Isocation and biochemical characterization of alfa-amylase inhibitör from common bean (phaseolus vulgaris L.)
Alfa-amilaz inhibitörünün fasulyeden izolasyon ve biyokimyasal karakterizasyonu
- Tez No: 93079
- Danışmanlar: PROF. DR. HÜSEYİN AVNİ ÖKTEM, PROF. DR. OKTAY GÜRKAN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Fasulye, böcek direnci, ct-amilaz enzimi, cc-amilaz enzim inhibitörü, transgenik bitki teknolojisi. vııı ne. yükseköğretim kuru lu DOKÛMAIOASYON MERKEZİ, Common bean, insect resistance, a-amylase enzyme, a- amylase inhibitor, transgenic plant technology
- Yıl: 2000
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Orta Doğu Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 131
Özet
oz a-AMİLAZ İNHİBİTÖRÜNÜN FASULYEDEN İZOLASYON VE BİYOKİMYASAL KARAKTERİZASYONU (Phaseolus vulgaris L.) Akyol, Zeynep Yüksek Lisans., Biotekhnoloji Anabilim Dalı Tez Yöneticisi: Prof. Dr. Hüseyin Avni Öktem Ortak Tez Yöneticisi: Prof. Dr. Oktay Gürkan Temmuz 2000, 109 sayfa Bitkilerdeki en önemli direnç proteinlerinden bir tanesi ot amilaz inhibitörleridir (a Al). Zararlı tarafından alındığı zaman, a-amilaz aktivitesini bloke edip, nişasta sindirimini durdurmakta, sonuç olarak da zararlının ölümüne sebep olmaktadır. Fasulye, (Phaseolus vulgaris L.) en önemli ccAI depolarından biri olarak bilinmektedir. vıBu araştırma, yerli bir fasulye çeşidi olan Şehirali tohumlarından ocAI izolasyonu ve biyokimyasal karakterizasyonu üzerine yoğunlaşmaktadır. İlk olarak oc-amilaz enzimi ve aAI için kullanılacak olan spektrofotometrik ve aktivite boyaması deneyleri optimize edilmiştir. Bu çalışmalar inhibitörün oc-amilaz enzimi üzerindeki etkisini gösterebilmesi için gereken en uygun koşullan belirleyebilmek için kullanılmışlardır. Deneyler sonucunda oc-amilaz inhibitörünün oc-amilaz enzimi üzerindeki negatif etkisinin konsantrasyon, zaman ve ısıya bağımlı olduğu bulunmuştur. Optimize edilmiş koşullarda, 2 ünite oc- amilaz enziminin, 200 ug inhibitörle 30°C de 30 dakika bekletilmesi halinde, etkisini tamamen kaybettiği gözlenmiştir. Aynı koşullarda nohut ve mercimekten aynı yöntemle izole edilmiş inhibitörler oc-amilaz üzerinde aynı etkiyi göstermemişlerdir. Bir sonraki adımda, İzole edilmiş olan inhibitörün ısya ve sindirim enzimlerine karşı dayanıklılığı test edilmişdir. Bu çalışma sonucunda oc-amilaz inhibitörünün, ısıya dayanıklı bir protein olduğu ve 70°C de 20 dakika inkübasyonda bile etkisini kaybetmediği görülmüştür. Bu değerlerin üzerindeki inkübasyonlar inhibitörün etkisini düşürmektedir. vııcc-amilaz inhibitörütıün tripsin sindiriminedirençli olduğu, fakat kimotripsin sindirimine direnç gösteremediği de bulunmuştur. Bu çalışmanın sonuçlan aAI lerinin böcek sindirim sistemindeki cc-amilaz enzimlerine etkisi üzerine yapılacak yeni çalışmalara ışık tutacağı düşünülmektedir. Buna bağlı olarak, gen mühendisliği metodları kullanılarak cc-amilaz geninin hedef bitkilere aktarılması ve bu transgenik bitkilerde böceklere karşı direnç sağlanabilmesi, planlanan araştırmalar arasındadır.
Özet (Çeviri)
ABSTRACT ISOLATION AND BIOCHEMICAL CHARACTERIZATION OF a-AMYLASE INHIBITOR FROM COMMON BEAN (Phaseolus vulgaris L.) Akyol, Zeynep M.Sc, Department of Biotechnology Supervisor: Prof. Dr. Hüseyin Avni Öktem Co-supervisor: Prof. Dr. Oktay Gürkan July 2000, 109 pages One of the most important natural defense proteins in plants is cc- amylase inhibitor (ocAI). Upon ingestion, the inhibitor blocks a-amylase activity in insect midgut, which in turn abolish starch digestion leading to mortality. Common bean (Phaseolus vulgaris L.) is one of the most important reservoirs for a-amylase. iiiThis research focused on isolation and biochemical characterization of ccAI from a local variety (ev. Şehirali) of common bean. ocAI was extracted from seed flours of common bean with 0.02 M sodium phosphate buffer (PBS) solution. The proteins were precipitated with ammonium sulfate (AS) saturation varying from 20% to 60%, the precipitate was dissolved in the same buffer and dialyzed. This partially purified inhibitor protein preparation was used in enzymatic analysis. As the first step, the assays were optimized. Methods which included spectrophotometric and activity staining assays for a-amylase and aAI activity. These assays were employed to evaluate optimum conditions to study the inhibitory action of ocAI on porcine pancreatic amylase. The inhibitory action of aAI on a-amylase activity was found to be concentration, time and temperature-dependent. Under optimized conditions, for complete inhibition of 2 Units of a-amylase activity; 200 ug of aAI extract had to be pre-incubated with the enzyme for 30 minutes at 30°C. Under similar conditions, the extracts isolated from lentil and chickpea failed to exhibit inhibitory action on a-amylase. The isolated inhibitor was further characterized with respect to its thermostability and susceptibility to proteolytic enzymes. It was found that aAI from our common bean is a heat-stable protein that exhibits inhibitory action even after 20 minutes of treatment at 70°C. aAI was also found to be completely resistant to trypsin and completely sensitive to chymotrypsin digestion, respectively. ivThe results of this study will constitute a basis to further research on the action of aAI against insect midgut a-amylase enzymes thus promoting the research towards engineering target plants with a-amylase gene, with the aim of developing insect resistant transgenic plants.
Benzer Tezler
- Heterotrimeric G-protein alpha (α) subunit from A. thaliana (AtGPA1)) forms trimeric structures in solution
A. thaliana G-proteini alfa (α) altbirimi (AtGPA1) bulunduğu ortamlarda trimerik yapılar oluşturur
ERSOY ÇOLAK
Yüksek Lisans
İngilizce
2016
BiyofizikSabancı ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyomühendislik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ZEHRA SAYERS
- İnsan göbek kordonu stroması kaynaklı kök hücrelerin in vitro koşullarda gerçekleştirdiği hücresel dönüşümün epitel mezenkim geçişi çerçevesinde değerlendirilmesi
The assessment of cellular transformation in view of epithelial-mesenchymal transition of human umbilical cord-derived stromal stem cells upon in vitro culture conditions
HAKAN COŞKUN
- Streptomyces yokosukanensis ATCC 25520'de δ-aminolevulinik asit dehidrataz enziminin biyokimyasal karakterizasyonu
Isolation and biochemical characterization of δ-aminolevulinic acid dehydratase from Streptomyces yokosukanensis ATCC 25520
ŞENGÜL AKSAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2006
BiyolojiAfyon Kocatepe ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF.DR. MUHSİN KONUK
- Bahçe atıklarından izole edilen Bacillus pumilus ND8'in selülazı ve biyokimyasal karakterizasyonu
Partial purification and biochemical characterization of cellulase from Bacillus pumilus ND8 isolated from garden waste
WALEED SALIH SALMAN AL DAHLUZ
Yüksek Lisans
Türkçe
2024
BiyoteknolojiAtatürk ÜniversitesiTarımsal Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. NESLİHAN DİKBAŞ
- Termofilik Anoxybacillus ayderensis ksilanazının klonlanması, üretimi, saflaştırılması ve biyokimyasal karakterizasyonu
Clonig, production, purification, and biochemical characterization of thermophilic xylanase from Anoxybacillus ayderensis
ZÜLEYHA AKPINAR
Doktora
Türkçe
2024
BiyokimyaRecep Tayyip Erdoğan ÜniversitesiSu Ürünleri Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ HAKAN KARAOĞLU