. Β-catenin proteini yıkım kompleksi tarafından sitoplazmik bölgede proteozomal degradasyona uğrayamadığında çekirdeğe translokasyonu gerçekleşmekte ve böylece TCF/LEF transkripsiyon faktörünün düzenlenmesinde görev aldığı WNT hedef genlerinin transkripsiyonel aktivitesini arttırmaktadır. Bu tez çalışması kapsamında laboratuvarıma özgü mutant ApcΔ750 fare ince bağırsak dokularından üretilen olan intestinal organoidlerde WNT ilişkili genlerden Ctnnb1, Axin2 ve Lgr5 RNA düzeyinde incelenmiştir. Analizlerin sonucunda bu genlerin ifadelerinin ApcΔ750 intestinal organoidlerde yüksek olduğu ispatlanmıştır. Tez çalışmasının birincil amacı olarak, anti-kanser etkisi olduğu bilinen XAV939 ve Niklozamit ilaçlarının ApcΔ750 organoidlere uygulandığında Ctnnb1, Axin2 ve Lgr5 gen ifadelerinin RNA düzeyinde azaldığı gösterilmiştir. Ayrıca immünfloresan boyama tekniği uygulanarak kript ve villus domeynlerindeki Ctnnb1 protein seviyesi incelenmiştir. Böylece XAV939 ve Niklozamitin KRK oluşumu öncülü organoidlerdeki Wnt sinyal yolağını inhibe ettiği ve bununla ilişkili olarak İKH aktivasyonunu baskıladığı gözlenmiştir. Çalışmanın ikincil bir amacı ise laboratuvarımızda üretilen ApcΔ750 fare modelinin in vitro çalışmalarda da başarı sağladığını gösterebilmektir.
Özet (Çeviri)
One of the most important causes of colorectal cancer development is mutations of genes involved in the WNT signaling pathway. In the vast majority of cases, APC tumor suppressor gene mutations, which act as negative regulators of the WNT signaling pathway degradation complex, are encountered. In intestinal epithelial cells, which have a very rapid proliferation and regeneration process, the WNT signaling pathway shows high activity and takes an active role in the regulation of intestinal stem cells and tissue homeostasis. Most of the mutations of the APC gene occur at the AXIN binding site, which is another element of the degradation complex. Due to various mutations in the components of the destruction complex, it cannot fully function its task. When the β-catenin protein cannot be proteosomally degraded in the cytoplasmic region by the degradation complex, it translocates to the nucleus and thus increases the transcriptional activity of WNT target genes, which are involved in the regulation of the TCF/LEF transcription factor. In this thesis study, intestinal organoids produced from mutant ApcΔ750 mouse small intestine tissues specific to our laboratory were investigated at the RNA level of WNT-related genes Ctnnb1, Axin2 and Lgr5. As a result of the analysis, it was proved that the expression of these genes is high in ApcΔ750 intestinal organoids. As the primary aim of the thesis study, it has been shown that Ctnnb1, Axin2 and Lgr5 gene expressions are decreased at the RNA level when XAV939 and Niclosamide drugs, which are known to have anti-cancer effects, are applied to ApcΔ750 organoids. In addition, the level of Ctnnb1 protein in the crypt and villus domains was examined by applying the immunofluorescent staining technique. Thus, it was observed that XAV939 and niclosamide inhibited the Wnt signaling pathway in organoids that are precursors of CRC formation, and thus suppressed ICH activation. A secondary aim of the study is to show that the ApcΔ750 mouse model produced in our laboratory is also successful in in vitro studies.
Benzer Tezler
- APC mutant fare modelinde azaltılmış BDNF ekspresyonunun intestinal tümör gelişimi üzerine etkilerinin araştırılması
Effect of reduced BDNF expression on intestinal tumorigenesis in APC mutant mouse model
AYŞENUR GÖK
- AOC3'ün inflamatuar ve neoplastik kolon hastalıklarındaki rolünün araştırılması
Investigation of the role of AOC3 in inflammatory and neoplastic colon diseases
ÖZGE ÖZCAN
- Kolon adenokarsinomu ve prekanseröz lezyonlarında STIP1, beta-katenin ve siklin D1 ekspresyonunun değerlendirilmesi
Evaluation of stip1, beta-catenin and cyclin D1 expression in colon adenocarcinoma and precancerous lesions
EMİNE SÜMEYYE ATALAY
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2021
PatolojiKırıkkale ÜniversitesiTıbbi Patoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. TUBA DEVRİM
- Çocukluk çağı tromboz olgularında faktör V 1691 G-A değişiminin tromboz oluşumuna yaş değişiminin etkisinin araştırılması
The corelation between FVL 1691 G?A mutation and age alterations in pediatric thrombosis
ESİN GÜNGÖR
Yüksek Lisans
Türkçe
2009
Moleküler TıpAnkara ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. M. NEJAT AKAR
- Behçet hastalarında aktive protein c direnci ve tromboflebit ile ilişkisi
Activated protein c resistance in Behcet's disease and correlation with thrombophlebitis
NAZLI DİZEN NAMDAR
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2009
DermatolojiSağlık BakanlığıDermatoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. MUKADDES KAVALA