Exploration of novel serine protease do-like HtrA from acigöl

Acıgöl'den yeni serin proteaz do-like HtrA enziminin keşfi

PDF İndir

Tez No: 897801
Yazar: MERYEM MENEKŞE KILIÇ
Danışmanlar: PROF. DR. NEVİN GÜL KARAGÜLER, PROF. DR. NURGÜL ÇELİK BALCI
Tez Türü: Doktora
Konular: Biyoloji, Biyoteknoloji, Mikrobiyoloji, Biology, Biotechnology, Microbiology
Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
Yıl: 2023
Dil: İngilizce
Üniversite: İstanbul Teknik Üniversitesi
Enstitü: Lisansüstü Eğitim Enstitüsü
Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Bilim Dalı
Sayfa Sayısı: 104

Özet

Endüstriyel biyoteknolojik süreçlerde yer alan enzimlerin ekstrem sayılan yüksek sıcaklık, yüksek pH, yüksek tuzluluk koşullarında ya da organik solventlerin bulunduğu koşullarda gerçekleşiyor olması, bu koşullara dayanıklı enzimlerin keşfini zorunlu hala getirmiştir. Ekstrem çevrelerde bulunan mikroorganizmalar çok yüksek; pH, sıcaklık, tuz, basınç ve düşük; sıcaklık ve pH gibi farklı stress koşullarına adapte olmuşlardır. Bu koşullara adapte olmuş mikroorganizmaların sahip olduğu enzimlerin de bu koşullarda çalışabileceği hipoteziyle ekstrem koşullara dayanıklı enzimlerin keşfi için araştırmacılar geçtiğimiz 20 yıl boyunca özellikle ekstrem çevrelere odaklanmışlardır. Bu bağlamda geleneksel mikrobiyolojik yöntemlerle mikroorganizmalar bulundukları çevreden izole edilip enzimleri karakterize edilebildiği gibi, kültüre dayalı olmayan 'metagenomiks' adı verilen yöntemle de yeni enzimlerin keşfi gerçekleştirilmiştir. Yüksek tuz konsantrasyonuna sahip çevreler sahip oldukları iyonik bileşimler açısından ikiye ayrılmıştır. Pek çok yüksek tuz konsantrasyonuna sahip çevre 'thalassohaline' olarak da adlandırılan, deniz suyunun buharlaşması ile oluşmuştur. Sahip oldukları tuz oranı deniz suyuna benzer ve pH'ı bazikten hafif asidiğe doğru değişkenlik gösterir. 'Athalassohaline' olarak adlandırılan yüksek tuz konsantrasyonuna sahip çevreler ise, iyonik bileşim açısından deniz suyundan tamamen farklıdır. Çalışma alanımız olan Acıgöl'de 'Athalassohaline' grubuna giren, yüksek tuz konsantrasyonuna sahip bir göldür. Bu çalışmada, Acıgöl'den alınan örneklerle çalışılmıştır. Acıgöl, ülkemizde Ege Bölge'sinde Denizli ve Burdur il sınırları arasında yer almaktadır. Gölün kimyasal bileşimine bakıldığında Na+, K+, Cl− and SO42− iyonlarının baskın olarak bulunduğu görülmektedir. Gölün tuzluluk oranı %5.8-%13 arasında, pH'ı 7.8-8.2 arasında ve sıcaklığı 8 °C-32 °C arasında mevsimsel olarak değişkenlik göstermektedir. Bu değişen ekstrem koşullar, gölde bulunan mikroorganizmaları hücresel ve enzimatik adaptasyona zorlamaktadır. Yüksek tuz konsantrasyonuna adapte olmuş bu organizmalara tuzu seven anlamında 'Halofilik' mikroorganizmalar denmektedir. Bu bilgilerden yola çıkılarak halofilik mikroorganizmaların zor endüstriyel süreçlerde kullanılabilecek enzimlerinin keşfedilmesi çalışmanın ana konusudur. Endüstriyel anlamda öneme sahip olan yeni proteazların, kültüre edilebilir mikroorganizmaların fonksiyona dayalı taranması yöntemi ile elde edilmesi bu çalışmanın asıl hedefidir. Bu hedef doğrultusunda ilk olarak Acıgöl'den alınan toprak örnekleri Nutrient Broth içinde seyreltilerek, içerisinde %10 NaCl ve %1 süt tozu içeren nutrient agar petri kaplarına ekilerek proteaz aktivitesi içeren türler belirlenmiştir. Proteaz aktivitesi, kolonilerin etrafındaki süt tozunun parçalanmasından kaynaklanan rengi açılmış alanlar ile belirlenmiştir. Bu tarama yöntemi ile aktif bir şekilde proteaz üreten Acıgöl'deki halofilik türler belirlenmiştir. Yapılan tarama ile morfolojik olarak 6 farklı tür belirlenmiş bunlardan 2 tanesi proteaz aktivitesi göstermiş ve en geniş aktivite alanı gösteren tür çalışmalarda kullanılmıştır. Çalışmamızın 2. aşamasında, belirlenen türün Yeni Nesil Dizileme yöntemi (Illumina HiSeq 2500 palatformu) ile tüm genomu dizilenerek sahip olduğu serin proteazlar ve biyoteknolojik açıdan önemli olan diğer enzimler belirlenmiştir. Dizileme sonucuna göre izole edilen türün tüm genomunun 4.708.499 bp uzunluğunda, %36.66 G+C oranına sahip olduğu ve 4536 adet gen kodlayan dizisi olduğu belirlenmiştir. Bunun yanı sıra, 16S rDNA dizi benzerliğine göre Virgibacillus marismortui türüne %99.81 oranında benzediği ortaya konmuştur. Tüm genom ortalama nükleotit karşılaştırmasına göre ( ANI: Average Nucleotide Identity) ANI değeri %99.44, dijital DNA-DNA hibridizasyonu ise %88.8 olarak hesaplanmıştır. Ortalama amino asit oranı ise ( AAI: Avarage Amino acid Identity) %98.69 olarak hesaplanmıştır. Genomik analizlerin yanı sıra izole edilen tür, şekilsel ve biyokimyasal olarak da incelenerek türün, gram pozitif (Gr+), hem halofilik hem alkalifilik, hareketli, endospor oluşturan, proteaz üreten bir tür olduğu belirlenmiştir. İzole edilen türün 37 °C'de, %5-10 NaCl varlığında ve çevresel pH'ın 6-9 olduğu koşullarda en iyi büyüme gösterdiği belirlenmiştir. Yapılan bu polifazik analiz sonucunda izole edilen türün Virgibacillus türüne ait bir alt tür olduğu belirlenerek Virgibacillus sp. AGTR ismiyle literatüre kazandırılmıştır. Tüm genoma ait bilgiler NCBI veri bankasında depolanmıştır. Erişim numarası JAJERH000000000. Çalışmanın son aşamasında,endüstriyel süreçlerde en çok kullanılan yeni türe ait olan serin proteazın rekombinant olarak üretilerek karakterize edilmesi hedeflenmiştir. Tüm genom analizi ile belirlenen 4 farklı serin proteazdan dizi benzerlik oranı en düşük olan ve literatürde daha az çalışma yapılmış olan Serin proteaz Do-like HtrA, rekombinant üretim için seçilmiştir. Serin proteaz Do-like HtrA, tripsin benzeri serin proteazlar enzim süper ailesinin ve S1-C alt ailesine aittir. HtrA (High temprature requirement A) bir çeşit periplazmik ısı şok proteini olup iki farklı fonksiyonu vardır. Yüksek sıcaklıklarda proteaz aktivitesi gösterirken düşük sıcaklıklarda şaperon aktivitesi göstermektedir. Endüstriyel süreçlerde kullanılan proteazlarla karşılaştırıldığında moleküler yapısı açısından oldukça farklıdır. Bu özellikleri sebebiyle özellikle ilaç endüstrisinde kullanılabileceği düşünülmektedir. Serine proteaz Do-like HtrA'nın rekombinant üretimi için ilgili genin başlangıç ve son dizilerine (5' ve 3' uçlarını hedefleyen) özgü, EcoRI ve SacI kesim bölgeleri içerecek şekilde primerler tasarlanmıştır. İzole edilen Virgibacillus sp. AGTR türünün genomu kalıp olarak kullanılarak, hedef proteaz geni PZR ile çoğaltılmış ve pET-28-a(+) ekspresyon vektörüne klonlanmıştır. Oluşturulan klonlanmış vektör, en iyi ekspresyonu gerçekleştirecek konak hücreyi belirlemek amacıyla, E. coli BL21, E.coli C43 (DE3) ve RosettaTM 2 ekspresyon hücrelerine transforme edilmiştir. Yapılan saflaştırma çalışması sonucunda RosettaTM 2 hücresi ekspresyon için seçilmiştir. Ekspresyon koşullarını belirlemek için farklı IPTG konsantrasyonlarında (0.1, 0.5 ve 1 mM IPTG), 30 ºC ve 37 ºC 'de 6 saate kadar süren ekspresyon çalışmaları yapılmıştır. 30 °C' de 4 saatte 0.1 mM IPTG ile en yüksek ekspresyon düzeyine ulaşıldığı tespit edilmiştir. Başarılı bir şekilde eksprese edilen proteaz geni His-tag yöntemi ile saflaştırılmıştır. ExPASy programı kullanılarak proteinin tahmini moleküler ağırlığı ve izoelektrik noktası hesaplanmıştır. Proteinin tahmini moleküler ağırlığı 42.100 Da ve izoelektronik noktası 4.53 olarak belirlenmiştir. Saflaştırma sonucunda SDS-PAGE ve Western blot analizleri ile enzimin moleküler ağırlığının (42.1 kDa) teorik değeri uyumlu olduğu görülmüştür. Serin proteaz Do benzeri HtrA enziminin aktivite analizleri, substrat olarak floresan izotiyosiyanat (FITC) kullanılarak işaretlenmiş FTC-kazein kullanılarak yapılmıştır. Enzimin ilk olarak, sıcaklık, pH, farklı NaCl konsantrasyonlarındaki aktivitesi ve stabilitesi belirlenmiştir. pH ile ilgili yapılan çalışmalarda enzimin asidik pH'larda enzimin aktivitesini kaybettiği gözlenirken, alkali ph'larda enzimin aktivitesinin arttığı gözlenmiştir. pH 7 -10 gibi geniş bir aralıkta enzimin stabilitesini koruduğu gözlemlenmiştir. Geniş pH aralığında aktivitesini ve stabilitesini koruması Serin proteaz Do-like HtrA enziminin alkali serin proteaz olduğunun göstergesidir. En iyi aktivite gösterdiği sıcaklığı bulabilmek için 25 °C ile 50 °C arasında çalışılmış ve en iyi aktiviteyi 42 °C'de gösterdiği belirlenmiştir. Ayrıca enzimin sıcaklık stabilitesine bakıldığında 25 °C ile 60 °C arasında aktivitesinin hala %85'ini koruduğu gözlemlenmiştir. Serin proteaz Do-like HtrA halofilik bir organizmadan üretildiği için ayrıca farklı tuz konsantrasyonlarındaki durumu incelenmiştir. Enzimin %1-25 oranında NaCl içeren ortamdaki aktivitesi çalışılmıştır. %15 NaCl oranına kadar enzim aktivitesini korurken, daha yüksek konstrasyonlar enzim aktivitesinde ciddi bir azalmaya neden olmaktadır. Sonuçlar enzimlerin halofilik adaptasyonları ile ilgili bilgilerle karşılaştırıldığında halofilik enzimlerin amino asitlerinin daha çok negatif yüklü amino asitlerden oluştuğu ve pI değerlerinin asidik olduğu görülmüştür. Çalıştığımız bu enzimin amino asit bileşimine bakıldığında %17.4 oranında negatif yüklü amino asitlerden oluştuğu ve teorik pI'nın 4.53 olduğu görülmektedir. Bu sonuçlar Serin proteaz Do-like HtrA enziminin Halofilik bir enzim olduğunu kanıtlamaktadır. Optimum çalışma koşulları belirlenen enzimin %10 organik çözücü varlığında aktivite ölçümleri de yapılmıştır. Isopropanol varlığında enzim aktivitesinin etkilenmediği, butanol, ethanol ve DMF varlığında enzim aktivitesinde büyük ölçüde düşüş olmadığı gözlemlenmiştir. Aseton, hekzan, gliserol ve DMSO varlığında ise enzim aktivitesinin %50 nin altına düştüğü belirlenmiştir. Organik solventlerde stabilitenin araştırılması için enzim 1 saat ilgili solüsyonda inkübe edilmiştir. Sonuç olarak, enzimin organik çözgenlerde stabilitesini koruyamadığı gözlemlenmiştir. Ayrıca farklı enzim inhibitörleri, metal iyonları ve deterjanların enzim üzerinde etkileri de araştırılmıştır. Özellikle Mg2+, Ca2+ ve K+ varlığında enzim aktivitesinde bir artış olduğu gözlemlenmiştir. Bu durumun, halofilik serine proteazların çalışıldığı literatürdeki diğer çalışmalarla uyumlu olduğu görülmüştür. Öte yandan Mn2+, Co2+ ve Ni2+ iyonlarının 5 mM konsantrasyonlarının aktiviteyi tamamen durdurduğu ortaya konmuştur. Farklı deterjanların varlığında enzim aktivitesi kontrol edildiğinde ise SDS varlığında enzim aktivitesi ciddi oranda etkilenmezken, Tritonx-100 ve tween 20 deterjanlarının enzim aktivitesini %50 oranında düşürdüğü görülmüştür. Farklı enzim inhibitörlerinin enzim üzerindeki etkisine bakıldığında ise özellikle PMSF varlığında enzim aktivitesinin inhibe olduğu gözlemlenmektedir. Bu durum enzimin serin hidrolaz grubu bir enzim olduğunun da ayrıca ispatı niteliğindedir. Öte yandan Serin proteaz Do-like HtrA'nın iki fonsiyonlu enzim olması sebebi ile ikinci fonksiyonu olan şaperon aktivitesi ile ilgili yapılan deneyde kısmen denature edilmiş lizozim enzimine bağlanma potansiyeline bakılmıştır. Yapılan deney sonucunda Serin proteaz Do-like HtrA'nın lizozime bağlandığı gözlemlenmiştir. Ancak bu sonuçla lizozimi tekrar aktif hala dönüştürecek şekilde katlayıp katlayamadığı ile ilgili bir yorum yapmak mümkün değildir. Şaperon aktivitesi ile ilgili daha fazla analiz yapmak gerekmektedir. Sonuç olarak, Acıgöl'den haloalkalifilik yeni bir tür izole edilmiş, bu türün tüm genomu dizilenerek biyoteknolojik potansiyeli ortaya konmuştur. Virgibacillus sp. AGTR'nin biyoteknolojik açıdan önemli, yeni bir halo-alkali serin proteazı rekombinant olarak üretilmiş ve enzimin optimum aktivite koşulları karakterize edilmiştir.

Özet (Çeviri)

Enzymes involved in industrial biotechnological processes take place in conditions of extremely high temperature, high pH, and high salinity or when there are organic solvents that have made it necessary to discover enzymes resistant to these conditions. Microorganisms in extreme environments adapt to varying levels of stress such as very high pH, temperature, salt, and pressure. For the last 20 years, researchers have focused especially on extreme environments for the discovery of enzymes that are resistant to extreme conditions, with the hypothesis that the enzymes of microorganisms adapted to these conditions can also work under extreme conditions. In this context, microorganisms can be isolated from their environment and their enzymes can be characterized by traditional microbiological methods. Besides this, new enzymes have been discovered by the method called 'metagenomics', which is not based on culture. Environments with high salt concentration are divided into two in terms of their ionic compositions. Many high salt concentration environments were formed by the evaporation of seawater, also called 'thalassohaline'. Their salt content is similar to seawater and the pH varies from basic to slightly acidic. Environments with high salt concentrations, called 'Athalassohaline', are completely different from seawater in terms of ionic composition. Acıgöl, which is our study area, is a lake with high salt concentration, which is included in the 'Athalassohaline' state group. In this study, samples from Acıgöl were employed. Acıgöl is located between the provincial borders of Denizli and Burdur in the Aegean Region of our country. Looking at the chemical composition of the lake, it is seen that Na+, K+, Cl−, and SO4 2− ions are dominant. The salinity of the Acıgöl changes between 5.8%-13%, pH between 7.8-8.2, and temperature varies seasonally between 8 °C and 32 °C. These changing extreme conditions force the microorganisms in the lake to cellular and enzymatic adaptation. These organisms adapted to high salt concentration are called 'Halophilic' microorganisms, meaning salt-loving. Based on this information, the main subject of the study is the discovery of enzymes of halophilic microorganisms that can be used in difficult industrial processes. The primary objective of this study is to obtain new proteases, which are of industrial importance, by function-based screening of culturable microorganisms. In line with this goal, firstly, soil samples taken from Acıgöl were diluted in Nutrient Broth and spread on nutrient agar petri dishes containing 10% NaCl and 1% skim milk, and the species containing protease activity were determined. It was determined by the transparent region around the colonies that the isolate had protease activity, resulting from the breakdown of skim milk. With this screening method, halophilic species in Acıgöl, which actively produce protease, were determined. Sixmorphologically different species were determined. Twoshowed protease activity, and the species with t huge zones were chosen for further studies. In the second part of the study, the whole genome of the determined species was sequenced with the New Generation Sequencing method (Illumina HiSeq 2500 platform), and its serine proteases and other biotechnologically potential enzymes were determined. According to the sequencing results, it was determined that the entire genome of the isolated species was 4,708.499 bp (base pair) in length, had a G+C ratio of 36.66%, and had 4536 gene-coding sequences. In addition, it was revealed that 99.81% ratio similarity to Virgibacillus marismortui species according to 16S rDNA sequence similarity. The whole-genome average nucleotide identity (ANI) value was obtained as 99.44% and digital DNA-DNA hybridization was computed as 88.8%. The average amino acid identity ratio (AAI: Average Amino acid Identity) was calculated as 98.69%. In addition to genomic analyses, the isolated species was also examined phenotypically and biochemically. It was determined that the species was gram positive (Gr+), both alkaliphilic and moderately halophilic, motile, endospore-forming, and protease-producing bacterium. The isolated strain shows optimum growth at 37 °C with salinity and pH ranging from 5-10% and 6 and 9, respectively. As a result of this polyphasic analysis, it was conclueded that the isolate was a subspecies of Virgibacillus species, and it has been brought to the literature with the name Virgibacillus sp. AGTR. All genome information is stored in the NCBI database. Accession number JAJERH000000000. The last step of the study aimed to produce by recombinantly and characterize the serine protease from a new isolate. Among the four serine proteases determined by whole genome analysis, the Serine protease Do-like HtrA with the lowest sequence similarity rate and fewer studies in the literature was selected for recombinant production. The Serine protease Do-like HtrA is a member of the Trypsin-like serine protease superfamily (Tryp_SPc Superfamily) and S1-C subfamily. HtrA (high-temperature requirement A), a periplasmic heat-shock protein, it has two different functions. While it shows molecular chaperone properties at low temperatures, it shows proteolytic activity at high temperatures. The structure of this kind of protease differs slightly from other commercial and well-studied proteases. Due to these properties, it could be used specifically in the pharmaceutical industry. For the recombinant production of Serine protease Do-like HtrA, primers that contain EcoR I and SacI restriction sites were designed to be specific to the start and end sequences of the gene of interest (targeting the 5' and 3' ends). By using the genome of the isolated Virgibacillus sp. AGTR strain as a template, the target protease gene was amplified and ligated into the pET-28-a(+)expression vector. The cloned vector was inserted into E. coli BL21, E. coli C43 (DE3), and RosettaTM 2 expression cells to determine the best expression host cell. As a result of the purification study, the RosettaTM 2 cell was selected for expression. Expression studies were performed with 0.1 mM, 0.5 mM, and, 1 mM IPTG concentrations at 30 ºC and 37 ºC for up to 6 hours. The highest level of expression was achieved with 0.1 mM IPTG in 4 hours at 30 °C. Successfully expressed protease gene was purified by the His-tag method. The estimated molecular weight of the protein was 42100 Da and the isoelectric point was 4.53 which is calculated using the ExPASy program. As a result of purification, the molecular weight of the enzyme (42.1 kDa) was compatible with the predicted value, according to SDS-PAGE and Western blot tests. Activity assays of the Serine protease Do-like HtrA enzyme were performed using FTC-casein labeled using fluorescent isothiocyanate (FITC) as substrate. The impact of changing temperature, pH, and NaCl concentrations on the enzyme's stability and activity. It was found that the enzyme's activity decreased at acidic pH levels while increasing at alkaline levels. It was represented that the enzyme is stable over a wide pH range of 7 -10. Maintaining activity and stability in a broad spectrum pH indicates that the Serine protease Do-like HtrA enzyme is an alkaline serine protease. The optimum temperature of the enzyme was defined at 42 °C. It was also figured out that between 25 °C and 60 °C, 85% of the enzyme activity was preserved. Since the Serine protease Do-like HtrA is produced from a halophilic organism, its activity at different salt concentrations was also investigated. The enzyme activity was checked in the presence of NaCl from 1 to 25%. While maintaining enzyme activity up to 15% NaCl, a sharp decrease in enzyme activity was observed at higher concentrations. When the results were compared with the information about the halophilic adaptations of the enzymes, it was seen that the amino acids of halophilic enzymes were highly composed of negatively charged amino acids, and their isoelectronic points (pI) were acidic. When the amino acid composition of the studied enzyme is examined, it is seen that it consists of 17.4% negatively charged amino acids, and the theoretical pI is 4.53. These results prove that the serine protease Do-like HtrA enzyme is a halophilic enzyme. It was observed that enzyme activity was not affected in the existence of isopropanol, and there was no significant decrease in enzyme activity in the presence of butanol, ethanol, and DMF (Dimethyl formamide). In the presence of acetone, hexane, glycerol, and DMSO (Dimethyl sulfoxide), it was determined that the enzyme activity decreased below 50%. To investigate the stability in organic solvents, the enzyme was incubated in the relevant solvent for 1 hour. As a result, it was observed that the enzyme could not maintain its stability in organic solvents. In addition, the effects of different metal ions on the enzyme were examined. It has been demonstrated that the presence of Mg2+, Ca2+, and K+ particularly increases enzyme activity. These findings are consistent with other studies on halophilic serine proteases in the literature. On the other hand, it was revealed that 5 mM concentrations of Mn2+, Co2+, and Ni2+ ions completely stopped the activity. When the enzyme activity was examined in the existence of different detergents, it was observed that the enzyme activity was not seriously affected in the existence of SDS, while the enzyme activity was reduced by 50% in the existence of Tritonx-100 and tween 20 detergents. When the effect of different enzyme inhibitors on the enzyme is examined, it is observed that the enzyme activity is inhibited, especially in the presence of PMSF. It also proves that the enzyme is a serine hydrolase group enzyme. On the other hand, as the Serine protease Do-like HtrA is a bifunctional enzyme, its potential to bind to the reduced lysozyme enzyme was examined in the experiment on chaperone activity, which is its second function. Experiments showed that the Serine protease Do-like HtrA binds to lysozyme. However, the data are not satisfactory to comment on whether it can fold the lysozyme back into active state. Further analysis of chaperone activity is required. In conclusion, a new haloalkaliphilic subspecies was isolated from Acıgöl, and its biotechnological potential was revealed by sequencing the entire genome of this isolate. A new biotechnologically important halo-alkaline serine protease of Virgibacillus sp. AGTR was produced recombinantly and the enzyme optimum activity conditions were characterized.

Benzer Tezler

Tez No
859865
Modeling of the marine diesel engines with comparative machine learning methodologies
Gemi dizel motorların karşılaştırmalı makine öğrenmesi yöntemleri ile modellenmesi
MEHMET İLTER ÖZMEN
Doktora
İngilizce
2024
Gemi Mühendisliği İstanbul Teknik Üniversitesi
Gemi İnşaatı ve Gemi Makineleri Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. OSMAN AZMİ ÖZSOYSAL
Tez No
900268
Measuring and evaluating the maintainability of microservices
Mikroservislerin sürdürülebilirliğinin ölçülmesi ve değerlendirilmesi
RAHİME YILMAZ
Doktora
İngilizce
2024
Bilgisayar Mühendisliği Bilimleri-Bilgisayar ve Kontrol İstanbul Teknik Üniversitesi
Bilgisayar Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. FEZA BUZLUCA
Tez No
844748
Tsallis entropy based feature extraction from insole force sensor data to diagnose vestibular system disorders
Vestibüler sistem bozukluklarının tanısı için tabanlık kuvvet algılayıcıları verilerinden tsallis entropisi tabanlı öznitelik çıkarımı
HARUN YAŞAR KÖSE
Yüksek Lisans
İngilizce
2023
Mekatronik Mühendisliği İstanbul Teknik Üniversitesi
Mekatronik Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. SERHAT İKİZOĞLU
Tez No
625724
Ön çapraz bağ cerrahisinde kullanılan transtibial ve anatomik femoral tek tünel yöntemlerinin kinematik ölçümlerinin değerlendirilip karşılaştırılması
Evaluation and comparison of kinematic measurements of transtibial and anatomic femoral single tunnel methods used in anterior cruciate ligament surgery
KORAY BAŞDELİOĞLU
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2016
Ortopedi ve Travmatoloji Balıkesir Üniversitesi
Ortopedi ve Travmatoloji Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. GÖKHAN MERİÇ
Tez No
308653
Nail Abbas Sayar: Hayatı, edebî kişiliği ve eserleri üzerine bir araştırma
Nail Abbas Sayar: Life, people and literary works on a research
RAMİS KARABULUT
Doktora
Türkçe
2011
Türk Dili ve Edebiyatı Kırıkkale Üniversitesi
Türk Dili ve Edebiyatı Ana Bilim Dalı
PROF. DR. NÂZIM HİKMET POLAT

Geri Dön