Sıçanlarda oluşturulan bilateral arka bacak iskemi/reperfüzyon zedelenmesi modelinde rıpk1 inhibisyonunun kan basıncı ve kalp hızı ile kardiyak, renal, pulmoner, hepatik ve serebral dokulardaki nekroenflamatuvar değişiklikler üzerindeki etkisinin araştırılması
Investigation of the effect of ripk1 inhibition on blood pressure, heart rate, and necroinflammatory changes in cardiac, renal, pulmonary, hepatic, and cerebral tissues in a bilateral hind limb ischemia/reperfusion injury model in rats
- Tez No: 955295
- Danışmanlar: PROF. DR. BAHAR TUNÇTAN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Eczacılık ve Farmakoloji, Pharmacy and Pharmacology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2025
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Mersin Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Eczacılık Farmakoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Farmakoloji Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: 186
Özet
Bu tezde, sıçanlarda oluşturulan bilateral arka bacak iskemi/reperfüzyon (İ/R) zedelenmesi modelinde reseptör ile etkileşen serin/treonin protein kinaz (receptor-interacting serine/threonine-protein kinase; RIPK) 1 inhibisyonunun, ortalama arter basıncı (OAB), kalp hızı (KH) ve yaşam süresinin yanı sıra, kardiyak, renal, pulmoner, hepatik ve serebral dokulardaki nekroenflamatuvar değişiklikler üzerindeki etkisinin araştırılması amaçlanmıştır. Bu amaçla gerçekleştirilen çalışmalarda, seçici bir RIPK1 inhibitörü olan nekrostatin (necrostatin; Nec)-1s kullanılmıştır. Deneylerde kullanılan sıçanlar 6 gruba ayrılmıştır: (1) Sodyum fosfat tamponu (SFT) (kontrol grubu), (2) İ/R+SFT, (3) Nec-1s (3 mg/kg), (4) İ/R+Nec-1s (1 mg/kg), (5) İ/R+Nec-1s (2 mg/kg) ve (6) İ/R+Nec-1s (3 mg/kg). Bilateral arka bacak İ/R zedelenmesi modelinin oluşturulması için, anestezi edilen sıçanların her iki arka bacağına trochanter major düzeyinde 3 saat süreyle turnike uygulanarak iskemi oluşturulmasının ardından, turnikeler açılarak reperfüzyonun sağlanması için 24 saat beklenmiştir. SFT veya Nec-1s, sıçanlara reperfüzyondan 1 saat önce intraperitoneal yoldan uygulanmıştır. Ayrıca, yapılan bu çalışmalar süresince mortalite gözlenmiştir. Reperfüzyondan 24 saat sonra anestezi edilen sıçanların vena cava caudalis'inden kan alınmasının ardından, kalp, böbrek, akciğer, karaciğer ve beyin izole edilmiştir. Kanlardan ayrılan serum örnekleri ile izole edilen dokuların bir bölümü, nitrit ve prostaglandin (PG) I2 düzeyleri ile protein ekspresyonu ölçümü çalışmalarında kullanılmıştır. Dokuların kalan bölümünde ise, enflamasyon, nekropitoz ile doku zedelenmesine ilişkin değişikliklerin belirlenmesi amacıyla hematoksilen ve eozin boyama yöntemi kullanılarak histopatolojik çalışmalar gerçekleştirilmiştir. Nitrit ve PGI2 düzeylerinin ölçülmesi için sırasıyla diazotizasyon yöntemi ve enzyme-linked immunosorbent assay kiti kullanılmıştır. Dokularda fosforile olmamış ve/veya fosforile RIPK1, RIPK3, karışık kökenli kinaz benzeri psödokinaz (mixed lineage kinase-domain like pseudokinase; MLKL), high-mobility-group-box (HMGB) 1, κB kinaz inhibitörü (inhibitor of κB kinase; IKK) a, IKKβ, IKKg, κB inhibitörü (inhibitor of κB; IkB)-a, nükleer faktör (NF)-kB p65, indüklenebilir nitrik oksit sentaz (iNOS), siklooksijenaz (cyclooxygenase; COX)-2, interlökin (interleukin; IL)-1β ve β-tübülin proteinlerinin ekspresyonu/etkinliği özgül primer ve sekonder antikorlar kullanılarak immunoblotting yöntemi ile ölçülmüştür. Kontrol grubu ile karşılaştırıldığında, iskemiden 3 ve reperfüzyondan 24 saat sonra OAB sırasıyla 24 ve 22 mmHg azalmış, KH sırasıyla 113 ve 61 atım/dakika artmıştır. Reperfüzyondan 24 saat sonra sıçanların serumlarında ölçülen nitrit ve PGI2 düzeyleri, dokularda fosforile olmamış ve/veya fosforile RIPK1, RIPK3, MLKL, HMGB1, IKKa/β/g, fosforile IkB-a, NF-kB p65, fosforile NF-kB p65, iNOS, COX-2 ve IL-1β proteinlerinin ekspresyonu ile histopatolojik değişikliklere ilişkin puanlar yükselirken, fosforile olmamış IkB-a protein ekspresyonu azalmıştır. Sıçanlara 3 mg/kg dozda uygulanan Nec-1s, İ/R'nin neden olduğu bu değişiklikleri önlemiş olmasına karşın, histopatolojik değişikliklere ilişkin puanlardaki yükselmeyi yalnızca kalp dokusunda azaltmıştır. Bulgularımız, alt ekstremite İ/R zedelenmesinin neden olduğu kardiyak, renal, pulmoner, hepatik ve serebral dokularda pro-enflamatuvar RIPK1/RIPK3/MLKL/HMGB1, IKKa/β/g/IkB-a/NF-kB/iNOS, IKKa/β/g/IkB-a/NF-kB/COX-2 ve IKKa/β/g/IkB-a/NF-kB/IL-1β yollarının etkinliğindeki artışa bağlı olarak gelişen hemodinamik parametrelerdeki değişikliklerin RIPK1 inhibisyonu ile önlenebileceğini göstermiştir.
Özet (Çeviri)
In this thesis, it was aimed to investigate the effects of receptor-interacting serine/threonine-protein kinase (RIPK) 1 inhibition on mean arterial pressure (MAP), heart rate (HR), and survival in addition to necroinflammatory changes in cardiac, renal, pulmonary, hepatic, and cerebral tissues in a bilateral hind limb ischemia/reperfusion (I/R) injury model in rats. In the studies conducted for this purpose, necrostatin (Nec)-1s, a selective RIPK1 inhibitor, was used. The rats used in the experiments were divided into 6 groups: (1) Phosphate-buffered saline (PBS) (control group), (2) I/R+PBS, (3) Nec-1s (3 mg/kg), (4) I/R+Nec-1s (1 mg/kg), (5) I/R+Nec-1s (2 mg/kg), and (6) I/R+Nec-1s (3 mg/kg). To establish the bilateral hind limb I/R injury model, ischemia was induced by applying tourniquets to both hind legs of anesthetized rats at the level of the greater trochanter for 3 hours, then the tourniquets were opened and 24 hours were waited to ensure reperfusion. PBS or Nec-1s was applied intraperitoneally into the rats 1 hour before reperfusion. In addition, mortality was observed during these studies. After 24 hours of reperfusion, blood was collected from the caudal vena cava of anesthetized rats and the heart, kidney, lung, liver, and brain were isolated. Serum samples separated from blood and some of the isolated tissues were used in studies measuring nitrite and prostaglandin (PG) I2 levels and protein expression. In the remaining tissues, histopathological studies were performed using hematoxylin and eosin staining method to determine changes related to inflammation, necroptosis, and tissue damage. Diazotization method and enzyme-linked immunosorbent assay kit were used to measure nitrite and PGI2 levels, respectively. Expression/activity of phosphorylated or unphosphorylated RIPK1, RIPK3, mixed lineage kinase-domain like pseudokinase (MLKL), high-mobility-group-box (HMGB) 1, inhibitor of κB kinase (IKK) a, IKKβ, IKKg, inhibitor of κB (IkB)-a, nuclear factor (NF)-kB p65, inducible nitric oxide synthase (iNOS), cyclooxygenase (COX)-2, interleukin (IL)-1β, and β-tubulin proteins in tissues were measured by immunoblotting using specific primary and secondary antibodies. Compared with the control group, MAP decreased by 24 and 22 mmHg, respectively, and HR increased by 113 and 61 beats/min, respectively, 3 hours after ischemia and 24 hours after reperfusion. Nitrite and PGI2 levels measured in the serum of rats 24 hours after reperfusion, expression of unphosphorylated and/or unphaosphorylated RIPK1, RIPK3, MLKL, HMGB1, IKKa/β/a, IkB-a, NF-kB p65, iNOS, COX-2, and IL-1β proteins in tissues and histopathological changes scores were increased while unphosphorylated IkB-a protein expression was decreased. Although Nec-1s administered to rats at a dose of 3 mg/kg prevented these changes induced by I/R, it reduced the increase in scores related to histopathological changes only in the heart tissue. Our findings showed that the deterioration of hemodynamic parameters due to the increase in the activity of pro-inflammatory RIPK1/RIPK3/MLKL/HMGB1, IKKa/β/g/ IkB-a/NF-kB/iNOS, IKKa/β/g/IkB-a/NF-kB/COX-2, and IKKa/β/g/IkB-a/NF-kB/IL-1β pathways in the cardiac, renal, pulmonary, hepatic, and cerebral tissues caused by lower extremity I/R injury can be prevented by RIPK1 inhibition.
Benzer Tezler
- 6-OHDA parkinson modeli sıçanlarda substansiya nigra pars retikulataya uygulanan derin beyin stimulasyonunun etkileri
The effects of deep brain stimulation of the substantia nigra pars reticulata in 6-OHDA parkinsonism model in rats
EYLEM TURGUT
- Venöz yetmezlik modellerinde flep viabilitesinin incelenmesi
Investigation of flap viability in venous insufficiency models
MUSA BURAK ÇATALKAYA
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2023
Plastik ve Rekonstrüktif Cerrahiİzmir Katip Çelebi ÜniversitesiPlastik Rekonstrüktif ve Estetik Cerrahi Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ERSİN AKŞAM
- Timpanotomi uygulanan sıçanlarda reaktif oksijen türlerinin incelenmesi ve vitamin E kullanımı ile reaktif oksijen türlerinin seviyesindeki değişikliğin değerlendirilmesi
Başlık çevirisi yok
ŞENOL POLAT
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2003
Kulak Burun ve BoğazMarmara ÜniversitesiKulak Burun Boğaz ve Baş-Boyun Cerrahisi Ana Bilim Dalı
- Sıçanlarda oluşturulan deneysel alzheimer modelinde Beta vulgaris L. var. Cicla yapraklarının tedavi edici etkisinin incelenmesi
Investigation of therapeutic effects of Beta vulgaris L. var. Cicla leaves in an experimental Alzheimer's model in rats
BÜŞRA ERTAŞ
Doktora
Türkçe
2021
Eczacılık ve FarmakolojiMarmara ÜniversitesiFarmakoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. GÖKSEL ŞENER
- Akut böbrek yetmezliği oluşturulan sıçanlarda Nateglinid'in koruyucu etkilerinin araştırılması
Investigation of the protective effects of Nateglinide in rats with acute kidney injury
SENANUR ILIKÇA