Advancements in gluten detection: Antibody development and gold nanoparticle conjugation for a lateral flow immunoassay
Gluten tespitindeki ilerlemeler: Antikor gelişimi ve yanal akışlı immünodeney için altın nanopartikül konjugasyonu
- Tez No: 888698
- Danışmanlar: DR. ÖĞR. ÜYESİ REHA ONUR AZİZOĞLU
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Genetik, Genetics
- Anahtar Kelimeler: Antikor geliştirme, Antikor konjugasyonu, Lateral akış immünoanalizi, Antibody development, Antibody conjugation, Lateral flow immunoassay
- Yıl: 2024
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Akdeniz Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Gen ve Hücre Tedavisi Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Gen ve Hücre Tedavisi Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: 56
Özet
Amaç: Çölyak hastalığı gibi glütenle ilişkili rahatsızlıklar, küresel nüfusun %5'ini etkilemekte olup, çölyak hastalığı tek başına bireylerin %1,4'ünü etkilemektedir. Çölyak hastalığı olan kişilerde glüten tüketimi bağırsaklarda iltihaplanmayı tetikler. Çapraz bulaşma gibi zorluklara rağmen glütensiz bir diyet uygulamak çok önemlidir. ELISA ve LFIA gibi immünolojik testler, basitlikleri ve uygun maliyetleri nedeniyle glüten tespitinde tercih edilmektedir. LFIA kitleri, gıdalardaki glüteni analiz etmek için taşınabilir bir seçenek sunmaktadır. Güvenilir glüten tespit yöntemlerine olan talep, hem gıda üreticileri hem de glütenle ilişkili rahatsızlıkları olan bireyler için doğru çözümlere duyulan ihtiyacı vurgulamaktadır. Araştırmamız, gıdalarda glüten bulunmadığını doğrulamak için glütenin ana bileşenlerinden biri olan gliadini hedefleyen antikorlar kullanan özel teknikler geliştirmeye odaklanmaktadır. Yöntem: Tavşanlardan elde edilen poliklonal antikorlar saflaştırıldı ve ELISA ve Western blot teknikleri kullanılarak gliadine karşı reaktiviteleri test edildi. Daha sonra, pH ve antikor konsantrasyonu ile optimal koşullar belirlenerek altın nanopartiküllerle konjuge edildi. LFIA'nın buğday gliadinini tespit etmedeki etkinliği, tespit limiti de dahil olmak üzere araştırıldı. Farklı gıda örneklerinden gliadin ekstrakte edilip analiz edildi ve farklı ürünlerde gliadini tespit etmek için güvenilir bir yöntem oluşturuldu. Bulgular: Üç tavşandan (R1, R2 ve R3) elde edilen antikorlar, ELISA testinde gliadine duyarlıydı. Western blot analizi, bu antikorlarda ortak gliadin-spesifik epitopları doğruladı. Glütensiz gıda örneklerine tepki vermediler. LFIA, seçilen bir membran ve lifler kullanarak buğday gliadinini etkili bir şekilde tespit etti ve tespit limiti 50 µg/mL idi. LFIA, farklı gıda kaynaklarından alınan örnekleri test ederken tutarlı ve güvenilir sonuçlar verdi. Sonuç: Çalışmamız, antikorların geliştirilmesi, altın nanopartikül bağlanmasının iyileştirilmesi ve güvenilir bir LFIA protokolü oluşturulması da dahil olmak üzere glüten tespiti için bir teknik sunmaktadır. Bu metodoloji, gıda güvenliğinin ve glüten analizinin kolaylaştırılması potansiyeline sahiptir.
Özet (Çeviri)
Objective: Gluten-related disorders, like celiac disease (CD), affect 5% of the global population, with CD impacting 1.4% of individuals. Consuming gluten triggers inflammation in the intestines for those with CD. Following a gluten-free (GF) diet is crucial despite challenges like cross-contamination. Immunoassays like enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and lateral flow immunoassay (LFIA) are preferred for detecting gluten due to their simplicity and cost-effectiveness. LFIA kits offer a portable option for analyzing gluten in food. The demand for reliable gluten detection methods highlights the need for accurate solutions for both food manufacturers and individuals with gluten-related disorders. Our research focuses on developing specific techniques using antibodies targeting gliadin, one of the main parts of gluten, to confirm the absence of gluten. Method: The polyclonal antibodies obtained from rabbits were purified and tested for reactivity to gliadin using ELISA and Western blot techniques. They were then conjugated with gold nanoparticles (AuNPs) to develop an LFIA, with optimal conditions determined by pH and antibody concentration. The efficacy of the LFIA in detecting wheat gliadin, including the limit of detection, was investigated. Gliadin was extracted and analyzed from various food samples to establish a reliable method for detecting it in different products. Results: Antibodies from three rabbits (R1, R2, and R3) were sensitive to gliadin in an ELISA. Western blot analysis confirmed common gliadin-specific epitopes in these antibodies. They did not react to GF food samples. The LFIA effectively detected wheat gliadin using a selected membrane and fibers, with a detection limit of 50 µg/mL. The LFIA consistently produced reliable results when testing samples from different food sources, making it a dependable tool for gliadin detection in various food samples. Conclusion: Our study presents a technique for identifying gluten, including the development of antibodies, improving AuNP attachment, and establishing a reliable LFIA protocol. This methodology has the potential to ensure food safety and facilitate gluten analysis.
Benzer Tezler
- Ticari aquafabanın fonksiyonel özelliklerinin incelenmesi ve glütensiz kek uygulaması
Evaluation of functional properties of commercial aquafaba and gluten-free cake application
GÖĞEM SANEM DAĞLI
Yüksek Lisans
Türkçe
2024
Gıda Mühendisliğiİstanbul Teknik ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ASLI CAN KARAÇA
- Süleyman Demirel Üniversitesi Araştırma ve Uygulama Hastanesinde takip edilen çölyak hastalarının retrospektif olarak taranması
A retrospective evaluation of celiac cases followed in Suleyman Demirel University Education and Research Hospital
DUYGU ARSLAN
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2021
GastroenterolojiSüleyman Demirel Üniversitesiİç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MUHAMMET CEM KOÇKAR
- Yeni bir sayısal damgalama tekniği ile biyometrik uygulamalar
A new digital watermarking method for biometric applications
ŞENGÜL DOĞAN
Doktora
Türkçe
2011
Bilgisayar Mühendisliği Bilimleri-Bilgisayar ve KontrolFırat ÜniversitesiElektrik-Elektronik Mühendisliği Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. ARİF GÜLTEN
- Bir üniversite hastanesinde çalışan hemşirelerin iş doyumu ve örgütsel gereksinimlerine ilişkin bir inceleme
Başlık çevirisi yok
ÖZGÜL YAVAŞ
- Adaptif gözleyici tabanlı hiperkaotik sistemlerin senkronizasyonu ve uygulaması
Synchronization and implementation of adaptive observer based hyperchaotic systems
ERMAN ÖZPOLAT
Doktora
Türkçe
2024
Elektrik ve Elektronik MühendisliğiFırat ÜniversitesiElektrik-Elektronik Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ARİF GÜLTEN