Geri Dön

Purification of plant produced g protein of rabies at the 1kg biomass scale from nicotiana benthamiana plant

1 kg biyokütle ölçeğinde üretilen nıcotıana benthamıana bitkisinde kuduz g proteininin saflaştırılması

  1. Tez No: 854985
  2. Yazar: ÖZLEM BABACAN
  3. Danışmanlar: PROF. DR. TARLAN MAMMEDOV
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2024
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Akdeniz Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Tarımsal Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Enzim ve Mikrobiyal Biyoteknoloji Bilim Dalı
  13. Sayfa Sayısı: 44

Özet

Kuduz hastalığı, Lyssavirus cinsi bir virüsün neden olduğu, tüm memelilerde ölümcül bir sonuçla seyreden zoonotik bir viral hastalıktır. Hastalık, merkezi sinir sistemini enfekte eder ve ensefalit ile karakterize edilir. Dünya Sağlık Örgütü (DSÖ), kuduz hastalığını, yılda 59.000'den fazla insan ölümüyle sonuçlanan en ölümcül bulaşıcı viral hastalıklardan biri olarak kabul etmektedir. Kuduz için mevcut aşılar memelilere uygulanabilmektedir. Ancak, bu aşılar maliyetli, üretimi karmaşık ve immünojeniteleri düşüktür. Bu nedenle, daha ucuz ve daha güvenli kuduz aşılarının geliştirilmesi ve büyük ölçekli üretimine ihtiyaç duyulmaktadır. Kuduz Lyssavirus (RABV) glikoproteini G, virüsün veya enfekte hücrelerin yüzeyinde homotrimerler oluşturur ve virüs-nötrleştirici antikorların hedefidir. Bu nedenle, virüsün birincil antijenik belirleyicilerini içerir. RABV'nin primer antijeni olarak belirlenen glikoprotein G'nin immünojenik indükleme yeteneği kanıtlanmıştır. Patogenezde önemli bir rol oynayan glikoprotein G hem reseptör bağlanmasını hem de membran füzyonunu katalize eder. Bir virüs organizmaya girdiğinde, aşılamadan sonra olduğu gibi, organizma virüse bağlanan ve onu etkisiz hale getiren virüs-nötrleştirici antikorlar oluşturur. G proteininin antijenik alanlarının virüs-nötrleştirici antikorları ortaya çıkarmada oldukça etkin olduğu bulunmuştur. Bitki geçici ekspresyon sistemi, aşılar ve antikorlarında rol oynadığı çeşitli rekombinant proteinlerin ekspresyonu için umut verici bir yöntemdir. Daha önce laboratuvarımızda, kuduz virüsünün G proteininin kesilmiş (yapay GCN4 tabanlı trimerizasyon alanı ile) formu olan RG2 ve RG3, geçici ekspresyon sistemi kullanılarak Nicotiana benthamiana (N. benthamiana) bitkisinde tasarlanmış ve üretilmiştir. Hem RG2 hem de RG3 proteinlerinin farelerde önemli ölçüde daha yüksek antikor titrasyonları ortaya çıkardığı gösterilmiştir. Bu tez, Nicotiana benthamiana bitkilerinden 1 kg ölçekte RG3 proteininin üretimi ve saflaştırılmasına odaklanmaktadır. RG3 proteini Ni-NTA kolonu kullanılarak N. benthamiana bitkisinden saflaştırılmış ve %53,69 saflıkta 55,87 mg RG3 proteini elde edilmiştir. Bu nedenle, sonuçlarımız bitki tarafından üretilen RG3 proteininin kuduz virüsüne karşı umut verici, uygun maliyetli ve güvenli bir aşı adayı olabileceğini göstermektedir.

Özet (Çeviri)

Rabies is a zoonotic viral disease caused by a Lyssavirus species virus that is fatal in all mammals. The disease infects the central nervous system and is characterized by encephalitis. The World Health Organization (WHO) considers rabies to be one of the deadliest infectious viral diseases in the world, resulting in over 59.000 human deaths per year. Current rabies vaccines are available for mammals. However, these vaccines are expensive, complex to manufacture, and have low immunogenicity. Therefore, there is a need for the development and large-scale production of more affordable and safer rabies vaccines. The rabies Lyssavirus (RABV) glycoprotein G forms homotrimers on the surface of the virus or infected cells and is the target of virus-neutralizing antibodies. Therefore, it contains the virus's primary antigenic determinants. It has been demonstrated that the RABV's primary antigen, glycoprotein G, can induce protective immunity. Glycoprotein G, which plays an important role in pathogenesis, catalyzes both receptor binding and membrane fusion. The plant transient expression system is a promising method for expressing a variety of recombinant proteins, including vaccines and antibodies. Recently, in our laboratory truncated form of G protein, namely RG2 and RG3 (with artificial GCN4-based trimerization domain) of rabies virus was engineered and produced in Nicotiana benthamiana (N. benthamiana) plant, using transient expression system. It was shown that both RG2 and RG3 proteins elicit significantly higher antibody titers in mice. This thesis focuses on the production and purification of RG3 protein at 1 kg scale from Nicotiana benthamiana plants. RG3 protein was purified from N. benthamiana plant using Ni-NTA column, and a 55,87 mg of RG3 protein with 53,69% purity was obtained. Thus, our results demonstrate that plant produced RG3 protein could be a promising cost effective and safe vaccine candidate against the rabies virus.

Benzer Tezler

  1. Nicotiana benthamiana bitkisinde G protein varyantlarının mühendisliği, üretimi, karakterizasyonu ve hayvanlarda immünojenisite çalışmaları

    Engineering, production, characterization of G protein variants in Nicotiana benthamiana and animal immunogenicity studies

    GULSHAN MAMMADOVA

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    BiyoteknolojiAkdeniz Üniversitesi

    Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. NEDİM MUTLU

  2. Deglikolize kolisin M ve K formlarının bitkide ın vıvoüretimi, saflaştırılması, karakterizasyonu ve doğal gıda katkı maddesi olarak kullanım olanakları

    In vivo production, purification, characterization ofdeglycolysed colicine M and K forms in plant and usage asnatural food additives

    MERVE ILGIN BÜYÜKSINDIR

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    BiyoteknolojiAkdeniz Üniversitesi

    Tarımsal Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. TARLAN MAMMEDOV

  3. Expression and purification of Arabidopsis thaliana heterotrimeric G protein alpha subunit (GPA1) using bacteria and yeast systems

    A.Thaliana G-proteini alfa altbirimi (GPA1)' ın bakteri ve maya sistemlerinde ekspresyonu ve saflaştırılması

    HAZAL BÜŞRA KÖSE

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2014

    BiyofizikSabancı Üniversitesi

    Biyoloji Bilimleri ve Biyomühendislik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ZEHRA SAYERS

  4. Güneydoğu Anadolu bölgesi ve Nevşehir ilinde bağlarda zararlı virüs ve virüs-benzeri hastalıkların biyolojik ve serolojik yöntemlerle saptanması ve iki yeni nepovirüsün karakterizasyonu

    Determination of sanitary status of grapevine in Southeastern Anatolia and Nevşehir province by serological and biological methods and characterization of two new nepoviruses

    İLYAS ÇIĞŞAR

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2002

    ZiraatÇukurova Üniversitesi

    Bitki Koruma Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MEHMET ASİL YILMAZ