Geri Dön

Reseptörle etkileşen serin treonin kinaz 4 (RIPK4)'ü sürekli eksprese eden HaCaT hücre hattı oluşturulması

Generation of HaCaT cell line that continually express the receptor interacting serine-threonine kinase (RİPK4)

PDF İndir

  1. Tez No: 784613
  2. Yazar: EDA GÜNEŞ
  3. Danışmanlar: DOÇ. DR. TUBA DİNÇER
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Tıbbi Biyoloji, Medical Biology
  6. Anahtar Kelimeler: Epidermal farklılaşma, Flp-In sistemi, HaCaT, Kalıcı Transfeksiyon, RIPK4
  7. Yıl: 2022
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Karadeniz Teknik Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 111

Özet

Deride koruyucu bariyer rolünü üstlenen epidermis çok katmanlı bir yapıdır. En alt katmanda bulunan bazal tabakadaki kök hücreler dermisten gelen komutla asimetrik bölünerek bazal tabakadan uzaklaşmaya başlar ve farklılaşarak subrabazal katmanları oluşturur. Epidermal farklılaşma olarak adlandırılan bu süreç çok hassas bir şekilde düzenlenirken süreç esnasında oluşabilecek bazı aksaklıklar konjenital anomalilere neden olabilmektedir. Reseptörle Etkileşen Serin Treonin Kinaz 4 (RIPK4), epidermal farklılaşmayı düzenleyen öncül proteinler arasındadır. Fonksiyonu ile ilişkili olarak patolojik RIPK4 varyasyonları konjenital ektoderm gelişim bozuklukları olan BartsocasPapas, Popliteal Pytergium, AEC-Like ve CHAND sendromları ile ilişkilendirilmiştir. Keratinosit hücre hatlarının kullanıldığı laboratuvar koşullarında epidermal farklılaşma süreci iki ila üç hafta arasındadır. Laboratuvar analizleriyle epidermal farklılaşmanın araştırıldığı çalışmalarda normal insan keratinositlerine (NHK) alternatif olarak büyüme koşulları daha kolay olan ölümsüz HaCaT insan keratinosit hücre hattı kullanılmaktadır. HaCaT hücrelerine çalışılmak istenen geni transfekte etmek oldukça zordur. Ayrıca, transfekte edilen HaCaT hücrelerinde istenilen genin ekspresyonu ancak birkaç gün sağlanabilir. Yaklaşık 14 gün süren epidermal farklılaşmanın araştırıldığı çalışmalarda ise incelenecek genin hücrelerde sürekli ekspresyonunun sağlanması gerekmektedir. Bu tez çalışması ile amaçlanan uzun süreli analizlerde kullanılmak üzere araştırılacak genin sürekli ekspresyonuna olanak veren transgenik HaCaT hücrelerini oluşturmak ve bu hücrelerde RIPK4'ün sürekli ekspresyonunu sağlamaktır. Bu amaç doğrultusunda ilk olarak Flp-InTM Sistemi kullanılarak istenilen genin HaCaT genomuna entegrasyonuna olanak veren FRT kaseti hücrelerin genomuna entegre edildi. FRT kasetinin genomda transkripsiyonel olarak aktif bölgeye tek kopya olarak yerleştiği ve hücrenin yaşamsal fonksiyonlarına etkilemediği doğrulandı. Sonrasında RIPK4 geni HaCaT genomuna yerleşmiş FRT kasetine entegre edilerek RIPK4'ü sürekli eksprese eden HaCaT hücreleri oluşturuldu. Oluşturulan bu hücreler ile epidermal farklılaşma süreci gibi uzun süreli hücresel süreçlerin çalışılacağı deneylerin tasarlanması mümkün olacaktır.

Özet (Çeviri)

The multilayered epidermis acts as a protective barrier of the skin. Upon dermis originated differentiation signal, basal layer localized stem cells start to divide asymmetrically and the daughter cells that move apart from stem cells enters differentiation process to form epidermal suprabasal layers. This process, known as epidermal differentiation, is regulated very precisely and failures can cause congenital anomalies. Receptor Interacting Serine Threonine Kinase 4 (RIPK4) is one of the leading proteins that regulate epidermal differentiation. Regarding its function, RIPK4 variations have been associated with congenital ectodermal development defects such as Bartsocas-Papas, Popliteal pytergium, AEC-Like and CHAND syndromes. In laboratory conditions in which keratinocyte cell lines are used, the epidermal differentiation process is between two and three weeks. In studies investigating epidermal differentiation by laboratory analysis, HaCaT cells, which can grow in simple conditions and easy to handle, are generally used instead of normal human keratinocytes (NHC). However, the transfection efficiency of the gene of interest to HaCaT cells is very low. In addition, in these transfected cells the expression of the gene of interest can last only couple days. However, in epidermal differentiation-based studies the expression of the gene of interest should last for at least 14 days. Therefore, the aim of this thesis is to establish transgenic HaCaT cells that allow stable integration of gene of interest into their genome and to over express RIPK4 continuously by using these established HaCaT cells. Within this scope firstly FRT cassette, which allows the integration of gene of interest into the HaCaT cells genome, was integrated to the genome of HaCaT cells genome by using Flp-InTM system. The integration of single copy FRT cassette to the transcriptionally active site of the genome without disturbing the vital cellular functions was confirmed. After that, RIPK4 was integrated to the HaCaT cell genome through FRT cassette to provide continuous expression of RIPK4. With these transgenic cells, it will be possible to design long-term experiments such as epidermal differentiation. Keyword: Epidermal differentiation, Flp-In system, HaCaT, Stable transfection, RIPK4

Benzer Tezler

  1. Tez No

    650721

    Reseptörle etkileşen serin treonin kinaz 4 (RIPK4) ve pleimorfik adenomagen benzeri 2 (PLAGL2) proteinlerinin etkileşimlerinin araştırılması

    Investigation of receptor-interacting serine-threonine kinase 4 (RIPK4) andpleimorphic adenoma gene-like 2 (PLAGL2) proteins interaction

    ASİYE BÜŞRA BOZ ER

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2016

    Tıbbi BiyolojiKaradeniz Teknik Üniversitesi

    Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ TUBA DİNÇER

  2. Tez No

    541984

    Keratinosit farklılaşmasında rol alan reseptörle etkileşen serin treonin kinaz 4 (RIPK4) ve keratin 14 (KRT14) proteinleri arasındaki etkileşimin araştırılması

    Investigation of interactions between receptor interacting serine/threonine protein kinase 4 (RİPK4) and keratin 14 (KRT14) proteins that have a role in keratinocyte differentiation

    CEREN SÜMER

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2018

    Tıbbi BiyolojiKaradeniz Teknik Üniversitesi

    Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ TUBA DİNÇER

  3. Tez No

    785520

    Lipopolisakkartit ile farelerde oluşturulan enflamatuvar hiperaljezinin RİPK1/RİPK3/MLKL nekrozomunun katkısının araştırılması

    Investigation of the contribution of RİPK1/RİPK3/MLKL necrosome to inflammatory hyperalgesia induced by lipopolysaccharide in mice

    SEDA KURT

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    Eczacılık ve FarmakolojiMersin Üniversitesi

    Farmakoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. BAHAR TUNÇTAN

  4. Tez No

    744413

    Farelerde liposakkarit ile oluşturulan enflamatuvar hiperaljezi modelinde piropitoz ve nekropitoz inhibitörü nekrosülfonamidin etkisinin araştırılması

    Investigation of the effect of pyroptosis and necropitosis inhibitor necrosulphonamide in the model of liposarcarid-induced inflammatory hyperalgesia in mice

    BEYZA ÖZGEN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    Eczacılık ve FarmakolojiMersin Üniversitesi

    Eczacılık Farmakoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. BAHAR TUNÇTAN

  5. Tez No

    397979

    Expressional protein profiling of MCF-7 breast cancer epithelial cells upon BAG-1 overexpression

    BAG-1 proteininin fazla ifade edildiği MCF-7 epitel kanser hücrelerinin proteomik analizi

    PINAR ÖZTEPE

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2015

    Biyolojiİstanbul Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. GİZEM DİNLER DOĞANAY

Geri Dön