Çölyak hastalığında kullanılmak üzere anti-gliadin antikorunun tayini için sensör ve assay sistemlerinin geliştirilmesi
Development of sensor and assay systems for the determination of anti-gliadin antibodies for use in celiac disease
- Tez No: 939719
- Danışmanlar: PROF. DR. DERYA KOYUNCU ZEYBEK
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Anti-gliadin Antikoru, Çölyak hastalığı, ELISA, Gliadin, İmmünosensör, Sentetik Serum, Anti-gliadin Antibody, Celiac disease, ELISA, Gliadin, Immunosensor, Synthetic Serum
- Yıl: 2024
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Kütahya Dumlupınar Üniversitesi
- Enstitü: Lisansüstü Eğitim Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 96
Özet
Bu tezde, sentetik serum kullanılarak, Çölyak hastalığında bir belirteç olan anti-gliadin antikorunun (AGA) tespiti için immünosensör ve immünoassay (ELISA) sistemleri geliştirildi. İlk kısımda, camsı karbon elektrot (GCE), grafen nanotabaka (GNP), Fe3O4 ve kitosan (CHI) ile modifiye edildi. Bu elektroda, gliadin immobilize edildi ve bağlanmayan bölgeler BSA ile bloke edildi. GCE/GNP-Fe3O4-CHI/Gliadin/BSA immünosensör, farklı derişimlerde AGA ile inkübe edildi ve redoks probu içerisinde cevaplar kaydedildi. Etiketsiz immünosensörün, Taramalı Elektron Mikroskobi (SEM) tekniği ile yüzey ve dönüşümlü voltametri (CV), elektrokimyasal empedans spektroskopisi (EIS) ve diferansiyel puls voltametrisi (DPV) teknikleri ile elektrokimyasal özellikleri karakterize edildi. Çalışma koşulları çalışıldı ve tekrar kullanılabilirliği araştırıldı. Çalışma aralığı 0,01-10000 ng mL-1 olarak belirlendi. Tezin ikinci kısmında ise enzim bağlı immünosorbent assay (ELISA) tekniğine dayanan bir immünoassay formatı hazırlandı. Mikroplakalar, gliadin ile kaplandı. İnkübasyon sonrasında, BSA ile blokasyon uygulandı. Bir saat sonunda belli derişimlerde AGA eklendi ve inkübasyona bırakıldı. Horseradish peroksidaz etiketli ikincil antikor (HRP-Anti-gliadin Ab) ilave edildi ve bir saat inkübasyona bırakıldı. Bu aşamaların her birinin sonunda üçer kez yıkama adımı uygulandı. HRP substratı, 3,3′,5,5′-Tetrametilbenzidin (TMB) kuyucuklara ilave edildi ve renk değişimi için yaklaşık 15 beklenildi. Son işlem olarak, yıkama uygulanmadan, sonlandırma çözeltisi eklendi ve FLUOstar Omega cihazı ile 450 nm de absorbans değerleri kaydedildi. Doğrusal çalışma aralığı 0,01-1000 ng mL-1 olarak belirlendi. Hazırlanan tayin sistemleri kullanılarak sentetik serumda anti-gliadin antikorunun tayini yapıldı ve % geri kazanım değerleri belirlendi.
Özet (Çeviri)
In this thesis, immunosensor and immunoassay (ELISA) systems were developed for the detection of anti-gliadin antibody (AGA), a marker in Celiac disease, using synthetic serum. In the first part, the glassy carbon electrode (GCE) was modified with graphene nanosheet (GNP), Fe3O4, and chitosan (CHI). Gliadin was immobilized on this electrode and unbound regions were blocked with BSA. The GCE/GNP-Fe3O4-CHI/Gliadin/BSA immunosensor was incubated with different concentrations of AGA, and responses were recorded in the redox probe. The surface of the label-free immunosensor was characterized by the Scanning Electron Microscopy (SEM) technique and its electrochemical properties by cyclic voltammetry (CV), electrochemical impedance spectroscopy (EIS), and differential pulse voltammetry (DPV) techniques. Working conditions were studied, and reusability was investigated. The working range was determined as 0.01-10000 ng mL-1. In the second part of the thesis, an immunoassay format based on the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) technique was prepared. Microplates were coated with gliadin. After incubation, blockade was applied with BSA. After one-hour, certain concentrations of AGA were added and incubated. Horseradish peroxidase labeled secondary antibody (HRP-Anti-gliadin Ab) was added and incubated for one hour. At the end of each of these steps, three washing steps were performed. HRP substrate, 3,3′,5,5′-Tetramethylbenzidine (TMB) was added to the wells and waited for approximately 15 minutes for color change. As a final step, a stop solution was added without washing, and absorbance values were recorded at 450 nm with the FLUOstar Omega device. The linear working range was determined as 0.01-1000 ng mL-1. Anti-gliadin antibody was determined in synthetic serum using the prepared detection systems, and % recovery values were determined.
Benzer Tezler
- Çölyak hastalığı ile immün yanıt arasındaki ilişkinin meta analizi
Meta analysis of the relationship between celiac disease and immune response
ÖZGÜL ÖZER
Doktora
Türkçe
2022
Biyoistatistikİstanbul ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. EMİNE ŞEKÜRE NAZLI ARDA
- İnflamatuar bağırsak hastalığının hücresel ve hümoral immünite yönünden değerlendirilmesi
The evaluation of relationship inflammatory bowel diseases with cellular and humoral immunity
PINAR GÜZELAY
Doktora
Türkçe
2006
Allerji ve İmmünolojiİstanbul ÜniversitesiMikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF.DR. SELİM BADUR
- Büllöz pemfigoid hastalarında alerjenlerle ilişkili spesifik IgE'lerin araştırılması
Investigation of allergen-associated specific IgEs in Bullous pemphigoid patients
SANEM ÇOLAK
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2024
DermatolojiAtatürk ÜniversitesiDeri ve Zührevi Hast. Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MEHMET MELİKOĞLU
- Yeni tanı alan çölyak hastalarında tedavi öncesi ve sonrası hepsidin düzeylerinin karşılaştırılması
Comparison of newly diagnosed celiac patients before and after treatment in the hepcidin level
GÜLŞAH EFECİK
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2016
GastroenterolojiPamukkale Üniversitesiİç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. MUSTAFA ÇELİK
- Gliadin detoksifiye edici biyoteknolojiler geliştirilmesi
Development of gliadin detoxifying biotechnologies
AYTEN ORAL
Yüksek Lisans
Türkçe
2024
BiyokimyaEskişehir Teknik ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ÖZLEM ÜNLÜER