Geri Dön

Molecular cloning and characterization of bile salt hydrolase from Lactobacillus fermentum

Lactobacıllus fermentum'dan safra tuzu hidrolazının moleküler klonlanması ve karakterizasyonu

PDF İndir

  1. Tez No: 765298
  2. Yazar: HALKAWT ALI OTHMAN OTHMAN
  3. Danışmanlar: PROF. DR. MEHMET ÖZTÜRK
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoloji, Biology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2022
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Bolu Abant İzzet Baysal Üniversitesi
  10. Enstitü: Lisansüstü Eğitim Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 96

Özet

Gastrointestinal mikrobiyota insan fizyolojisinde önemlidir ve konağın beslenme, fizyolojik ve immünolojik işlevlerinden sorumludur. İnsan bağırsağında, çoğunlukla bağırsak bakterileri tarafından üretilen safra tuzu hidrolazı (BSH), taurin veya glisine bağlı safra asidinin aminoasit ve dekonjuge safra asidine hidrolizini katalize eder. Dekonjuge safra asitleri, kan kolesterol seviyelerini sınırlamada ve safra taşı oluşumu, kolestaz ve kolon kanseri gibi bazı gastrointestinal hastalıkların gelişiminde önemli bir rol oynayabilir. Bununla birlikte, LAB, bugün piyasada diyet gıdaların fermentatifi için gerekli olan bir mikroorganizma grubudur. Hem BSH hem de insan sağlığı ile korelasyonu nedeniyle, BSH'lerin yapısal ve biyokimyasal özellikleri, bakteri ve konak metabolizmasının düzenlenmesindeki rollerini anlamak için önemli araştırmalar gerektirir. BSH'lerin katalitik aktiviteleri ve substrat spesifiklikleri daha fazla değişiklik gösterir. katalitik aktiviteden sorumlu olduğu düşünülen bazı aminoasitler, BSH ailesinin tüm üyelerinde tamamen korunmuştur. Sonuç olarak, bu tedavilerde ve fermantasyonda kullanılan probiyotiklerin BSH enzimlerinin etki mekanizmasını bilmek ve anlamak hayati önem taşımaktadır. Lactobacillus fermentum muhtemelen bugün piyasadaki en faydalı probiyotik türlerden biri olmasına rağmen, bu mikroorganizmanın BSH enziminin etki mekanizması ve substrat tercihleri hakkında çok az şey bilinmektedir. Bu çalışmada, L. fermentum'den 326 aminoasidi kodlayan bsh geni Escherichia coli BLR(DE3) suşuna klonlanmış eksprese edilmiş ve karakterize edilmiştir. E. coli BLR(DE3)-pET22b ekspresyon sistemi, rekombinant BSH üretmek için kullanılmıştır. L. fermentum'un rekombinant STH aktivitesi, iki farklı safra tuzu, glideoksukokolik asit ve taurodeoksikolik asit ile Doğrudan Plaka Testi kullanılarak kalitatif olarak belirlenememiştir. Buna ek olarak 37 kDa BSH proteini SDS-PAGE analizinde de görülmemiştir. Çoklu dizi hizalaması, L fermentum'un BSH enziminin bsh geninde bir mutasyona (bir kodon silinmesi) sahip olduğunu ortaya çıkardı. Bu mutasyon, L. fermentum'un BSH enziminin stabilitesini etkileyebilir. Bu bağlamda, Bu mutasyon, L. fermentum BSH enziminin stabilitesini etkileyebilir. Bu bağlamda, L. fermentumu potansiyel bir probiyotik adayı olamaz çünkü probiyotik adaylarının BSH aktivitesine sahip olmaları probiyotiklerin seçimindeki kriterlerden biridir.

Özet (Çeviri)

The gastrointestinal normal flora plays a vital role in human physiology, as it controls the host's nutritious, physiological, and immunological activities. In the human intestine, bile salt hydrolase (BSH), produced mainly by intestinal bacteria, catalyzes the hydrolysis of taurine or bile acid bound to glycine binding to amino acid and deconjugated bile acid. Deconjugated bile acids play an important role in the developing certain gastrointestinal diseases, such as gallstone formation, cholestasis, and colon cancer as well as blood cholesterol levels. However, the LAB are a group of microorganisms that mainly essensial for fermentative of dietary food in the market today. Because of the correlation with both BSH and human health, the structural and biochemical properties of BSHs require considerable research in order to understand their role in the regulation bacterial and host metabolism. The catalytic activities and substrate specificities of BSHs vary more. Some amino acids reported to be responsible for catalytic activity were also entirely kept intact across all BSH members of the same family. As an outcome, knowing and ability to understand the mechanism of action of the BSH enzymes of the probiotic microorganisms used in those treatments and fermentation is very vital. Despite the fact that Lactobacillus fermentum is likely one of the most beneficial probiotic bacteria strain on the market in the world today, little information is known about the mechanism of action and substrate preferences of this microorganism's BSH enzyme. In this study, the bsh gene encoding 326-amino acids from L. fermentum strain was cloned, expressed and characterized in Escherichia coli BLR(DE3) strain. An E. coli BLR(DE3)-pET22b expression system was used to produce rcombinant BSH. The recombinant BSH activity of L. fermentum was not determined qualitatively using the Direct Plate Assay with two different bile salts, glydeoxucocholic acid and taurodeoxycholic acid. In addition to this, 37 kDa BSH protein was not visible on SDS-PAGE analysis. Multiple sequence alignment revealed that BSH enzyme of L. fermentum had a one mutation (one codon deletion) on bsh gene. This mutation can affect the stability of BSH enzyme of L. fermentum. In this respect, L. fermentum cannot be a potential probiotic candidate since the capability of BSH activity is one of the criteria for the selection of the probiotics.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    409074

    Molecular cloning and characterization of bile salt hydrolase genes (BSH) from Lactobacillus plantarum GD2

    Lactobacillus plantarum GD2'den safra tuzu hidrolaz genlerinin (BSH) moleküler klonlanması ve karakterizasyonu

    YASİN AYDIN

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2015

    BiyolojiAbant İzzet Baysal Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. MEHMET ÖZTÜRK

  2. Tez No

    409080

    Molecular cloning, expression and characterization of bile salt hydrolase enzymes from Lactobacillus rhamnosus KPB7 and E9

    Lactobacillus rhamnosus KPB7 ve E9 suşlarından safra tuzu hidrolaz enzimlerinin moleküler klonlanması, ekspresyonu ve karakterizasyonu

    YEŞİM KAYA

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2015

    BiyoteknolojiAbant İzzet Baysal Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. MEHMET ÖZTÜRK

  3. Tez No

    456363

    Molecular cloning, characterization and comparison of bile salt hydrolase enzyme from Lactobacillus gasseri

    Lactobacillus gasseri safra tuzu hidrolaz emzimlerinin klonlanması, karakterizasyon ve karşılastırması

    NDEYE MAREME BA

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2016

    BiyolojiAbant İzzet Baysal Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. MEHMET ÖZTÜRK

    YRD. DOÇ. DR. YAKUP ERMURAT

  4. Tez No

    534643

    Cloning of bile salt hydrolase gene (BSH) ) from human originated Lactobacillus plantarum and characterization of BSH enzyme by site directed mutagenesis

    İnsan kaynaklı Lactobacillus plantarum kökenli safra tuzu hidrolaz (STH) genının klonlanması ve STH enziminin yönlendirilmiş mutagenez ile karakterizasyonu

    CANSU ÖNAL

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2019

    BiyolojiBolu Abant İzzet Baysal Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. MEHMET ÖZTÜRK

  5. Tez No

    389981

    Pamukkale termal sularından izole edilen Bacillus licheniformis'ten katalaz enziminin klonlanması, ekspresyonu, saflaştırılması ve karakterizasyonu

    Catalase from a local Bacillus licheniformis species isolated from pamukkale hot springs: Cloning, expression, purification and characterization

    MEHMET ÖZKARSLI

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2011

    BiyolojiPamukkale Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ALAATTİN ŞEN

Geri Dön