Geri Dön

Cloning of 32-mer MaSP1 Gene into pBbB6c plasmid vector and transformation to Escherichia coli neb 10-beta

32-mer MaSP1 geninin pBbB6c plazmid vektörüne klonlanmasi ve Escherichia coli neb 10-beta'ya transformasyonu

  1. Tez No: 781071
  2. Yazar: RUVEYDA BENK
  3. Danışmanlar: DR. ÖĞR. ÜYESİ FATİH ORTAKCI, DR. YAHYA ÖZ
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyomühendislik, Bioengineering
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2023
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Abdullah Gül Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyomühendislik Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 58

Özet

Tezimin temel amacı, dragline tipi örümcekten Masp1 örümcek ipek proteini kodlayan geni E.coli NEB 10-beta organizmasına klonlamaktı. Örümcek ipeği proteininin rekombinant mikrobiyal üretimi ve bunun bir elyaf formatına dönüştürülmesi, sonuçta Kevlar, çelik ve karbon elyafına kıyasla düşük yoğunluklu, yüksek tokluğa ve esnekliğe sahip biyoçelik olarak da adlandırılan bir biyomateryal üretecektir. Bu amaçla, dragline örümcek proteinini (MaSP1) kodlayan gen, rekombinant moleküler yöntemler kullanılarak E. coli NEB 10-beta'ya klonlanmıştır. İlk olarak, 8-mer MaSP1 sentezlendi ve pGSI yüksek kopya klonlama vektörü yoluyla, KpnI,Kpn2I kesim enzimleri ile yapışkan uç kesimi ve ardından E.coli'ye ısı şoku dönüşümü yoluyla klonlandı. İkinci olarak, 8-mer'i çıkarmak için 8-mer plazmitinin Nhel ve Kpn2I ile kesimini gerçekleştirdik. Daha sonra, 8-mer Masp1 içeren doğrusallaştırılmış pGSI için SpeI ve Kpn2I ile kesim gerçekleştirildi. pGSI içeren 16-mer Masp1 elde etmek için 8-mer ve 8-mer Masp1 taşıyan pGSI plazmitini birleştirmek için bir ligasyon uygulandı. Yine bu plazmit ısı şoku ile E.coli'ye dönüştürüldü. Aynı kısıtlamanın ardından, pGSI plazmidi içeren 32-mer Masp1 elde edildi. Son olarak, 32-mer Masp1 fragmanı, pGSI klonlama vektöründen kesildi ve pBbB6c düşük kopya ekspresyon plazmitine bağlandı, ardından E.coli'ye elektroporasyon yapıldı. 32-mer Masp1 geninin bant boyutu, bir anlaşma olan 3 kb ile 5 kb arasında hizalandı. 32-mer Masp1 geninin hesaplanan boyutu ile. Gelecekteki çalışmalar, Masp1'in ekspresyonuna ve bu rekombinant proteinin biyoreaktör koşulları altında en son biyoişleme teknikleriyle verimli üretimine odaklanmalıdır.

Özet (Çeviri)

The main purpose of my thesis was to clone Masp1 spider silk protein encoding gene from dragline type spider into E.coli NEB 10-beta organism. The recombinant microbial production of spider silk protein and converting it into a fiber format would ultimately produce a biomaterial also called as biosteel with high toughness and elasticity whereas low density compared to Kevlar, steel and carbon fiber. For this purpose, the gene encoding the dragline spider protein (MaSP1) was cloned into E. coli NEB 10-beta using recombinant molecular methods. First, 8-mer MaSP1 was synthesized and cloned via pGSI high copy cloning vector by sticky end cutting with restriction enzymes of KpnI,Kpn2I followed by heat-shock transformation into E.coli. Second, we performed restriction of the 8-mer plasmid by NheI and Kpn2I to extract the 8-mer. Later, the restriction was performed by SpeI and Kpn2I to obtain linearized pGSI containing 8-mer Masp1. A ligation was applied to merge 8-mer and pGSI plasmid carrying 8-mer Masp1 to achieve 16-mer Masp1 containing pGSI. Again, this plasmid was heat-shock transformed into E.coli. Following the same restriction 32-mer Masp1 containing pGSI plasmid was achieved. Finally, 32-mer Masp1 fragment was cut from pGSI cloning vector and ligated to pBbB6c low copy expression plasmid followed by electroporation into E.coli. The band size of 32-mer Masp1 gene was aligned between 3 kb and 5 kb which is an agreement with the calculated size of 32-mer Masp1 gene. Future studies should focus on the expression of Masp1 and the efficient production of this valuable recombinant protein under bioreactor conditions with cutting edge bioprocessing techniques.

Benzer Tezler

  1. Fare Lizozim ve İnterlökin-2 Genlerinin Klonlanması ve Malign Melanomada Anti-tümöral DNA Aşısı Olarak Kullanılması

    Cloning of mouse lysozyme and interleukin-2 genes and using as anti-tumoral dna vaccine in malign melanoma

    ALİ İRFAN GÜZEL

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2006

    Tıbbi BiyolojiÇukurova Üniversitesi

    Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF.DR. HALİL KASAP

  2. Yüksek bor toleransı gösteren bacıllus ve staphylococcus cinsine ait bazı izolatların genomlarının fragmentize edilerek kısmi klonlanması ve bor direnci ile ilgili genlerin araştırılması

    Fragmentizaton and partial cloning of genomes of highly boron tolerant bacillus and staphylococcus isolates and investigation of boron tolerance genes

    MERVE SEZER

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2013

    BiyolojiMuğla Sıtkı Koçman Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. BEKİR ÇÖL

  3. Recombinant production of a glycosidase by using an in-vivo cloning system and its immobilization via different strategies

    Hücre içi klonlama sistemi kullanarak rekombinant glikosidaz üretimi ve immobilizasyonu

    BURCU PEKDEMİR

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2020

    BiyokimyaÇanakkale Onsekiz Mart Üniversitesi

    Biyomoleküler Bilimler Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. SERCAN KARAV

  4. Bitki genlerinin Schizosaccharomyces pombe'de anlatımı

    Expression of plant genes in Schizosaccharomyces pombe

    BEDİA GEMİCİ PALABIYIK

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2004

    Biyolojiİstanbul Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. GÜLER TEMİZKAN

  5. Plazmid aracılı kinolon direnci(QNRS1 ve ACC (6')-IB-CR) ve enrofloksasin ile eliminasyonu

    Plazmid-mediated quinolone resistance(qnrs1 and AAC (6')-IB-CR)and its elimination with enrofloxacin

    ERDEM ARSLAN

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2017

    Eczacılık ve FarmakolojiUludağ Üniversitesi

    Farmakoloji ve Toksikoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. MURAT CENGİZ