Geri Dön

Producing of recombinant beta-galactosidase enzyme to reduce lactose intolerance

Laktoz intoleransının azaltılması için rekombinant olarak beta-galaktosidaz enzim üretilmesi

PDF İndir

  1. Tez No: 828396
  2. Yazar: AYŞE ÇOLAK
  3. Danışmanlar: PROF. DR. HÜLYA AYAR KAYALI
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2023
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Dokuz Eylül Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Biyoteknoloji Bilim Dalı
  13. Sayfa Sayısı: 104

Özet

Laktoz, sütte bulunan ana karbohidrattır ve memelilerde emzirme döneminde ana enerji kaynaklarından biridir. Glukoz ve galaktozdan oluşan laktozun bağırsaklarda az sindirilmesi ya da sindirilmemesi sonucu oluşan rahatsızlık, laktoz intoleransı olarak adlandırılmaktadır. Laktoz intoleransı olan bireylerin tolere edebildikleri kadar laktoz almaları önerilmektedir. Çünkü, laktozun kaynakları olan süt ve süt ürünleri kalsiyum, fosfor, çinko ve B grubu vitamin kaynağı açısından oldukça zengindir. β-galaktosidaz enziminin ilaç endüstrisindeki popülerliğinin yanı sıra gıda sektöründe de kullanımı oldukça yaygındır. Bu noktada biyoteknoloji, rekombinant teknolojiyi kullanarak enzim üretimini ve verimini artırmaya yardımcı olur. Bu çalışmada, rekombinant β-galaktosidaz enziminin üretilmesi hedeflendi. Yüksek verimde üretim kapasitesine sahip pET28a plazmidi seçildi. UniProt veri tabanında P16278 erişim koduna sahip β-galaktosidaz sekansının TOP10 E. coli bakterisine göre kodon optimizasyonu yapıldı. Enzim geni tasarlanarak hizmet alımıyla ürettirildi. pET28a ve elde edilen gen sekansı ligasyon yöntemi ile birleştirilerek TOP10 E. coli bakterisine ısı şoku ile transforme edildi ve üretime geçildi. SDS-PAGE yapılarak protein varlığı kanıtlandı. Bu aşamadan sonra, besiyeri optimizasyonu yapılarak maksimum verim sağlayacak kompozisyon belirlendi. Hücreler sonikasyon yöntemi ile parçalanarak saflaştırma işlemi Hi Trap IMAC kolonu ile yapıldı. Saflaştırma sonunda proteinin moleküler ağırlığı belirlendi. Aktivite deneyleri ile enzimin aktivitesi belirlendi. Sıcaklık ve pH'ın enzimin aktivitesini nasıl etkilediği incelendi.

Özet (Çeviri)

The primary carbohydrate in milk is lactose, which is also a major source of energy for mammals during lactation. Lactose intolerance is the disorder that occurs because of poor digestion or indigestion of lactose, which was composed of glucose and galactose, in the intestines. Individuals with lactose intolerance should consume amounts of lactose that are within their tolerance level, in order to take advantage of the beneficial micronutrients found in dairy products such as calcium, phosphorus, zinc, and B group vitamins. In both the food and pharmaceutical industries, the enzyme β-galactosidase was frequently used. At this point, biotechnology helps to increase enzyme production and yield using recombinant technology. In this study, it was aimed to produce recombinant β-galactosidase enzyme. The pET28a plasmid with high production capacity was selected. Codon optimization of β-galactosidase sequence with accession code P16278 in UniProt database was performed according to TOP10 E. coli bacteria. The enzyme gene was designed and produced by service procurement. pET28a and the obtained gene sequence were combined by ligation and transformed into TOP10 E. coli bacteria by heat shock and production were started. The presence of protein was proved by SDS-PAGE. After this stage, the medium was optimized and the composition that would provide the maximum yield was determined. Cells were lysed by sonication and purification was done with a IMAC column. The molecular weight of the protein was determined. The unit of the enzyme was determined by activity assay. The optimum temperature and pH were determined.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    560614

    Endüstriyel kullanım amaçlı A. niger βeta glukanaz enzimininE. coli 'de üretilmesi, saflaştırılması ve karakterizasyonu

    Ekspression, prufication and characterization of recombinant A. niger beta glucanase enzyme for industrial using

    İSKENDER ŞAHİNGÖZ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2019

    BiyomühendislikTokat Gaziosmanpaşa Üniversitesi

    Biyomühendislik Ana Bilim Dalı

    PROF. İSA GÖKÇE

  2. Tez No

    402585

    Investigating role of enteroviral infection in type 1 diabetes

    Başlık çevirisi yok

    SÜMEYYE TUNCEL

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2013

    HematolojiTechnische Universität Dresden

    PROF. DR. EZIO BONIFACIO

    DR. ANNE EUGSTER

  3. Tez No

    389745

    Mezenkimal kök hücrelerden pankreas adacık beta hücrelerine benzer insülin salgılayan hücrelerin rekombinant DNA teknolojisi ile eldesi

    The production of pancreatic islet beta like insulin producing cells from mesenchymal stem cells by recombinant DNA technology

    AYŞEGÜL BAĞLAR

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2014

    BiyolojiKocaeli Üniversitesi

    Kök Hücre Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. GÖKHAN DURUKSU

  4. Tez No

    176916

    Optimization of mannanase production from recombinant Aspergillus sojae and analysis of Galactomannan hydrolysis

    Rekombinant Aspergillus sojae de mannanaz üretiminin optimizasyonu ve Galaktomannan hidroliz analizi

    BENGÜ ÖZTÜRK

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2008

    BiyokimyaOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. UFUK BAKIR

    PROF. DR. ZÜMRÜT BEGÜM ÖGEL

  5. Tez No

    572425

    Zeaksantin öncül maddesini kullanarak safran apokarotenoidlerinin heterolog mikrobiyal biyosentezi

    Heterologous microbial biocynthesis of saffron apocarotenoids using zeaxanthin previous substance

    ESRA ÖZ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2019

    BiyomühendislikFırat Üniversitesi

    Biyomühendislik Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ VENHAR ÇELİK ÖZGEN

Geri Dön