Producing of recombinant beta-galactosidase enzyme to reduce lactose intolerance
Laktoz intoleransının azaltılması için rekombinant olarak beta-galaktosidaz enzim üretilmesi
- Tez No: 828396
- Danışmanlar: PROF. DR. HÜLYA AYAR KAYALI
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2023
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Dokuz Eylül Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Biyoteknoloji Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: 104
Özet
Laktoz, sütte bulunan ana karbohidrattır ve memelilerde emzirme döneminde ana enerji kaynaklarından biridir. Glukoz ve galaktozdan oluşan laktozun bağırsaklarda az sindirilmesi ya da sindirilmemesi sonucu oluşan rahatsızlık, laktoz intoleransı olarak adlandırılmaktadır. Laktoz intoleransı olan bireylerin tolere edebildikleri kadar laktoz almaları önerilmektedir. Çünkü, laktozun kaynakları olan süt ve süt ürünleri kalsiyum, fosfor, çinko ve B grubu vitamin kaynağı açısından oldukça zengindir. β-galaktosidaz enziminin ilaç endüstrisindeki popülerliğinin yanı sıra gıda sektöründe de kullanımı oldukça yaygındır. Bu noktada biyoteknoloji, rekombinant teknolojiyi kullanarak enzim üretimini ve verimini artırmaya yardımcı olur. Bu çalışmada, rekombinant β-galaktosidaz enziminin üretilmesi hedeflendi. Yüksek verimde üretim kapasitesine sahip pET28a plazmidi seçildi. UniProt veri tabanında P16278 erişim koduna sahip β-galaktosidaz sekansının TOP10 E. coli bakterisine göre kodon optimizasyonu yapıldı. Enzim geni tasarlanarak hizmet alımıyla ürettirildi. pET28a ve elde edilen gen sekansı ligasyon yöntemi ile birleştirilerek TOP10 E. coli bakterisine ısı şoku ile transforme edildi ve üretime geçildi. SDS-PAGE yapılarak protein varlığı kanıtlandı. Bu aşamadan sonra, besiyeri optimizasyonu yapılarak maksimum verim sağlayacak kompozisyon belirlendi. Hücreler sonikasyon yöntemi ile parçalanarak saflaştırma işlemi Hi Trap IMAC kolonu ile yapıldı. Saflaştırma sonunda proteinin moleküler ağırlığı belirlendi. Aktivite deneyleri ile enzimin aktivitesi belirlendi. Sıcaklık ve pH'ın enzimin aktivitesini nasıl etkilediği incelendi.
Özet (Çeviri)
The primary carbohydrate in milk is lactose, which is also a major source of energy for mammals during lactation. Lactose intolerance is the disorder that occurs because of poor digestion or indigestion of lactose, which was composed of glucose and galactose, in the intestines. Individuals with lactose intolerance should consume amounts of lactose that are within their tolerance level, in order to take advantage of the beneficial micronutrients found in dairy products such as calcium, phosphorus, zinc, and B group vitamins. In both the food and pharmaceutical industries, the enzyme β-galactosidase was frequently used. At this point, biotechnology helps to increase enzyme production and yield using recombinant technology. In this study, it was aimed to produce recombinant β-galactosidase enzyme. The pET28a plasmid with high production capacity was selected. Codon optimization of β-galactosidase sequence with accession code P16278 in UniProt database was performed according to TOP10 E. coli bacteria. The enzyme gene was designed and produced by service procurement. pET28a and the obtained gene sequence were combined by ligation and transformed into TOP10 E. coli bacteria by heat shock and production were started. The presence of protein was proved by SDS-PAGE. After this stage, the medium was optimized and the composition that would provide the maximum yield was determined. Cells were lysed by sonication and purification was done with a IMAC column. The molecular weight of the protein was determined. The unit of the enzyme was determined by activity assay. The optimum temperature and pH were determined.
Benzer Tezler
- Endüstriyel kullanım amaçlı A. niger βeta glukanaz enzimininE. coli 'de üretilmesi, saflaştırılması ve karakterizasyonu
Ekspression, prufication and characterization of recombinant A. niger beta glucanase enzyme for industrial using
İSKENDER ŞAHİNGÖZ
Yüksek Lisans
Türkçe
2019
BiyomühendislikTokat Gaziosmanpaşa ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
PROF. İSA GÖKÇE
- Investigating role of enteroviral infection in type 1 diabetes
Başlık çevirisi yok
SÜMEYYE TUNCEL
Yüksek Lisans
İngilizce
2013
HematolojiTechnische Universität DresdenPROF. DR. EZIO BONIFACIO
DR. ANNE EUGSTER
- Mezenkimal kök hücrelerden pankreas adacık beta hücrelerine benzer insülin salgılayan hücrelerin rekombinant DNA teknolojisi ile eldesi
The production of pancreatic islet beta like insulin producing cells from mesenchymal stem cells by recombinant DNA technology
AYŞEGÜL BAĞLAR
Yüksek Lisans
Türkçe
2014
BiyolojiKocaeli ÜniversitesiKök Hücre Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. GÖKHAN DURUKSU
- Optimization of mannanase production from recombinant Aspergillus sojae and analysis of Galactomannan hydrolysis
Rekombinant Aspergillus sojae de mannanaz üretiminin optimizasyonu ve Galaktomannan hidroliz analizi
BENGÜ ÖZTÜRK
Yüksek Lisans
İngilizce
2008
BiyokimyaOrta Doğu Teknik ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. UFUK BAKIR
PROF. DR. ZÜMRÜT BEGÜM ÖGEL
- Zeaksantin öncül maddesini kullanarak safran apokarotenoidlerinin heterolog mikrobiyal biyosentezi
Heterologous microbial biocynthesis of saffron apocarotenoids using zeaxanthin previous substance
ESRA ÖZ
Yüksek Lisans
Türkçe
2019
BiyomühendislikFırat ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ VENHAR ÇELİK ÖZGEN