Geri Dön

Leucojum aestivum N4OMT geninin izolasyonu ve klonlanması

Leucojum aestivum N4OMT gene isolation and cloning

  1. Tez No: 823801
  2. Yazar: ASLI HİLAL ÖZTÜRK
  3. Danışmanlar: PROF. DR. SEMRA HASANÇEBİ
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyomühendislik, Bioengineering
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2023
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Trakya Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Genetik ve Biyomühendislik Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 59

Özet

Bu araştırmada, Leucojum aestivum bitkisinden norbelladine 4'-O-metiltransferaz (N4OMT) enzimini kodlayan genin, izolasyonu ve klonlanması yapılmıştır. L. aestivum, Trakya bölgesinde yayılım gösteren çok önemli bir tıbbi bitkidir ve özellikle likorin ve galantamin olmak üzere farmakolojik açıdan önemli bazı alkaloitlerin doğal üreticisidir. Bitkinin ürettiği bir Amarylldacaea alkoloidi olan galantamin, sinir sistemini etkileyen, başta Alzheimer olmak üzere önemli bazı nöredejeneratif hastalıkların tedavi sürecinde kullanılan değerli bir sekonder metabolittir. Norbelladin 4'-O-metiltransferaz (N4OMT), galantamin sentez yolağında, başlangıç aşamasındaki önemli adımlardan biri olan norbelladini, 4'-0-metilnorbelladine katalizleyen enzimdir. Bu nedenle N4OMT geni, galantamin üretiminin artırılmasına yönelik metabolik mühendisliği çalışmaları için hedef niteliğindedir ve genin izolasyonu, klonlanması ve karakterize edilmesi önemlidir. Tez kapsamında, önce galantamin üreticisi yakın akraba türlerden N4OMT genine ait DNA dizilerinden ve 2022 yılında yayınlanan L. aestivum N4OMT (LuaN4OMT) gen dizisinden yararlanılarak gene özgü primerler tasarlanmıştır. Ardından bitkinin çiçek dokularından total RNA izole edilmiş, elde edilen total RNA'lardan ters transkripsiyon işlemi ile cDNA sentezlenmiştir. Tasarlanan primerler kullanılarak cDNA'dan LuaN4OMT geni çoğaltılmış ve bir klonlama vektörü olan pJET.Blunt/1.2'ye bağlanmıştır. Ardından hazırlanan rekombinant vektör, E. coli'ye transfer edilmiş ve olası transformant koloniler, PCR ile doğrulanmıştır. PCR ürünleri, jelden geri kazanılarak, Sanger dizileme yapılmıştır. Dizileme sonucu, klonlanan genin LuaN4OMT olduğunu doğrulamıştır.

Özet (Çeviri)

In this study, the gene encoding the norbelladine 4'-O-methyltransferase (N4OMT) enzyme from the Leucojum aestivum plant was isolated and cloned. L. aestivum is a very important medicinal plant distributed in the Thrace region and is a natural producer of some pharmacologically important alkaloids, especially lycorine and galantamine. aestivum is a very important pharmaceutical plant that grows in the Thrace region and is a natural producer of some pharmacologically important alkaloids, especially lycorine and galantamine. Galantamine, an Amarylldacaea alkaloid produced by the plant, is a valuable secondary metabolite used in the treatment of some important neurodegenerative diseases, especially Alzheimer's, affecting the nervous system. Norbelladine 4'-O-methyltransferase (N4OMT) is the enzyme that catalyzes norbelladine, which is one of the important initial steps in the galantamine synthesis pathway, to 4'-O-methylnorbelladine. Therefore, the N4OMT gene is a target for metabolic engineering studies to increase galantamine production, and isolation, cloning and characterization of the gene are important. Within the scope of the thesis, firstly, gene-specific primers were designed using the DNA sequences of the N4OMT gene, a closely related species that produces galantamine, and the L. aestivum N4OMT (LuaN4OMT) gene sequence published in 2022. Then, total RNA was isolated from the flower tissues of the plant, and cDNA was synthesized from the obtained total RNAs by reverse transcription. The Lua.N4OMT gene was amplified from the cDNA using the designed primers and ligated into a cloning vector, pJET.Blunt/1.2. The recombinant vector prepared was then transferred to E. coli and possible transformant colonies were confirmed by subsequent colony PCR. The PCR products, the resulting DNA fragments recovered from the gel, were Sanger sequencing. The sequencing result confirmed that the cloned gene was LuaN4OMT. It was used to determine the nucleotide sequence of the gene and confirm that the gene was cloned.

Benzer Tezler

  1. Leucojum aestivum lL.'den Tirozin dekarboksilaz enziminin (LuaTYDC1) heterolog ekspresyonu ve saflaştırılması

    Heterologous expression and purification of Tyrosine decarboxylase enzyme (LuaTYDC1) from Leucojum aestivum L.

    ZEKİYE DEMİR

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    BiyoteknolojiYıldız Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. EMEL ORDU

  2. Leucojum aestıvum L. bitkisinden alkaloidlerin izolasyonu, yapılarının aydınlatılması ve asetilkolinesteraz ve butirilkolinesteraz inhibisyon aktivitelerinin (Anti-Alzheımer) incelenmesi

    The isolation and structure elucidation of alkaloids from Leucojum aestivum L. and investigation of acetylcholinesterase and butyrylcholinesterase inhibition (Anti-Alzheimer) activities

    CANAN KARUNCULA

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2013

    KimyaTrakya Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. ÖZLEM DEMİRKIRAN

  3. Leucojum aestivum L.'den tirozin dekarboksilaz (TYDC) geninin izolasyonu ve klonlanması

    Isolation and cloning of the tyrosine decarboxylase (TYDC) gene from Leucojum aestivum L.

    ÖZLEM BALTA

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2021

    BiyoteknolojiTrakya Üniversitesi

    Biyoteknoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. SEMRA HASANÇEBİ

    DR. ÖĞR. ÜYESİ EMEL ORDU

  4. Determination of seasonal variation in alkaloid content,morphological characterizataon and evaluation of biologicalactivities of Leucojum aestivum L. (summer snowflake)populations growing in different locations of turkey

    Türkiye'de farklı lokasyonlarda yetişen Leucojum aestivum(gölsoğanı) popülasyonlarının alkaloid içeriğinin mevsimselvaryasyonunun belirlenmesi, morfolojik karakterizasyonu vebiyolojik aktivitelerinin değerlendirilmesi

    SİNA CAFER DEMİR

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2021

    BiyolojiBolu Abant İzzet Baysal Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. İSMAİL EKER

    PROF. DR. ARZU TÜRKER

  5. Leucojum aestivum L.'da sitolojik ve sitoembriyolojik çalışmalar

    Cytological and cytoembryological studies in Leucojum aestivum L.

    NURAN EKİCİ

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2006

    BiyolojiTrakya Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ.DR. FERUZAN DANE