Molecular cloning and characterization of bile salt hydrolase from Lactobacillus fermentum
Lactobacıllus fermentum'dan safra tuzu hidrolazının moleküler klonlanması ve karakterizasyonu
- Tez No: 765298
- Danışmanlar: PROF. DR. MEHMET ÖZTÜRK
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Klonlama, Laktik asit bakterileri, Polimeraz zincirleme reaksiyonu, Probiyotik bakteriler, Saflaştırma, Safra tuzları, Cloning, Lactic acid bacteria, Polymerase chain reaction, Probiotic bacteria, Purification, Bile salts
- Yıl: 2022
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Bolu Abant İzzet Baysal Üniversitesi
- Enstitü: Lisansüstü Eğitim Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Gastrointestinal mikrobiyota insan fizyolojisinde önemlidir ve konağın beslenme, fizyolojik ve immünolojik işlevlerinden sorumludur. İnsan bağırsağında, çoğunlukla bağırsak bakterileri tarafından üretilen safra tuzu hidrolazı (BSH), taurin veya glisine bağlı safra asidinin aminoasit ve dekonjuge safra asidine hidrolizini katalize eder. Dekonjuge safra asitleri, kan kolesterol seviyelerini sınırlamada ve safra taşı oluşumu, kolestaz ve kolon kanseri gibi bazı gastrointestinal hastalıkların gelişiminde önemli bir rol oynayabilir. Bununla birlikte, LAB, bugün piyasada diyet gıdaların fermentatifi için gerekli olan bir mikroorganizma grubudur. Hem BSH hem de insan sağlığı ile korelasyonu nedeniyle, BSH'lerin yapısal ve biyokimyasal özellikleri, bakteri ve konak metabolizmasının düzenlenmesindeki rollerini anlamak için önemli araştırmalar gerektirir. BSH'lerin katalitik aktiviteleri ve substrat spesifiklikleri daha fazla değişiklik gösterir. katalitik aktiviteden sorumlu olduğu düşünülen bazı aminoasitler, BSH ailesinin tüm üyelerinde tamamen korunmuştur. Sonuç olarak, bu tedavilerde ve fermantasyonda kullanılan probiyotiklerin BSH enzimlerinin etki mekanizmasını bilmek ve anlamak hayati önem taşımaktadır. Lactobacillus fermentum muhtemelen bugün piyasadaki en faydalı probiyotik türlerden biri olmasına rağmen, bu mikroorganizmanın BSH enziminin etki mekanizması ve substrat tercihleri hakkında çok az şey bilinmektedir. Bu çalışmada, L. fermentum'den 326 aminoasidi kodlayan bsh geni Escherichia coli BLR(DE3) suşuna klonlanmış eksprese edilmiş ve karakterize edilmiştir. E. coli BLR(DE3)-pET22b ekspresyon sistemi, rekombinant BSH üretmek için kullanılmıştır. L. fermentum'un rekombinant STH aktivitesi, iki farklı safra tuzu, glideoksukokolik asit ve taurodeoksikolik asit ile Doğrudan Plaka Testi kullanılarak kalitatif olarak belirlenememiştir. Buna ek olarak 37 kDa BSH proteini SDS-PAGE analizinde de görülmemiştir. Çoklu dizi hizalaması, L fermentum'un BSH enziminin bsh geninde bir mutasyona (bir kodon silinmesi) sahip olduğunu ortaya çıkardı. Bu mutasyon, L. fermentum'un BSH enziminin stabilitesini etkileyebilir. Bu bağlamda, Bu mutasyon, L. fermentum BSH enziminin stabilitesini etkileyebilir. Bu bağlamda, L. fermentumu potansiyel bir probiyotik adayı olamaz çünkü probiyotik adaylarının BSH aktivitesine sahip olmaları probiyotiklerin seçimindeki kriterlerden biridir.
Özet (Çeviri)
The gastrointestinal normal flora plays a vital role in human physiology, as it controls the host's nutritious, physiological, and immunological activities. In the human intestine, bile salt hydrolase (BSH), produced mainly by intestinal bacteria, catalyzes the hydrolysis of taurine or bile acid bound to glycine binding to amino acid and deconjugated bile acid. Deconjugated bile acids play an important role in the developing certain gastrointestinal diseases, such as gallstone formation, cholestasis, and colon cancer as well as blood cholesterol levels. However, the LAB are a group of microorganisms that mainly essensial for fermentative of dietary food in the market today. Because of the correlation with both BSH and human health, the structural and biochemical properties of BSHs require considerable research in order to understand their role in the regulation bacterial and host metabolism. The catalytic activities and substrate specificities of BSHs vary more. Some amino acids reported to be responsible for catalytic activity were also entirely kept intact across all BSH members of the same family. As an outcome, knowing and ability to understand the mechanism of action of the BSH enzymes of the probiotic microorganisms used in those treatments and fermentation is very vital. Despite the fact that Lactobacillus fermentum is likely one of the most beneficial probiotic bacteria strain on the market in the world today, little information is known about the mechanism of action and substrate preferences of this microorganism's BSH enzyme. In this study, the bsh gene encoding 326-amino acids from L. fermentum strain was cloned, expressed and characterized in Escherichia coli BLR(DE3) strain. An E. coli BLR(DE3)-pET22b expression system was used to produce rcombinant BSH. The recombinant BSH activity of L. fermentum was not determined qualitatively using the Direct Plate Assay with two different bile salts, glydeoxucocholic acid and taurodeoxycholic acid. In addition to this, 37 kDa BSH protein was not visible on SDS-PAGE analysis. Multiple sequence alignment revealed that BSH enzyme of L. fermentum had a one mutation (one codon deletion) on bsh gene. This mutation can affect the stability of BSH enzyme of L. fermentum. In this respect, L. fermentum cannot be a potential probiotic candidate since the capability of BSH activity is one of the criteria for the selection of the probiotics.
Benzer Tezler
- Nükleer rezonasta moleküler yapıların incelenmesi (yapısal faz geçiş kuramları üzerine bir inceleme)
Başlık çevirisi yok
ABDURRAHMAN ANDİÇ
Yüksek Lisans
Türkçe
1986
Fizik ve Fizik MühendisliğiUludağ ÜniversitesiFizik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. AYTAÇ YALÇINER
- 1,3-difenil-4,5-bis(hidroksiimino)-imidazolidin ve Ni(II), Cu(II), Pd(II), UO2(VI) komplekslerinin sentezi
Başlık çevirisi yok
VEFA AHSEN
Doktora
Türkçe
1984
Kimya MühendisliğiUludağ ÜniversitesiKimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ÖZER BEKAROĞLU
- Purification of bacteriorhodopsin from halobacterium halobium and reconstitution studies in liposomes
Başlık çevirisi yok
M.BAKER ZABUT
Yüksek Lisans
İngilizce
1987
BiyokimyaOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. MERAL YÜCEL
- NH3 için önerilen yeni bir gerçek gaz hal denklemi ve bu hal denklemi ile bazı moleküler-fiziksel özelliklerin saptanması
Başlık çevirisi yok
MERAL HOŞCAN