Geri Dön

Investigating the role and regulation of H3K36 methylation in neuroectodermal lineage commitment of mouse embryonic stem cells

H3K36 metilasyonun fare embriyonik kök hücrelerinin nöroektodermal hücre hattına yönelimindeki rolü ve düzenlenmesinin incelenmesi

  1. Tez No: 825193
  2. Yazar: DERSU SEZGİNMERT
  3. Danışmanlar: DR. ÖĞR. ÜYESİ NİHAL TERZİ ÇİZMECİOĞLU
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoloji, Biology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2023
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Orta Doğu Teknik Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 100

Özet

Embriyonik gelişim, zamansal ve mekansal olarak düzenlenmiş faktörler tarafından yönetilen karmaşık bir süreçtir. Embriyonik kök hücreler (EKH'ler), bu gelişim dinamiklerini incelemek için önemli in vitro modeller olarak hizmet eder. Bu düzenlemede kritik öneme sahip olan epigenetik mekanizmalar, pluripotent EKH'leri belirli soylara yönlendirir. Bu mekanizmaların daha derin bir şekilde incelenmesi, gelişimsel bozuklukları anlamak için gereklidir. Daha önce yürütülen bir kütle spektrometresi analizi, nöroektoderm farklılaşması sırasında H3K36me2 seviyelerinde bir yükselme olduğunu ortaya koyarken, endoderm farklılaşmasında bu artışın olmadığı gözlemlendi. Ön verilerimiz, nöroektoderm farklılaşmasında H3K36 metilasyonunun belirgin bir rolünün olduğuna işaret ediyor. Bu bulgular Western blot yöntemi ile doğrulandıktan sonra, farklılaşma sırasında metiltransferazlar, demetilazlar ve okuyucular dahil olmak üzere H3K36 metilasyon düzenleyici sistemindeki ifade değişiklikleri analiz edildi. Endoderm için mevcut RNA-sekanslama verileriyle birlikte nöroektoderm farklılaşmasına dair RT-qPCR analizleri, pluripotentlikten çıkışta ve/veya farklılaşmada H3K36 metilasyonun önemli bir rolü olabileceğini gösterdi. Özellikle, Nsd2 ve Zmynd11 ifade seviyeleri, her iki soyda farklılaşma sırasında artarken, Kdm4c ve Msh6'nın, farklılaşmış durumlara kıyasla mESC'lerde daha yüksek ifade edildiği bulundu. Tersine, Nsd1 ve Setd5 için soya özgü ifade değişimleri gözlemlendi. Son olarak, nöroektoderm farklılaşması için kritik epigenetik faktörleri belirlemek üzere yapılan bir CRISPR gen silme taraması yoluyla, Nsd1, Setd5 ve Kdm2b'nin nöroektoderm farklılaşması için kritik olduğunu ortaya çıkardık. Bu bulgular, H3K36me2 düzenlemesinin soy seçimi ve pluripotentlikten çıkış için önemini vurgulamaktadır; düzenleyici proteinler, farklılaşma aşamasına veya soya özgü ifade değişikliklerini göstermektedir. Bu modifikasyonun ve ilişkili proteinlerin nöroektoderm farklılaşmasını etkilediği mekanizmaları ortaya çıkarmak için gelecekte çalışmalara ihtiyaç vardır.

Özet (Çeviri)

Embryonic development is a complex process orchestrated by spatiotemporally regulated factors. Embryonic stem cells (ESCs) serve as invaluable in vitro models for studying these developmental dynamics. Epigenetic mechanisms, crucial in this regulation, guide pluripotent ESCs towards specific lineages. A deeper understanding of these mechanisms is essential for addressing developmental disorders. A previously conducted mass spectrometry analysis revealed an elevation in H3K36me2 levels during neuroectoderm differentiation, while such an increase was absent in endoderm differentiation. Our preliminary data hints a distinctive role for H3K36 methylation in neuroectoderm differentiation. After these findings were validated by Western blot, expression changes in H3K36 methylation regulatory system, including methyltransferases, demethylases, and readers, were analyzed. RT-qPCR analyses of neuroectoderm, complemented with existing RNA-seq data for endoderm, indicated a central role for H3K36 methylation in pluripotency exit and/or differentiation. Notably, Nsd2 and Zmynd11 expression levels were upregulated during differentiation into both lineages, whereas Kdm4c and Msh6 were found to be expressed higher in mESCs compared to differentiated states. Conversely, lineage-specific expression patterns were noted for Nsd1 and Setd5. Finally, through a CRISPR knock out screening done to identify the critical epigenetic factors for neuroectoderm differentiation, we revealed that Nsd1, Setd5 and Kdm2b are critical for neuroectoderm differentiation. These findings highlight the importance of H3K36me2 regulation for lineage choice and exit from pluripotency, with regulatory proteins showing stage- or lineage-specific expression changes. Further work is needed to uncover the precise mechanisms by which this modification and its associated proteins influence neuroectoderm differentiation.

Benzer Tezler

  1. Investigating the role of Cyclin dependent kinase 2 in triggering late G1 expression of stem loop binding protein as a major mechanism to regulate histone production

    Histon üretiminin regülasyonunda önemli olan stem loop binding protein'in geç G1 fazında Cdk2 tarafından tetiklenmesinin araştırılması

    UMİDAHAN DJAKBAROVA

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2012

    BiyolojiFatih Üniversitesi

    Genetik ve Biyomühendislik Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. MEHMET MURAT KÖSEOĞLU

  2. İlaçla indüklenen senesens gelişiminde ve sekretomoluşumunda flotillin-1 ve flotillin-2 proteinlerininolası rollerinin değerlendirilmesi

    The evaluation of the possible roles of flotillin-1 and flotillin-2 proteins in drug-induced senescence development and secretome formation

    ESRA ÖZDEK

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2024

    Eczacılık ve FarmakolojiGazi Üniversitesi

    Farmakoloji Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ YAPRAK DİLBER ŞİMAY DEMİR

  3. Isolation and characterization of primary human brain mural cells

    Primer insan beyni mural hücrelerinin izolasyonu ve karakterizasyonu

    GÖKÇE GÖKMENOĞLU

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2022

    Moleküler TıpKoç Üniversitesi

    Sağlık Bilimleri Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. ATAY VURAL

  4. Hl-1 hücrelerinde Na+/H+ değiş-tokuşcusunun regülasyonunda hipoksi ile indüklenen faktörlerin rolünün incelenmesi

    Investigating the role of hypoxia induced factors in regulation of Na+/H+ exchanger in HL-1 cells

    GÜL ŞİMŞEK

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2016

    BiyofizikAnkara Üniversitesi

    Biyofizik Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. HİLMİ BURAK KANDİLCİ

  5. Hücresel stres koşulları altında trm10 enziminin rolünün transkriptom düzeyinde araştırılması

    Investigating the role of trm10 enzyme under cellular stress conditions at the transcriptome level

    AYŞE AYÇA KORKMAZ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2024

    Biyolojiİstanbul Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ MEHMET TARDU