Mitokondriyal dinamiklerdeki değişimlerin kanser indüklü M2 makrofaj polarizasyonundaki etkisi
The effect of changes in mitochondrial dynamics on cancer-induced M2 macrophage polarization
- Tez No: 935482
- Danışmanlar: PROF. DR. OSMAN NURİ KELEŞ
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Histoloji ve Embriyoloji, Histology and Embryology
- Anahtar Kelimeler: H446, makrofaj polarizasyonu, mitokondriyal dinamikler, THP-1, H446, macrophage polarization, mitochondrial dynamics, THP-1
- Yıl: 2025
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Atatürk Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 90
Özet
Amaç: Bu çalışmada, akut monoblastik lösemi hücre hattı (THP-1) ve küçük hücreli akciğer kanseri (H446) hücre hatlarının ko-kültüründe, makrofajlarda MFN-2 (mitofusin-2) gen ifadesi siRNA ile baskılanarak makrofajlarda meydana gelen mitokondriyal dinamiklerdeki değişimler ve bu değişimlerin M1 ve M2 makrofaj polarizasyonu ve fonksiyonları üzerine etkileri araştırıldı. Materyal ve Metot: THP-1 kaynaklı M0 makrofajları siKontrol (monokültür), siMFN-2 (monokültür siMFN-2) , ko-kültür ve ko-kültür siMFN-2 gruplara ayrıldı. Kokültür ve ko-kültür siMFN-2 gruplarındaki M0 makrofajlar H446 hücreleri ile indirekt kültür edildi. Aynı zamanda ko-kültür siMFN-2 ve monokültür siMFN-2 gruplarındaki M0 makrofajlarda siRNA ile MFN-2 geni knockdown edildi. M0, M1 ve M2 makrofaj polarizasyonları CD14, CD86 ve CD206 gen ekspresyonları ölçülerek belirlendi. Makrofajlardaki mitokondriyal dinamiklerdeki yönelimler MFN-2 ve Drp1 ekspresyonları ve immünfloresan boyama ile belirlendi. Makrofaj polarizasyonu ile ilgili sitokinler olan TNF-α ve IL-10 seviyeleri ELİSA yöntemi ve inflamatuar proteinler olan TLR-4 ve NLRP6 gen ekspresyonları RT-PCR ile analiz edildi. Bulgular:. MFN-2 geninin siRNA yöntemi ile baskılandığı M0 hücrelerde M2 markeri olan CD206 ekspresyonun azaldığı ve M1 markeri olan CD86 ekspresyonun arttığı gözlemlendi. Ayrıca H446 hücreleri ile yapılan ko-kültürde M0 hücrelerinin CD206 ekspresyonunun büyük oranda arttığı ve CD86 ekspresyonunun azaldığı gösterilmiştir. MFN-2 knockdown yapılmış M0 hücrelerinin H446 hücreleri ile kokültür edilmesinde ise M1 polarizasyonunun arttığı ve M2 polarizasyonunun azaldığı tespit edildi. Sonuç: Çalışmamız kanser mikroçevresindeki makrofajlarda mitokondriyal fisyon aracılığıyla M0'dan M1'e fenotip değişimde literatürde daha önce tanımlanmayan yeni bir mekanizma ortaya koymaktadır. Ayrıca, KHAK mikroçevresindeki immün yanıtların modülasyonu için MFN-2'nin potansiyel bir tedavi seçeneği olabileceğini vurgulanmaktadır.
Özet (Çeviri)
Aim: This study aims to investigate the changes in mitochondrial dynamics in macrophages and their effects on M1 and M2 macrophage polarization and functions, by silencing MFN-2 (mitofusin-2) gene expression using siRNA in a co-culture system of acute monoblastic leukemia (THP-1) and small cell lung cancer (H446) cell lines. Material and Method: THP-1-induced M0 macrophages were divided into siControl (monoculture), siMFN-2 (monoculture siMFN-2), co-culture and co-culture siMFN-2 groups. M0 macrophages in co-culture and co-culture siMFN-2 groups were indirectly cultured with H446 cells. At the same time, MFN-2 gene was knocked down with siRNA in M0 macrophages in co-culture siMFN-2 and monoculture siMFN-2 groups. M0, M1 and M2 macrophage polarizations were determined by measuring CD14, CD86 and CD206 gene expressions. The trends in mitochondrial dynamics in macrophages were determined by MFN-2 and Drp1 expressions and immunofluorescence staining. The levels of TNF-α and IL-10, cytokines related to macrophage polarization, were analyzed by the ELISA method, and the gene expressions of inflammatory proteins TLR-4 and NLRP6 were analyzed by RT-PCR. Results: In M0 cells in which the MFN-2 gene was suppressed by siRNA, it was observed that the expression of the M2 marker CD206 decreased and the expression of the M1 marker CD86 increased. In addition, it was shown that the expression of CD206 in M0 cells was significantly increased and the expression of CD86 decreased in co-culture with H446 cells. In co-culture of MFN-2 knockdown M0 cells with H446 cells, it was determined that the M1 polarization increased and the M2 polarization decreased. Conclusion: Our study reveals a new mechanism not previously described in the literature for the phenotype change from M0 to M1 via mitochondrial fission in macrophages in the cancer microenvironment. It also emphasizes that MFN-2 may be a potential treatment option for modulation of immune responses in the SCLC microenvironment.
Benzer Tezler
- Hepatoselüler karsinoma hücre hatlarının fenotipik farklılaşmasında hücre içi kalsiyumun işlevi
Role of intracellular calcium on phenotypic differentiation of hepatocellular carcinoma cell lines
BİLGE KARAÇİÇEK
Doktora
Türkçe
2017
BiyoteknolojiEge ÜniversitesiKök Hücre Ana Bilim Dalı
DOÇ. YASEMİN ERAÇ
PROF. METİNER TOSUN
- Nikotinamid mononükleotid (NMN) ve nikotinamid ribozid (NR) ile mitokondriyal stres inhibisyonunun orta yaşlı sıçanlarda anovulasyon üzerine etkilerinin araştırılması
Investigation of effects of mitochondrial stress inhibition by nicotinamide mononucleotide (NMN) and nicotinamide riboside (NR) on anovulation in middle-aged rats
NAZLI PINAR ARSLAN
Doktora
Türkçe
2022
Histoloji ve EmbriyolojiAtatürk ÜniversitesiHistoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. OSMAN NURİ KELEŞ
- Sıçanlarda valproik asit ile oluşturulan otizm modelinde mitokondriyal dinamiklerin gelişimsel süreçte incelenmesi
Investigation of mitochondrial dynamics in the development process in the autism model created with valproic acid in rats
SAMED ÖZER
Doktora
Türkçe
2022
FizyolojiAcıbadem Mehmet Ali Aydınlar ÜniversitesiFizyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. GÜLDAL SÜYEN
- Age and gender alter synaptic proteins in zebrafish (Danio rerio) models of normal and delayed aging
Yaş ve cinsiyetin normal ve geciktirilmiş yaşlanma zebrabalığı (Danio rerio) modellerinde sinaptik proteinleri değiştirmesi
ELİF TUĞCE KAROĞLU
Yüksek Lisans
İngilizce
2017
Nörolojiİhsan Doğramacı Bilkent ÜniversitesiNörobilim Bilim Dalı
DOÇ. DR. MICHELLE MARIE ADAMS
- Association of mitochondrial DNA copy number variations in triple negative breast cancer patients
Mitokondriyal DNA kopya sayısı değişimleri ile üçlü negatif meme kanseri arasaındaki ilişki
KARİN MANTO
Yüksek Lisans
İngilizce
2024
BiyolojiAcıbadem Mehmet Ali Aydınlar ÜniversitesiGenom Çalışmaları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. UĞUR ÖZBEK
DOÇ. CEMALİYE AKYERLİ BOYLU