Purification of plant produced g protein of rabies at the 1kg biomass scale from nicotiana benthamiana plant
1 kg biyokütle ölçeğinde üretilen nıcotıana benthamıana bitkisinde kuduz g proteininin saflaştırılması
- Tez No: 854985
- Danışmanlar: PROF. DR. TARLAN MAMMEDOV
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2024
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Akdeniz Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Tarımsal Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Enzim ve Mikrobiyal Biyoteknoloji Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Kuduz hastalığı, Lyssavirus cinsi bir virüsün neden olduğu, tüm memelilerde ölümcül bir sonuçla seyreden zoonotik bir viral hastalıktır. Hastalık, merkezi sinir sistemini enfekte eder ve ensefalit ile karakterize edilir. Dünya Sağlık Örgütü (DSÖ), kuduz hastalığını, yılda 59.000'den fazla insan ölümüyle sonuçlanan en ölümcül bulaşıcı viral hastalıklardan biri olarak kabul etmektedir. Kuduz için mevcut aşılar memelilere uygulanabilmektedir. Ancak, bu aşılar maliyetli, üretimi karmaşık ve immünojeniteleri düşüktür. Bu nedenle, daha ucuz ve daha güvenli kuduz aşılarının geliştirilmesi ve büyük ölçekli üretimine ihtiyaç duyulmaktadır. Kuduz Lyssavirus (RABV) glikoproteini G, virüsün veya enfekte hücrelerin yüzeyinde homotrimerler oluşturur ve virüs-nötrleştirici antikorların hedefidir. Bu nedenle, virüsün birincil antijenik belirleyicilerini içerir. RABV'nin primer antijeni olarak belirlenen glikoprotein G'nin immünojenik indükleme yeteneği kanıtlanmıştır. Patogenezde önemli bir rol oynayan glikoprotein G hem reseptör bağlanmasını hem de membran füzyonunu katalize eder. Bir virüs organizmaya girdiğinde, aşılamadan sonra olduğu gibi, organizma virüse bağlanan ve onu etkisiz hale getiren virüs-nötrleştirici antikorlar oluşturur. G proteininin antijenik alanlarının virüs-nötrleştirici antikorları ortaya çıkarmada oldukça etkin olduğu bulunmuştur. Bitki geçici ekspresyon sistemi, aşılar ve antikorlarında rol oynadığı çeşitli rekombinant proteinlerin ekspresyonu için umut verici bir yöntemdir. Daha önce laboratuvarımızda, kuduz virüsünün G proteininin kesilmiş (yapay GCN4 tabanlı trimerizasyon alanı ile) formu olan RG2 ve RG3, geçici ekspresyon sistemi kullanılarak Nicotiana benthamiana (N. benthamiana) bitkisinde tasarlanmış ve üretilmiştir. Hem RG2 hem de RG3 proteinlerinin farelerde önemli ölçüde daha yüksek antikor titrasyonları ortaya çıkardığı gösterilmiştir. Bu tez, Nicotiana benthamiana bitkilerinden 1 kg ölçekte RG3 proteininin üretimi ve saflaştırılmasına odaklanmaktadır. RG3 proteini Ni-NTA kolonu kullanılarak N. benthamiana bitkisinden saflaştırılmış ve %53,69 saflıkta 55,87 mg RG3 proteini elde edilmiştir. Bu nedenle, sonuçlarımız bitki tarafından üretilen RG3 proteininin kuduz virüsüne karşı umut verici, uygun maliyetli ve güvenli bir aşı adayı olabileceğini göstermektedir.
Özet (Çeviri)
Rabies is a zoonotic viral disease caused by a Lyssavirus species virus that is fatal in all mammals. The disease infects the central nervous system and is characterized by encephalitis. The World Health Organization (WHO) considers rabies to be one of the deadliest infectious viral diseases in the world, resulting in over 59.000 human deaths per year. Current rabies vaccines are available for mammals. However, these vaccines are expensive, complex to manufacture, and have low immunogenicity. Therefore, there is a need for the development and large-scale production of more affordable and safer rabies vaccines. The rabies Lyssavirus (RABV) glycoprotein G forms homotrimers on the surface of the virus or infected cells and is the target of virus-neutralizing antibodies. Therefore, it contains the virus's primary antigenic determinants. It has been demonstrated that the RABV's primary antigen, glycoprotein G, can induce protective immunity. Glycoprotein G, which plays an important role in pathogenesis, catalyzes both receptor binding and membrane fusion. The plant transient expression system is a promising method for expressing a variety of recombinant proteins, including vaccines and antibodies. Recently, in our laboratory truncated form of G protein, namely RG2 and RG3 (with artificial GCN4-based trimerization domain) of rabies virus was engineered and produced in Nicotiana benthamiana (N. benthamiana) plant, using transient expression system. It was shown that both RG2 and RG3 proteins elicit significantly higher antibody titers in mice. This thesis focuses on the production and purification of RG3 protein at 1 kg scale from Nicotiana benthamiana plants. RG3 protein was purified from N. benthamiana plant using Ni-NTA column, and a 55,87 mg of RG3 protein with 53,69% purity was obtained. Thus, our results demonstrate that plant produced RG3 protein could be a promising cost effective and safe vaccine candidate against the rabies virus.
Benzer Tezler
- Purification of bacteriorhodopsin from halobacterium halobium and reconstitution studies in liposomes
Başlık çevirisi yok
M.BAKER ZABUT
Yüksek Lisans
İngilizce
1987
BiyokimyaOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyokimya Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. MERAL YÜCEL
- Bira ve alkol üretiminde kullanılan bazı enzimlerin mikrobiyal yolla eldesi
Başlık çevirisi yok
HÜSEYİN ÜSTÜNES
Yüksek Lisans
Türkçe
1985
Gıda MühendisliğiEge ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ULGAR GÜVENÇ
- Tavuk karaciğer gama-glutamil transferazının saflaştırılması ve bazı kinetik özelliklerinin araştırılması
The Purification of the chicken liver a gamma-glutamyl transferase and the research of some kinetic properties
FİLİZ TARCAN
- Melastan laktik asit üretimi
Başlık çevirisi yok
ŞEBNEM HARSA
Yüksek Lisans
Türkçe
1986
Gıda MühendisliğiEge ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ULGAR GÜVENÇ
- Zonguldak (Kokaksu) bölgesi boksitlerinden alümina üretim parametrelerinin saptanması ve ekonomik değerlendirilmesi
The Determination of the parameters of alümina production from the bauxite of Zonguldak (Kokaksu region) and the economic evaluation
F.GÜNEŞ KOZA