Biyotinidaz enzim aktivite ölçümü için yeni bir florojenik prob geliştirilmesi
Development of a novel fluorogenic probe for the measurement of biotinidase enzyme activity
- Tez No: 811275
- Danışmanlar: PROF. DR. MEHMET ALTUN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Kimya, Chemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2023
- Dil: Türkçe
- Üniversite: İstanbul Üniversitesi-Cerrahpaşa
- Enstitü: Lisansüstü Eğitim Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Organik Kimya Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Biyotinidaz enzimi, metabolizmada besinlerde bağlı bulunan biyotin vitaminin salınımını sağlar. Bu nedenle biyotinidaz eksikliğinin teşhisi, serum veya plazmada eksik enzim aktivitesi tespitine dayanır. Biyotinidaz enzim aktivitesinin doğru ve hızlı tayini için yaygın olarak spektrofotometrik ve florometrik yöntemler kullanılmaktadır. Spektrofotometrik yöntemde biyotinidaz enziminin aktivitesi tayini için“n-biyotinil-p-aminobenzoat”, florometrik yöntemde ise“biyotinil-6-aminokinolin”substrat olarak kullanılır. Bu tez çalışması kapsamında biyotinidaz enziminin aktivite tayini için Biyotinil-NIR-NH2, Biyotin-Aminoantipirin ve Biyotinil-DCMC-NH2 olmak üzere üç prob tasarlandı. Biyotinil NIR-NH2 ve Biyotin-Aminoantipirin sentezleri tamamlanmasına rağmen Biyotinil-DCMC NH2 probuna ait sentezler 2-(2-Metil-4H-kromen-4-iliden)malononitril sentez kademesine kadar tamamlandı.Biyotinil-NIR-NH2, Biyotin-Aminoantipirin problarına ait sentez kademelerin ve elde edilen probların önce spektroskopik karekterizasyonları yapıldı. Ardından bu probların spektrofotometrik, florometrik ve LC-MS/MS yöntemleriyle analitik uygulamaları araştırıldı.Biyotinidaz enzim aktivitesi için optimum çalışma şartları ortaya konulduktan sonra otoanalizör cihazında Biyotin-NIR-NH2 ve Biyotin-Aminoantipirin probları biyotinidaz enzimleriyle reaksiyonu sonucunda ortaya çıkan hidroliz ürünü NIR-NH2 ve kinonimin reaktiflerinin sırasıyla 680 nm ve 505 nm civarında spesifik bir absorbans verdiği tespit edildi. Otoanalizör cihazında spektrofotometrik yöntemle iki farklı dalga boyunda Biyotin-NIR-NH2 için (694-751 nm) ve Biyotin-Aminoantipirin için ise oluşan kinonimin bileşiğinin (505-805 nm) absorbans okumaları yaklaşık 15 dakikalık sürede yapıldı. Biyotin-NIR-NH2 probunun hidroliz ürünü olan NIR-NH2 probunun 690 nm'deki epsilon değeri 52350 Lmol-1cm-1 ve Biyotin-Aminoantipirin hidroliz ürününü olan 4-aminoantipirinin p-klorofenol kenetlenme ürünü olan kinonimin 505 nm'de epsilon değeri 6410 Lmol-1cm-1 olarak hesaplandı. Bu tez çalışması kapsamında Biyotin-NIR-NH2 ve Biyotin-Aminoantipirin probları geliştirildi. Geliştirilen her iki probun da otoanalizör cihazında 15 dakika gibi çok kısa bir zaman diliminde sonuç veren iki yeni biyotinidaz tayin kitine dönüşme potansiyeli bulunmaktadır.
Özet (Çeviri)
The enzyme Biotinidase provides the release of the vitamin named as biotin, which is bound to food in the metabolism. Therefore, the diagnosis of biotinidase deficiency and the detection of deficient enzyme activity in serum or plasma are important. Spectrophotometric and fluorometric methods are widely used for accurate and rapid determination of biotin enzyme activity. In the spectrophotometric method,“n-biotinyl-p-aminobenzoate”is used as a substrate for the determination of biotinidase enzyme activity, and in the fluorometric method,“biotinyl 6-aminoquinoline”is used as a substrate. Within the scope of this thesis, three probes, namely Biotinyl-NIR-NH2, Biotin Aminoantipyrine, and Biotinyl-DCMC-NH2 were designed for the activity determination of biotinidase. Although the syntheses of Biotinyl-NIR-NH2 and Biotin-Aminoantipyrine were completed, the syntheses of the Biotinyl-DCMC-NH2 probe were completed up to the 2-(2- Methyl-4H-chromen-4-ylidene)malononitrile synthetic step. First, spectroscopic characterization of the synthetic steps of Biotinyl-NIR-NH2, Biotin Aminoantipyrine probes, and the obtained probes were performed. Then, analytical applications of these probes with spectrophotometric, fluorometric, and LC-MS/MS methods were investigated. After determining the optimal operating conditions for biotinidase activity, it was determined that the hydrolysis product NIR-NH2 and quinonimine reagents, which are formed as a result of the reaction of Biotin-NIR-NH2 and Biotin-Aminoantipyrine probes with biotinidase in the autoanalyzer device, giving a specific absorbance of around 680 nm and 505 nm, respectively. In the autoanalyzer device, absorbance readings of the quinonimine compound (505-805 nm) formed for Biotin-NIR-NH2 (694-751 nm) and Biotin Aminoantipyrine (505-805 nm) at two different wavelengths were taken in approximately 15 minutes by spectrophotometric method. The molar absorptivity coefficient of the NIR-NH2 probe, which is the hydrolysis product of Biotin-NIR-NH2 probe, at 690 nm is 52350 Lmol-1cm-1 and the epsilon value at 505 nm of quinonimine, which is the p-chlorophenol coupling product of 4-aminoantipyrine, the hydrolysis product of Biotin-Aminoantipyrine, is calculated as 6410 Lmol-1cm-1. In this thesis, Biotin-NIR-NH2 and Biotin-Aminoantipyrine probes were developed. Both developed probes have the potential to be transformed into two new biotinidase determination kits that give results in a very short time like 15 minutes in the autoanalyzer device.
Benzer Tezler
- Yenidoğan tarama programı kapsamında taranan biyotinidaz eksikliğinin genetik etiyolojisinde yer alan mutasyonların dağılımı ve genotip-fenotip korelasyonu
Distribution and genotype-phenotype correlation of mutations involved in the genetic etiology of biotinidase deficiency screened within the scope of the newborn screening program
NIGAR SHIRINOVA
- Nükleer manyetik rezonans ve kütle spektroskopisi ile biyotinidaz enzim aktivite ölçüm yönteminin geliştirilmesi
Development of biotinidaze enzyme activity measurement method by nuclear magnetic resonance and mass spectroscopy
UFUK SARIKAYA
- Yenidoğan tarama ile saptanan biyotinidaz eksikliği vakalarının değerlendirilmesi
Evaluation of biotinidase deficiency cases detected by newborn screening
SÜEDA SİDAR
- İnflamatuar bağırsak hastalığı tanısı almış hastalarda biyotinidaz enzim aktivitesinin retrospektif değerlendirilmesi
Retrospective evaluation of biotinidase enzyme activity in patients diagnosed with inflamattory bowel disease
ZEYNEP SAĞLAM ÇAVAK
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2024
Bursa Uludağ ÜniversitesiÇocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Yükleniyor...
- Biyotinidaz eksikliği olan hastalarda klinik ve genotipik özelliklerin değerlendirilmesi
Evaluati̇on of cli̇ni̇cal and genotypi̇c characteri̇sti̇cs i̇n pati̇ents wi̇th bi̇oti̇ni̇dase defi̇ci̇ency
DUDU DUYGU CİVAN
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2022
Akdeniz ÜniversitesiÇocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı
Yükleniyor...